李 薇，黃春梅，吳 衛(wèi)，胡瑩瑩，陳 倩，郭 野，張玉娟，崔 巍

中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科， 北京 100730

·論 著·

糖化血紅蛋白濃度的短期生物學變異

李 薇，黃春梅，吳 衛(wèi)，胡瑩瑩，陳 倩，郭 野，張玉娟，崔 巍

中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科， 北京 100730

目的 研究糖化血紅蛋白(glycated hemoglobin-A1c,HbA1c)濃度短期內的生物學變異。 方法 30名健康志愿者在第1天、第3天和第5天的上午8∶00、中午12∶00和下午4∶00分別采集靜脈血，進行HbA1c濃度的測定。分析計算HbA1c濃度的個體內變異(within-subject coefficient of variations, CVI)、個體間變異(between-subject coefficient of variations, CVG)、分析變異(analytical coefficient of variations, CVA)、個體指數(shù)(index of individuality，II)和參考變化值(reference change value，RCV)。結果 總體、女性及男性CVI分別為1.39%、1.49%和1.32%；CVG分別為2.65%、2.33%和2.90%；CVA均為0.6%；II分別為0.5、0.6和0.5；95% RCV分別為4.22%、4.45%和4.02%；99% RCV分別為5.19%、5.86%和5.29%。HbA1c上午8∶00、中午12∶00和下午4∶00的日內變異差異無統(tǒng)計學意義(P=0.28)；第1天、第3天和第5天的周內日間變異差異無統(tǒng)計學意義(P=0.31)；男女性別間差異亦無統(tǒng)計學意義(P=0.18)。結論HbA1c濃度的日內和周內日間生物學變異很小，結果相對穩(wěn)定，男性和女性之間亦無明顯差異。

糖化血紅蛋白；生物學變異

MedJPUMCH,2014,5(3):270-272

糖化血紅蛋白(glycated hemoglobin-A1c,HbA1c)是血紅蛋白與糖類經非酶促反應而形成的結合產物，其合成過程是緩慢而不可逆的，與血糖濃度成正比，且不受一次偶爾血糖升高或降低的影響。HbA1c的這一特點決定其在糖尿病監(jiān)測中的重要意義，它可以反映測定前2～3個月內機體平均血糖水平，是糖尿病患者血糖總體控制的監(jiān)測指標，可以指導對血糖的調整。因此，近年來美國糖尿病協(xié)會(American Diabetes Association, ADA)和世界衛(wèi)生組織(World Health Organization, WHO)都已經建議將HbA1c作為優(yōu)于糖耐量的糖尿病診斷指標。

目前研究證實HbA1c可以穩(wěn)定可靠地反映出檢測前一段時間內人體的平均血糖水平，但有關HbA1c濃度在一天內不同時間甚至一周內的變化幅度，尚罕見報道。隨著HbA1c在糖尿病監(jiān)測中的意義日益突出，有必要了解HbA1c的生物學變異情況，為更好地運用HbA1c監(jiān)測血糖提供更多的實驗室參考數(shù)據(jù)。本研究旨在對HbA1c濃度的短期生物學變異進行分析。

對象和方法

對象

2013年8月至9月招募在北京協(xié)和醫(yī)院工作的健康志愿者30名，其中男性17名，女性13名，年齡23～34歲，中位年齡24歲。通過面談和健康問卷調查，確定所有入選志愿者均未服用任何藥物，無吸煙、飲酒等不良習慣；并通過血常規(guī)、血糖、腎功能、肝功能等常規(guī)生理常數(shù)檢查，確定入選志愿者為表觀健康者。志愿者抽血當日無劇烈運動，女性未在月經期和妊娠期，研究期間保持規(guī)律的生活習慣。所有入選志愿者均簽署知情同意書。

樣本采集和處理

研究對象每次采血前靜坐10～15 min后，抽取靜脈血2 ml于EDTA-K3抗凝的真空采血管中。采血時間點分別為研究第1天、第3天和第5天的上午8∶00(空腹)、中午12∶00、下午4∶00，每名對象一共被采集9次樣本。標本采集后于室溫保存，2～4 h內測定。

檢測方法

儀器與試劑：Variant Ⅱ Yurbo糖化血紅蛋白分析儀及其原裝試劑、校準品和質控品均為美國Bio-Rad公司產品。

HbA1c測定：嚴格按照儀器和試劑標準操作規(guī)程檢測標本，所用儀器的性能指標、室內質控和室間質評均符合臨床檢測需求。標本均采用同一臺儀器使用同批號試劑且在相同時間段內進行檢測。

統(tǒng)計學處理

采用SPSS 13.0軟件中的巢式方差分析計算HbA1c濃度的個體內變異(within-subject coefficient of variations, CVI)和個體間變異(between-subject coefficient of variations, CVG)。采用Excel 2003計算分析變異(analytical coefficient of variations, CVA)、個體指數(shù)(index of individuality，II)、參考變化值(reference change value，RCV)。CVA通過分別計算高值和低值質控品的10個獨立檢測值而獲得。II計算公式為II=CVI/CVG。RCV計算公式為RCV=21/2×Z×(CVA2+CVI2)1/2，當Z值為1.96和2.58時，分別代表95%和99%的概率。均值之間的兩兩比較采用One-way ANOVA檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

CVI、CVG、CVA、II和RCV

本研究總體、女性及男性的CVI分別為1.39%、1.49%和1.32%；CVG分別為2.65%、2.33%和2.90%；CVA值均為0.6%；II值分別為0.5、0.6和0.5；95% RCV分別為4.22%、4.45%和4.02%；99% RCV分別為5.19%、5.86%和5.29%。提示CVI、CVG和CVA的變化不大，差異較小。

日內變異、日間變異及性別間差異

HbA1c的日內變異：上午8∶00所測HbA1c均值為(5.35±0.15)%，中午12∶00為(5.35±0.16)%，下午4∶00為(5.32±0.16)%，3個時間點的檢測值比較，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.28)。提示HbA1c濃度的日內變異很小，結果相對穩(wěn)定。

HbA1c的日間變異：研究第1天所測HbA1c均值為(5.36±0.17)%，第3天為(5.34±0.16)%，第5天為(5.32±0.15)%，3日間的檢測值比較，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.31)。提示HbA1c濃度的日間變異很小，結果相對穩(wěn)定。

HbA1c的性別間差異：男性HbA1c均值為(5.37±0.17)%，女性為(5.32±0.14)%，男女間的檢測值比較，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.18)。提示HbA1c濃度的性別間差異很小。

討 論

個體內生物學變異是決定實驗室指標檢測結果準確性和可靠性的重要因素之一。本研究通過嚴格控制分析前和分析中的各項影響因素，在確保分析前變異和分析變異最小化的前提下，分析了HbA1c的短期生物學變異。本研究參考了Fraser等[1]和Harris[2]的計算方法，通過研究健康人群日內和周內的HbA1cCVI、CVG和CVA，并計算Ⅱ和RCV，從而確定參考區(qū)間的實用性和判斷連續(xù)檢測結果之間是否有統(tǒng)計學差異，探討短期生物學變異對HbA1c檢測及結果的影響。目前關于HbA1c生物學變異的研究罕見報道[3- 5]，而關于中國人群的HbA1c生物學變異研究尚未見報道。Ucar等[3]研究的是相對長期的生物學變異，即每個月進行一次樣本采集，連續(xù)監(jiān)測3個月。該研究總體、女性及男性的CVI分別為1.17%、1.23%和1.04%；CVG分別為5.58%、5.75%和4.75%；CVA分別為1.60%、1.68%、1.43%；Ⅱ值分別為0.35、0.36和0.37；95% RCV分別為5.45%、5.76%和4.87%。本研究與之相比，HbA1c濃度的總體、女性及男性的CVI略高，而總體、女性及男性的CVG均較低，這可能與觀察時限和人種不同有關。本研究HbA1c濃度的Ⅱ值和Ucar等[3]報道的Ⅱ值差異較大，這可能與所采用的統(tǒng)計方法不同有關，后者Ⅱ的計算公式為 (CVA2+CVI2)1/2/CVG，而本研究采用的是目前常用的計算方法(Ⅱ=CVI/CVG)。當Ⅱ值小于0.6時，提示認為傳統(tǒng)以正常人群為基礎的參考范圍對個體檢測值異常與否的判斷能力非常有限；在這種情況下，連續(xù)隨訪患者的結果可能比使用參考范圍判斷更有效。相反地，當Ⅱ大于1.4時，則認為使用以正常人群為基礎的參考范圍判斷個體檢測值的異常與否很有效[2]。盡管本研究與Ucar等[3]報道的Ⅱ值存在差異，但均小于0.6，說明當個體的指標發(fā)生變化時，均不能用HbA1c的參考范圍來判斷相應變化有無臨床意義。RCV是用來判斷某一個體指標連續(xù)兩次檢測結果之間的差異(升高或降低)是否有統(tǒng)計學意義的指標。根據(jù)RCV的計算公式，筆者計算出了HbA1c的RCV，95%(P<0.05)和99%(P<0.01)水平的概率分別代表差異具有顯著性和高度顯著性[6]。如果計算兩次結果之間的變異值落在相應范圍內，可認為差異是由固有分析變異和個體內生物學變異造成，不具有統(tǒng)計學意義。RCV是通過CVA和CVI計算得到，本研究RCV小于Ucar等[3]的報道，原因可能是本研究的CVA明顯小于該研究的CVA所致。

綜上所述，HbA1c的日內和周內的生物學變異較小，血液濃度相對穩(wěn)定，男性和女性之間也不存在差異。說明HbA1c與抽血時間、抽血時是否空腹沒有關系，不受進餐時間以及短期生活方式改變的影響，所反映的血糖狀況相對穩(wěn)定，對于糖尿病控制是一個良好的監(jiān)測指標。

[1]Fraser CG, Harris EK. Generation and application of data on biological variation in clinical chemistry[J]. Crit Rev Clin Lab Sci,1989,27:409- 437.

[2]Harris KH. Effects of intra- and interindividual variation on the appropriate use of normal ranges[J]. Clin Chem,1974,20:1535- 1542.

[3]Ucar F, Erden G, Ginis Z, et al. Estimation of biological variation and reference change value of glycated hemoglobin (HbA1c) when two analytical methods are used[J]. Clin Biochem,2013,46:1548- 1553.

[4]Kilpatrick ES, Maylor PW, Keevil BG. Biological variation of glycated haemoglobin.Implications for diabetes screening and monitoring[J]. Diabetes Care,1998,21:261- 264.

[5]Rohlfing C, Wiedmeyer HM, Little R, et al. Biological variation of glycohemoglobin[J]. Clin Chem,2002,48:1116- 1118.

[6]Fraser CG. Biological variation: from principles to practice[M]. Washington DC: AACC Press, 2001.

Short-term Biological Variation of Glycated Hemoglobin-A1c

LI Wei, HUANG Chun-mei, WU Wei, HU Ying-ying, CHEN Qian, GUO ye, ZHANG Yu-juan, CUI Wei

Department of Clinical Laboratory, Peking Union Medical College Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences &Peking Union Medical College, Beijing 100730, China

CUI Wei Tel: 010-69159713, E-mail:cuiw@pumch.cn

Objective To study the short-term biological variation of glycated hemoglobin-A1c (HbA1c). Methods Blood samples from 30 healthy volunteers [17 men and 13 women; aged 23-34 years (median, 24 years)] were drawn at 8∶00 am, 12∶00 pm， and 4∶00 pm each day for 3 days (days 1, 3 and 5), and HbA1cvalues were measured in duplicate by high performance liquid chromatography (Variant Ⅱ Yurbo Analyser, Bio-Rad). Results The within-subject coefficient of variations (CVI) of total, male, and female subjects in this study were 1.39%, 1.49%, and 1.32%, respectively. The between-subject coefficient of variations (CVG) of the three groups mentioned above were 2.65%, 2.33%, and 2.90%, respectively. The analytical coefficient of variations (CVA) of these three groups were all 0.6%. The index of individuality (II) of the three groups were 0.5, 0.6, and 0.5, respectively. The 95% probabilities of reference change value (RCV) of the three groups were 4.22%, 4.45%, and 4.02%, respectively. The 99% probabilities of RCV were 5.19%, 5.86%, and 5.29%, respectively. Furthermore, intra- and inter-day biological variations of HbA1cwere fairly constant among the population examined(P=0.28,0.31), and no significant difference was observed between the male and female participants(P=0.18). Conclusions The short-term CVIand CVGof HbA1cin healthy individuals are minimal. The laboratory findings are quite constant and homogeneous for HbA1cin short term and between genders.

glycated hemoglobin-A1c; biological variation

崔 巍 電話：010-69159713，E-mail：cuiw@pumch.cn

R446

A

1674-9081(2014)03-0270-03

10.3969/j.issn.1674-9081.2014.03.005

2014- 04- 30)