宋曉兵

【摘要】 目的 檢測(cè)宮頸癌患者中HPV感染情況， 探討HPV感染與宮頸癌相關(guān)性， 聯(lián)合細(xì)胞DNA檢測(cè)， 在宮頸癌篩查中的應(yīng)用價(jià)值， 提高準(zhǔn)確率。方法 100例宮頸癌患者HPV及DNA檢測(cè)情況， 石蠟切片對(duì)比分析， 結(jié)果 HPV感染聯(lián)合細(xì)胞DNA檢測(cè)確診99例， 確診率為99%。結(jié)論 HPV感染聯(lián)合細(xì)胞DNA倍體分析應(yīng)用于宮頸癌篩查， 可以減少誤診及漏診， 明確病因， 提高診斷的準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】 HPV感染；細(xì)胞DNA倍體；宮頸癌篩查；臨床應(yīng)用

近年來(lái)， 隨著宮頸癌篩查的普及， 發(fā)病年齡提前， 人們對(duì)于HPV感染與宮頸癌的研究取得了較大的進(jìn)展， 它是宮頸癌發(fā)生的必要因素， 沒(méi)有持續(xù)高危HPV感染， 沒(méi)有可能發(fā)生宮頸癌。

1 HPV感染方式

在宮頸癌的病因?qū)W上， 幾乎所有宮頸癌都是由15種致癌性HPV病毒引發(fā)的持續(xù)性感染， 有必要了解一下HPV病毒的基本知識(shí)和它的感染方式。HPV病毒是很小的雙鏈DNA病毒， 在細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制， 有20面衣殼， 其感染方式有兩種。

1. 1 允許性感染：病毒DNA游離于細(xì)胞中， 并能自我復(fù)制。此種感染方式不會(huì)致癌， 最終的結(jié)果是導(dǎo)致細(xì)胞破裂死亡。

1. 2 整合性感染， 病毒DNA整合到宿主基因組內(nèi)， 根據(jù)病毒自我復(fù)制的活躍程度， 又分為以下兩種。

1. 2. 1 潛伏感染：病毒不發(fā)生獨(dú)立的自我復(fù)制， 僅在宿主細(xì)胞分裂時(shí)和宿主DNA一起復(fù)制， 因此拷貝極低， 雖然可以長(zhǎng)期存在， 但常常檢測(cè)不到病毒的存在， 對(duì)宿主的危害性也很小， 即使在一定的情況下如老年女性絕經(jīng)后免疫功能下降， 又重新進(jìn)入活躍復(fù)制狀態(tài)， 現(xiàn)在， 研究表明， 危害性不大。

1. 2. 2 病毒活躍復(fù)制， 能夠產(chǎn)生新的完整病毒顆粒， HPV的DNA具有兩個(gè)編碼區(qū)， 分別產(chǎn)生兩種蛋白， 一類(lèi)為早期基因區(qū)， 位于整個(gè)鱗狀上皮分化早期如基底細(xì)胞內(nèi)， 共有E1～E2， E4～E7， 6個(gè)早期蛋白， 需要了解的的主要有①E4蛋白， 雖然從基底層開(kāi)始就能產(chǎn)生， 但在鱗狀上皮細(xì)胞分化較好， 出現(xiàn)鱗化時(shí)產(chǎn)生的量達(dá)到最多， 此蛋白的功能是分解破壞細(xì)胞角蛋白網(wǎng)， 產(chǎn)生挖空細(xì)胞的外觀， 因此， 真正典型挖空細(xì)胞只出現(xiàn)在整個(gè)鱗狀上皮已經(jīng)開(kāi)始明顯分化的中表層內(nèi)。②E6和E7蛋白， 是病毒的癌基因， 是HPV能夠致癌的罪魁禍?zhǔn)祝?E6通過(guò)與野生型P53結(jié)合， 促使其降解， E7能夠結(jié)合Rb基因， 并抑制其活性。在它們二者的共同作用下， 使細(xì)胞宛如一輛失控的車(chē)輛， 在細(xì)胞周期內(nèi)一路狂奔， 不斷復(fù)制， 同時(shí)喪失分化能力， 這就是HPV致癌的根本原因。CE2蛋白， 能夠抑制E6， E7的功能， 制約兩種蛋白發(fā)揮作用， 不讓它們過(guò)分?jǐn)_亂宿主細(xì)胞的細(xì)胞周期， 讓宿主細(xì)胞繼續(xù)保留分化、成熟的能力， 以保證衣殼蛋白的供應(yīng)和完整子代病毒顆粒的產(chǎn)生。因此， HPV感染人體后， 如果E2和E6/E7的相互制約能夠達(dá)到平衡， 宿主細(xì)胞雖然有一定程度的損傷和破壞， 但依然能夠分化和成熟， 此時(shí)， 患者表現(xiàn)為濕疣， 一旦發(fā)生整合感染， E2失去功能， 宿主細(xì)胞過(guò)度增殖， 就會(huì)產(chǎn)生癌前病變， 甚至最終發(fā)展為癌。HPV16多見(jiàn)于宮頸鱗狀細(xì)胞癌， HPV18見(jiàn)于腺癌和神經(jīng)內(nèi)分泌癌[1]。

2 細(xì)胞DNA檢測(cè)

如果HPV（+）， 陰道鏡活檢， 發(fā)現(xiàn)病變相應(yīng)治療， 未發(fā)現(xiàn)病變， 錐切， HPV（-）， 每半年一次， 直至正常， 然后每年一次， 一旦發(fā)現(xiàn)異常， 立即進(jìn)行陰道鏡活檢， 而宮頸細(xì)胞DNA定量分析是通過(guò)對(duì)細(xì)胞核內(nèi)遺傳物質(zhì)DNA倍體定量檢測(cè)， 判斷細(xì)胞的生理狀態(tài)和病理狀態(tài)；在細(xì)胞惡變過(guò)程中， 遺傳物質(zhì)DNA含量早于細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變， 通過(guò)評(píng)價(jià)細(xì)胞核各參數(shù)改變的程度， 對(duì)于腫瘤預(yù)后進(jìn)行判斷， 指導(dǎo)腫瘤的治療， 是癌及癌前病變篩查的有效工具。

每一種正常細(xì)胞的體細(xì)胞核內(nèi)均有23對(duì)染色體， 只有增殖期的細(xì)胞才會(huì)有染色體的復(fù)制和加倍， 但在生理狀態(tài)下， 人體絕大多數(shù)細(xì)胞處于靜止期， DNA含量相對(duì)恒定， 當(dāng)致癌因素早期作用于細(xì)胞時(shí)， 細(xì)胞核內(nèi)DNA結(jié)構(gòu)和含量發(fā)生改變， 最終發(fā)展為細(xì)胞形態(tài)異常和惡性增殖。因此， 細(xì)胞DNA定量分析可通過(guò)測(cè)量細(xì)胞核內(nèi)DNA含量變化， 在細(xì)胞形態(tài)不明顯前即可檢測(cè)出病變細(xì)胞， 實(shí)現(xiàn)癌及癌前病變的早期診斷。癌癥是一種染色體疾病， 致癌物質(zhì)、罕見(jiàn)的遺傳病癥及偶發(fā)的有絲分裂錯(cuò)誤都是通過(guò)產(chǎn)生非整倍體引發(fā)腫瘤的， 非整倍體以千計(jì)的基因和它們編碼的蛋白處于失衡狀態(tài)， 為細(xì)胞發(fā)展成更嚴(yán)重的非整倍體創(chuàng)造了條件。不過(guò)， 從非整倍體早期發(fā)展成惡性腫瘤需要較長(zhǎng)時(shí)間， 在這段時(shí)間內(nèi)， 醫(yī)生可見(jiàn)從容的進(jìn)行檢測(cè)和實(shí)施外科手術(shù)。在癌癥早期， 還可以通過(guò)檢查非整倍體來(lái)區(qū)分惡性腫瘤和相貌雷同的良性腫瘤， 當(dāng)癌癥進(jìn)入晚期， 檢查與耐藥或轉(zhuǎn)移性相關(guān)的非整倍體， 醫(yī)生就可以選擇最合適的質(zhì)量方案， 癌癥的發(fā)生都是從細(xì)胞惡變開(kāi)始的， 即細(xì)胞核的改變開(kāi)始， DNA是人體染色體組成成分， 是遺傳物質(zhì)， DAN突變（染色體的變化和DNA含量的變化）是癌變基礎(chǔ)， 在癌變過(guò)程中， 染色體不穩(wěn)定導(dǎo)致其數(shù)目和結(jié)構(gòu)的高度異常， 最終積累， 演化為癌癥[2]。

細(xì)胞DNA定量分析標(biāo)準(zhǔn)DNA指數(shù)和臨床意義：

DI=1（0.8～1.2）， 二倍體細(xì)胞、2C細(xì)胞， 正常細(xì)胞， 可以定期正常篩查， 2～3年。

DI在1～2（1.2～1.8）， 1～2個(gè)異常細(xì)胞， 少說(shuō)細(xì)胞為正常細(xì)胞的增殖周期， 多為慢性炎癥或HPV感染， 如有細(xì)胞鋒出現(xiàn)， 腫瘤可能性大， 建議臨床4～6個(gè)月進(jìn)行復(fù)查， 以便明確原因。

DI=2（4倍體細(xì)胞、4C細(xì)胞）， 如果大于細(xì)胞總數(shù)的10%， 可能是癌前病變和腫瘤細(xì)胞， 建議活檢。

DI>2.5（異倍體細(xì)胞、5C細(xì)胞）， 癌前病變細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、HPV感染， 建議臨床活檢。endprint

DI>4.5（異倍體細(xì)胞、9C細(xì)胞）， 多為腫瘤細(xì)胞。

3 討論

DNA倍體分析是反應(yīng)腫瘤良惡性的客觀指標(biāo)， 因此聯(lián)合HPV檢測(cè)提高了宮頸癌篩查的準(zhǔn)確率及病因?qū)W并簡(jiǎn)便易行。DNA倍體分析的基本原理是細(xì)胞核通過(guò)全自動(dòng)DNA倍體細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描處理。細(xì)胞片染色質(zhì)量控制采用大鼠肝細(xì)胞片作對(duì)照， 一般情況下， 該系統(tǒng)對(duì)每張玻片上5000個(gè)以上的細(xì)胞核進(jìn)行掃描分析， 對(duì)每個(gè)細(xì)胞核的123個(gè)核特征參數(shù)值包括細(xì)胞核面積、細(xì)胞核積分吸光度、具體結(jié)構(gòu)特征和長(zhǎng)度特征， 自動(dòng)進(jìn)行分類(lèi)和計(jì)數(shù)， 如正常上皮細(xì)胞、增生或癌變細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及未參與診斷的垃圾細(xì)胞（重疊細(xì)胞核， 聚焦不良細(xì)胞核和核碎片等）。全自動(dòng)DNA倍體分析系統(tǒng)可以自動(dòng)的測(cè)定出每例玻片上的DAN指數(shù)（DI）>1.25， >2.5細(xì)胞數(shù)占被測(cè)細(xì)胞總說(shuō)的百分比， 不正常上皮細(xì)胞DI的均值. 然后自動(dòng)打印DNA倍體分析直方圖和細(xì)胞點(diǎn)陣圖. 凡是有>5C細(xì)胞的玻片， 都要在顯微鏡下逐一進(jìn)行核實(shí)， 以排除該系統(tǒng)垃圾和重疊細(xì)胞核誤認(rèn)為異常細(xì)胞[3]。

研究表明， 腫瘤細(xì)胞DNA非整倍體是惡性腫瘤的特征標(biāo)記之一， 隨著DNA含量的上升， 異倍體細(xì)胞或非正倍體的出現(xiàn)率也隨之升高， 因此， 測(cè)定細(xì)胞核DNA含量與倍體可以了解細(xì)胞增殖狀態(tài)， 從而判斷細(xì)胞有無(wú)惡變傾向或惡性程度， 其對(duì)惡性腫瘤的早期診斷具有重要價(jià)值， 隨著臨床分期及病理分級(jí)的增加， DI值、DNA異倍體檢出率逐漸增加， 腫瘤組織細(xì)胞DI值越高， 腫瘤惡性度越高。所以， HPV感染聯(lián)合細(xì)胞DNA檢測(cè)在宮頸癌篩查中的臨床應(yīng)用價(jià)值越來(lái)越重要：①早期檢測(cè)出宮頸癌及癌前病變；②腫瘤的惡性程度及預(yù)后評(píng)估， 整倍體腫瘤其預(yù)后通常較非整倍體腫瘤好；③指導(dǎo)腫瘤的治療， 經(jīng)過(guò)放療、化療治療后， 非整倍體細(xì)胞是否消失直接反映治療的效果好壞對(duì)于宮頸癌療效的評(píng)估， 浸潤(rùn)性宮頸癌中， 非整倍體細(xì)胞越多放療敏感越強(qiáng)；④明顯提高傳統(tǒng)涂片和液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)工作效率和準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)

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[2] 陳樂(lè)真.婦產(chǎn)科診斷病理學(xué).人民軍醫(yī)出版社，2002：115-120.

[3] 回允中.婦科病理圖譜.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社， 2007： 92-105.endprint