紫杉醇注射液對一次性使用精密輸液器中鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯的溶出作用

張虹 楊鳳敏 吳靜 沈剛 楊月陽 劉炳榮 張淼 唐亞林

1 中國科學(xué)院化學(xué)研究所 （北京 100190）

2 北京康健源科技有限公司 （北京 100055）

3 北京國醫(yī)械華光認(rèn)證有限公司 （北京 100011）

4 江西三鑫醫(yī)療科技股份有限公司 （南昌 330200）

0.前言

鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）是聚氯乙烯（PVC）一次性使用醫(yī)療器械中比較常見的增塑劑之一。DEHP 可以提高塑料的柔軟性和耐寒性，降低軟化溫度，改善加工性能。DEHP 的急性毒性很小，但其亞急性毒性動物試驗顯示能導(dǎo)致體重減輕、白細(xì)胞計數(shù)增高、血紅蛋白值下降、血尿等，特別是對肝腎功能與生殖功能具有不良影響。另外，DEHP 可導(dǎo)致胎兒死亡率及胎兒畸形率明顯增加。因此，需要對PVC 醫(yī)療器械中DEHP 的溶出量進行檢測，用以確保PVC 醫(yī)療器械產(chǎn)品在臨床應(yīng)用中的安全性。近期研究表明，脂溶性藥液可以導(dǎo)致PVC 產(chǎn)品中DEHP 的溶出。

紫杉醇（PacLitaxeL，商品名TaxoL，TAX）是當(dāng)前公認(rèn)的廣譜、強活性的抗癌藥物之一，它既是卵巢癌和乳腺癌的一線藥物，也是腫瘤晚期行之有效的化療藥物。在臨床上由于紫杉醇不溶于水，其制劑常為聚氧乙烯蓖麻油(Cremphor EL)-無水乙醇（50:50，v/v）等體積混合溶液。在紫杉醇的說明書中，明確“滴注紫杉醇時應(yīng)采用非聚氯乙烯材料的輸液瓶和輸液器”，主要是由于聚氧乙烯蓖麻油為表面活性劑，能夠溶解聚氯乙烯（PVC）輸液器中所含的增塑劑[1-3]，臨床使用過程中存在一定的風(fēng)險。同時也有文獻報道，使用PVC 材質(zhì)的輸注器具輸注紫杉醇會造成一定的藥液吸附，導(dǎo)致藥效下降。鑒于此，本實驗選用臨床常用的紫杉醇注射液，作為模擬臨床使用最為惡劣的極限條件，研究該藥液對PVC 產(chǎn)品中DEHP 的溶出情況，旨在用于評價PVC 產(chǎn)品的安全性提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和檢測方法。

1.材料與方法

1.1 試劑與儀器

乙醇（色譜純，百靈威），純水（MiLLiQ 超純水），DEHP 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（Fluka，批號：SZB8301XV，編號：36735-1G），紫杉醇注射液（5mL:30mg，四川升和藥業(yè)股份有限公司），分析天平（METTLER TOLEDO AB135-S），高效液相色譜（Shimadzu 20A），一次性使用精密輸液器（江西三鑫醫(yī)療科技股份有限公司批號：100902）。

1.2 浸提液的制備

參照紫杉醇注射液的藥品使用說明，按照藥物在臨床使用過程中的最高濃度進行配置。對于紫杉醇注射液，其臨床使用方法為每次120～210 mg，稀釋至0.3～1.2mg/mL，靜脈滴注3h。由此，實驗中將紫杉醇注射液用生理鹽水配置成1.2 mg/mL 的藥液對一次性使用精密輸液器產(chǎn)品中的DEHP 進行溶出實驗。

1.3 色譜條件

檢測器：紫外/可見光檢測器，檢測波長n = 272 nm；色譜柱：Sunfire C18, 5μm, 4.6 mm×250 mm；柱溫：室溫；流動相：甲醇-水（90-10）；流速：1.0 mL/min；進樣量：20 μL。

1.4 方法學(xué)研究

1.4.1DEHP 特征吸收波長的測定

精密稱取DEHP 標(biāo)準(zhǔn)品0.2 mg，用乙醇稀釋至4 mL，配制成約含50 μg /mL 的溶液，用紫外-可見分光光度計在200～400 nm 波長范圍內(nèi)進行波譜掃描，根據(jù)吸收光譜曲線確定DEHP 的HPLC 檢測波長（n）。

1.4.2 DEHP 保留時間的確定：

考慮到所用生理鹽水中也可能含有一定量的 DEHP，因此對這部分進行檢測，在測定樣品時扣除這部分的干擾，將空白的溶劑作為空白溶液。

稱取DEHP 適量，用乙醇稀釋配置得到100 μg /mL 的溶液作為對照品溶液。在1.3 色譜條件下分別將空白溶液、對照品溶液與測試溶液注入高效液相色譜，記錄色譜圖，得到DEHP 的出峰保留時間。

1.4.3DEHP 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取 DEHP 對照品適量，置于量瓶中，以乙醇為溶劑，配制濃度約為2 mg/mL 的DEHP 乙醇溶液，取此溶液5mL 置于50mL 量瓶中，用乙醇溶液稀釋至刻度作為儲備液。分別精確量取此溶液適量，置于量瓶中，用乙醇稀釋分別配制成濃度為200 μg/mL～0.11 μg/mL 的溶液作為供試品溶液。按照1.3 中色譜條件進樣測定，得到各個濃度的峰面積值。以樣品濃度（C）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進行線性回歸。

1.4.4 溶液穩(wěn)定性的測定

量取 DEHP 對照品適量（約10 mg），置10 mL 量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度。取此溶液1 mL 置10 mL 量瓶中用浸提液稀釋定容，分別在0 h、4 h、8h、12 h、24 h 小時，按照1.3 色譜條件對此溶液進行測定，考察峰面積的變化。

1.4.5 進樣精密度

取溶液穩(wěn)定性樣品，按照1.3 的色譜條件連續(xù)測定5 次，得到其峰面積，計算變異系數(shù)（RSD），考察實驗結(jié)果的重復(fù)性。

1.4.6 回收率

精密量取 DEHP 對照品適量（約相當(dāng)于DEHP 8 mg、10 mg 和12 mg），各3 份，分別置10 mL 量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度。取此溶液1mL 置10 mL 量瓶中用浸提3h 的供試品溶液稀釋定容，作為80%、100%、120%的供試溶液；另取DEHP 對照品適量（約10 mg），置10 mL 量瓶中，用乙醇溶液溶解并稀釋至刻度。取此溶液1 mL 置10 mL 量瓶中用乙醇溶液稀釋定容，作為對照溶液；以乙醇溶液作為空白溶液，以9 mL 浸提3h 的供試品溶液和1 mL 的乙醇混合溶液作為樣品溶液。分別取上述四種溶液，按照1.3 的色譜條件進行測定，計算3 種不同濃度溶液的回收率（%）。

1.5 供試液的制備和測定

紫杉醇注射液的臨床使用方法為每次 120～210 mg，稀釋至0.3～1.2 mg/mL，靜脈滴注3 h。按照該藥品臨床使用的最高濃度，我們將紫杉醇注射液用生理鹽水配置成1.2 mg/mL 的藥液對產(chǎn)品中的DEHP 進行溶出實驗。同時，為了能真實的反應(yīng)出紫杉醇注射液在臨床使用過程中對一次性使用輸液器產(chǎn)品的DEHP 溶出量，我們采用臨床使用的加藥方式，將1.2 mg/mL 的紫杉醇藥液保持在37±1?C 的條件下，自然滴注3h。在輸液器的末端用一密閉平底玻璃瓶收集浸提液，冷卻至室溫后用乙醇稀釋定容至500 mL 作為供試品。

2.結(jié)果與討論

2.1DEHP 特征吸收波長的確定

DEHP 的紫外吸收光譜圖，如圖1 所示。從圖中可以看出DEHP 在274 nm 處有最大吸收，選定274 nm 為檢測波長。

2.2 DEHP 的出峰保留時間

將 250mL 的生理鹽水在37±1?C 溫度下，通過自然滴注的方式通過一次性使用精密輸液器，滴注3h 后，收集流出液作為空白溶液。

將紫杉醇注射液用生理鹽水配置成1.2 mg/mL 的藥液，同樣保持在37±1?C 條件下，自然滴注3h。在輸液器的末端分別用一密閉平底玻璃瓶收集浸提液并冷卻至室溫，用乙醇稀釋定容至500 mL 作為測試品溶液。在1.3 色譜條件下分別將空白溶液、對照品溶液與測試溶液注入高效液相色譜，記錄色譜圖，得到DEHP 的出峰保留時間，如圖2 所示。

圖1. DEHP 的紫外吸收光譜

圖2. DEHP 的HPLC 保留時間（A：空白溶液；B：DEHP 對照品；C：樣品）

表1. DEHP 溶液濃度及對應(yīng)的峰面積

圖 3. DEHP 的標(biāo)準(zhǔn)曲線

實驗結(jié)果表明，空白溶液以及紫杉醇藥液對DEHP 的檢測無干擾。DEHP 對照樣品溶液的主峰保留時間為24.333 min，浸提3h 的測試溶液的主峰保留時間為 24.164 min，兩峰的保留時間基本一致，說明測試溶液的主峰為DEHP 的色譜峰，DEHP 的峰與鄰近的雜質(zhì)峰分離度良好。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

準(zhǔn)確稱取 DEHP 對照品適量，置于量瓶中，以乙醇為溶劑，配制濃度約為2 mg/mL 的DEHP 乙醇溶液，取此溶液5mL 置于50mL 量瓶中，用乙醇溶液稀釋至刻度作為儲備液。分別精確量取此溶液適量，置于量瓶中，用乙醇稀釋分別配制成濃度為200 μg/mL、140 μg/mL、100 μg/mL、60 μg/mL、20 μg/mL、5 μg/mL 和0.11 μg/mL 的溶液作為供試品溶液。按照1.3 的色譜條件，量取空白溶液和7 個濃度的供試品溶液各20μL 注入液相色譜儀，以樣品濃度（C）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進行線性回歸。 實驗結(jié)果表明，DEHP 在0.11-211.26μg/mL 濃度范圍內(nèi)，線性方程的R 值為0.9998，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 溶液穩(wěn)定性

取 DEHP 對照品適量（約10 mg），置10 mL 量瓶中，用乙醇溶解并稀釋至刻度。取此溶液1 mL 置10 mL 量瓶中用浸提液稀釋定容，分別在0h、4h、8h、12h、24h 用1.3 所述色譜方法對溶液進行測定，考察峰面積的變化，實驗結(jié)果見表2。實驗結(jié)果表明，溶液在室溫條件下放置24 小時，溶液穩(wěn)定性試驗中溶液峰面積的RSD 值為0.43%，小于2%，說明溶液穩(wěn)定性良好。

2.5 精密度

取溶液穩(wěn)定性下樣品，按照1.3 的色譜方法進行檢測，連續(xù)進樣5 次，計算RSD 值，結(jié)果見表3。實驗結(jié)果表明，按此方法重復(fù)測定樣品的峰面積， RSD 值為0.56%，小于2%，說明測定方法重復(fù)性良好。

2.6 回收率結(jié)果

回收率結(jié)果見表 5 和表6。9 份樣品溶出度的回收率平均值分別為100.23%、97.44%、100.77%，均在90.0%～110.0%之間，RSD 值為1.72%，回收率良好，表明本實驗采用的測量方法準(zhǔn)確度高，精確度好。

2.7 一次性使用精密輸液器產(chǎn)品DEHP 溶出量的檢測

利用 1.3 色譜方法，以紫杉醇注射液為浸提液對一次性使用精密過濾輸液器產(chǎn)品中的DEHP 溶出量進行測定，結(jié)果見表7 和表8 所示。1#樣品和2#樣品的DEHP 溶出量分別為17.63 mg/套（1#樣品）和20.14 mg/套（2#樣品），平均值為18.89 mg/套。

表2. 溶液穩(wěn)定性實驗結(jié)果

表4. 進樣精密度實驗結(jié)果

表5. 紫杉醇注射液的回收率對照實驗結(jié)果

表6. 紫杉醇注射液的回收率實驗結(jié)果

表7. 紫杉醇注射液對一次性使用精密過濾輸液器中DEHP 對照品實驗結(jié)果

表 8. 紫杉醇注射液對一次性使用精密過濾輸液器中DEHP 的溶出實驗結(jié)果

3.結(jié)論

聚氯乙烯（PVC）輸液器具有耐撞擊、不易破損、貯存運輸方便等優(yōu)點。但由于PVC 材料較硬，要制成輸液器必須加入增塑劑，例如鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）。近些年的研究報道，PVC 對人體健康存在潛在的危害性[4-6]。

為了盡可能模擬出該產(chǎn)品在臨床使用過程中DEHP 的最大溶出量，我們選用了目前廣泛應(yīng)用于臨床的紫杉醇注射液作為浸提液，對產(chǎn)品中DEHP 的溶出量進行檢測，并對檢測方法進行方法學(xué)驗證。在實驗過程中，為了模擬臨床最惡劣使用條件，我們選用了紫杉醇注射液臨床使用的最高濃度（1.2 mg/mL），并在37?C 條件下，采用自然滴注的方式進行浸提。

實驗結(jié)果表明，在以甲醇-水（90:10）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長為274nm 的色譜條件下，DEHP 的保留時間為24.333 min，可以與鄰近的雜質(zhì)峰分離度良好（分離度大于1.5）。該方法可以較為快捷的直接檢測紫杉醇注射液中的DEHP 含量。同時通過精密度、線性、回收率等實驗也證實，該實驗方法準(zhǔn)確度高、精密度好，可確保實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠。本次實驗測定的一次性使用精密過濾輸液器產(chǎn)品，在1.2mg/mL 的紫杉醇注射液中DEHP 溶出量為18.89mg/套。張恩娟等[3]收集重慶市9 所三甲醫(yī)院紫杉醇包裝中配套的輸液器，模擬臨床輸液過程，測定收集液中的DEHP。結(jié)果也表明，紫杉醇（濃度為0.48 mg/mL）對輸液器中的DEHP 具有較大溶出度。由上述可以看出，在臨床使用過程中，紫杉醇藥液對于PVC 輸液器中DEHP 具有較大溶出，因此在紫杉醇注射液在臨床使用過程中，應(yīng)盡可能使用非PVC 輸液器，以此確?；颊甙踩?。

[1] 張俊虎，林京.紫杉醇注射液加入軟包裝輸液中引起絮凝1 例.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002，22（3）：180.

[2] Kim J H，Yun J，Sohng J K，et a1.Di(2-ethylhexyl)phthalate leached from medical PVC devices serves as asubstrate and inhibitor for the P glycoprotein[J].Environ Toxicol Pharmacol，2007，23（3）：272-278.

[3] 張恩娟，陳琳，曹健.紫杉醇注射液配套輸液器中鄰苯二甲酸二辛酯的溶出性考察.中國藥房，2008，19（9）：698-700.

[4] US Food and Drug Administration: safety assessment of di(2-ethyLhexyL) phthaLate (DEHP ) released from PVC medical devices. 2002.

[5] 奚延斐，王春仁，鄰苯二甲酸辛酯增塑聚氯乙烯醫(yī)療器械的安全性評價，中國醫(yī)療器械信息，2005，11（2）：27-30.

[6] 張雙靈，郭康權(quán)，孟娟，幾種水溶性溶劑對PVC 膜中增塑劑DEHP 的溶出作用，農(nóng)業(yè)工程學(xué)報，2008，24（5）：261-263.