劉志標(biāo)，劉收厚，湯 晨，馬永馳

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院耳鼻喉科，江蘇 淮安 223300)

鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素對鼻息肉組織中EGF和EGFR表達(dá)的影響

劉志標(biāo)，劉收厚，湯 晨，馬永馳

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院耳鼻喉科，江蘇 淮安 223300)

目的探討鼻內(nèi)應(yīng)用糖皮質(zhì)激素對鼻息肉組織中表皮細(xì)胞生長因子(EGF)和表皮細(xì)胞生長因子受體(EGFR)表達(dá)的影響。方法鼻息肉患者42例，隨機(jī)分為激素組(布地奈德鼻噴霧劑128 μg/次，2次/d，療程12周)和對照組(生理鹽水噴鼻，2次/d，療程12周)，每組21例，采用鼻息肉內(nèi)鏡評分評估鼻息肉治療效果，同時(shí)采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測兩組鼻息肉組織中EGF和EGFR的表達(dá)情況。結(jié)果與對照組比較，激素組鼻息肉內(nèi)鏡評分下降(P＜0.05)，黏膜上皮細(xì)胞EGF[(0.15±0.04)vs(0.24±0.06)]的表達(dá)減少(P＜0.05)，EGFR的表達(dá)無差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論糖皮質(zhì)激素能抑制鼻息肉黏膜上皮細(xì)胞EGF的表達(dá)，對EGFR的表達(dá)無影響，這可能是其治療鼻息肉的作用機(jī)制之一。

糖皮質(zhì)激素；鼻息肉；表皮細(xì)胞生長因子；表皮細(xì)胞生長因子受體

糖皮質(zhì)激素是臨床治療鼻息肉的最有效藥物，能顯著改善患者的臨床癥狀，但具體作用機(jī)制未能完全闡明[1]。研究證實(shí)鼻息肉組織中高表達(dá)的表皮細(xì)胞生長因子(EGF)和表皮細(xì)胞生長因子受體(EGFR)與鼻息肉的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)[2]。為了研究糖皮質(zhì)激素對鼻息肉的治療機(jī)制，筆者采用免疫組織化學(xué)染色的方法，檢測糖皮質(zhì)激素對鼻息肉組織中EGF和EGFR表達(dá)的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2013年1月在我院門診被確診為慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉的患者42例，其中男性29例，女性13例；年齡16～56歲，平均(31.7±2.5)歲；病程6個(gè)月至12年，平均(1.2±0.6)年。以數(shù)字表法將患者隨機(jī)分成激素組和對照組各21例。其中激素組中男性15例，女性6例；年齡16～55歲，平均(30.7±2.2)歲；病程6個(gè)月至8年，平均(1.8±0.5)年。對照組中男性14例，女性7例；年齡18～56歲，平均(32.5±2.8)歲；病程7個(gè)月至12年，平均(1.6±0.7)年。兩組患者在性別、年齡及病程等方面比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 治療方法 所有患者治療前均充分交代病情及治療方案。于治療開始前行鼻內(nèi)鏡檢查并對鼻息肉大小進(jìn)行評估。激素組治療開始后給予鼻腔應(yīng)用布地奈德鼻噴劑鼻治療(128 μg/次，2次/d)，對照組治療開始后給予鼻腔應(yīng)用生理鹽水噴鼻(2次/d)，療程12周結(jié)束后行鼻內(nèi)鏡檢查并對鼻息肉大小進(jìn)行評估，同時(shí)經(jīng)門診或手術(shù)室取小塊鼻息肉組織標(biāo)本制成石蠟塊。實(shí)驗(yàn)前一個(gè)月全身或局部使用免疫抑制劑、任何其他種類鼻噴劑患者及有糖皮質(zhì)激素使用禁忌患者都被排除在外。

1.3 免疫組織化學(xué)染色 石蠟塊連續(xù)切片后行HE染色和免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)染色采用ELIVISON二步法，所用一抗Rabbit Anti-EGF、Rabbit Anti-EGFR購自武漢博士德生物工程有限公司，ELIVISON試劑盒購自北京中杉生物技術(shù)開發(fā)公司。以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗設(shè)立陰性對照，以排除非特異性染色。以鼻息肉組織中胞漿呈現(xiàn)棕黃染色為陽性細(xì)胞，觀察EGF和EGFR在實(shí)驗(yàn)組和對照組中的表達(dá)情況，采用ImageJ醫(yī)學(xué)圖像處理軟件，計(jì)算圖像的灰度值，依據(jù)公式計(jì)算吸光度[3]，以吸光度的大小代表陽性細(xì)胞EGF和EGFR分子的表達(dá)強(qiáng)度。隨機(jī)抽取同一標(biāo)本的2張切片，每張切片上隨機(jī)取5個(gè)400倍視野，分別計(jì)算黏膜上皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、腺體細(xì)胞的吸光度，取平均值。

1.4 療效評估 鼻息肉治療效果采用鼻息肉內(nèi)鏡評分：0=無息肉，1=小息肉不超過下鼻甲上緣，2=息肉位于下鼻甲上緣和下緣之間，3=鼻息肉超過下鼻甲下緣，雙側(cè)鼻內(nèi)鏡評分之和為該患者鼻息肉內(nèi)鏡評分。為了方便對療效的評估，將鼻息肉內(nèi)鏡評分分為三個(gè)等級：1～2分為Ⅰ級，3～4分為Ⅱ級，5～6分為Ⅲ級，以內(nèi)鏡評分下降一級表示有效[4]。對治療前以及治療后12周時(shí)患者的評分情況實(shí)施統(tǒng)計(jì)并對比。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5軟件包對結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鼻息肉內(nèi)鏡評級結(jié)果 激素組鼻息肉內(nèi)鏡評級治療有效10例，無效11例，有效率為47.62%；對照組內(nèi)鏡評級鼻息肉內(nèi)鏡評級治療有效3例，無效18例，有效率為14.29%。激素組的療效高于對照組(P＜0.05)。鼻息肉大小對鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素治療效果有影響，鼻內(nèi)鏡評級為Ⅱ級的鼻息肉的療效(61.54%)高于Ⅰ級(0%)和Ⅲ級(50%)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

2.2 免疫組織化學(xué)染檢測結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色顯示EGF在兩組鼻息肉組織上皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、腺體細(xì)胞的胞漿中均有表達(dá)，陽性細(xì)胞被染成棕黃色。EGF在激素組黏膜上皮細(xì)胞的表達(dá)低于其在對照組黏膜上皮細(xì)胞的表達(dá)，兩組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。EGF在兩組鼻息肉黏膜下固有層的炎癥細(xì)胞、腺體細(xì)胞表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。結(jié)果見表2、圖1～圖2。

表1 治療前后鼻息肉內(nèi)鏡評級(例)

表2 兩組EGF、EGFR的表達(dá)()

表2 兩組EGF、EGFR的表達(dá)()

21 21對照組激素組t值P值0.24±0.06 0.15±0.04 7.80＜0.05 0.14±0.04 0.11±0.03 1.34 0.05 0.16±0.01 0.09±0.02 1.93＞0.05 0.12±0.04 0.10±0.03 1.23＞0.05 0.10±0.03 0.08±0.02 0.85＞0.05

圖1 激素組鼻息肉EGF染色(×200)

圖2 對照組鼻息肉EGF染色(×200)

免疫組織化學(xué)染色顯示EGFR在兩組鼻息肉組織上皮細(xì)胞、腺體細(xì)胞的胞漿中均有表達(dá)，陽性細(xì)胞被染成棕黃色，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P＞0.05)。結(jié)果見表2、圖3～圖4。

圖3 激素組鼻息肉EGFR染色(×200)

圖4 對照組鼻息肉EGFR染色(×200)

3 討論

鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素是臨床治療慢性鼻-鼻竇炎伴鼻息肉的有效藥物，推薦治療時(shí)間不少于12周[5]，在治療劑量下長期使用，幾乎無全身不良反應(yīng)，局部不良反應(yīng)也極輕微[6]。使用鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素能縮小鼻息肉的體積，改善患者的主、客觀癥狀[7-8]。本研究在給予糖皮質(zhì)激素治療后，有47.62%的患者鼻息肉體積縮小，但縮小的程度有限，12周的治療只能降低鼻息肉體積一個(gè)級別，且沒有發(fā)現(xiàn)鼻息肉根治的病例。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)鼻腔局部使用糖皮質(zhì)激素療效受鼻息肉體積影響比較大，鼻內(nèi)鏡評級Ⅱ級的鼻息肉的療效最佳，Ⅲ級鼻息肉治療效果較差，這可能與鼻腔內(nèi)鼻息肉體積較大，妨礙了藥物進(jìn)入鼻腔深部有關(guān)。雖難目前糖皮質(zhì)激素治療鼻息肉的療效得到了肯定，但是對于鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素縮小鼻息肉的體積的機(jī)制仍不十分清楚。

Soyka等[9]發(fā)現(xiàn)鼻黏膜上皮細(xì)胞在鼻息肉的發(fā)病過程中發(fā)揮了重要作用。在鼻息肉形成過程中，上皮細(xì)胞的完整性被破壞，出現(xiàn)上皮細(xì)胞缺損。上皮缺損使上皮細(xì)胞的增殖活性增強(qiáng)，損傷周圍區(qū)域未分化的基底層細(xì)胞會沿著暴露的基底膜向缺損中央遷移，并增殖分化為纖毛柱狀上皮細(xì)胞、無纖毛柱狀上皮細(xì)胞、杯狀細(xì)胞等。這一過程需要多種細(xì)胞因子和生長因子的參與和調(diào)節(jié)[10-11]。肖軍等[2]和Ding等[12]的研究證實(shí)EGF和EGFR參與了這一過程，鼻息肉組織黏膜纖毛上皮細(xì)胞能大量合成和分泌EGF，相應(yīng)的鼻息肉組織中基底層細(xì)胞EGFR表達(dá)也增強(qiáng)，纖毛上皮細(xì)胞分泌的EGF與基底層細(xì)胞的EGFR結(jié)合，促進(jìn)基底層細(xì)胞分裂和生長，同時(shí)基底層細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)型白細(xì)胞分化抗原44(CD44s)等粘附分子的作用下，向損傷中心遷移，從而完成整個(gè)修復(fù)過程。

鼻息肉上皮細(xì)胞存在糖皮質(zhì)激素受體，糖皮質(zhì)激素結(jié)合受體后，能抑制鼻息肉上皮細(xì)胞的增殖[13-14]，而鼻息肉上皮細(xì)胞的增殖活性和EGF和EGFR有關(guān)，因此筆者采用免疫組織化學(xué)的方法研究糖皮質(zhì)激素治療對鼻息肉組織中EGF和EGFR表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在鼻息肉上皮細(xì)胞、腺體細(xì)胞均有EGF和EGFR的表達(dá)，炎癥細(xì)胞中只有EGF的表達(dá)，使用鼻內(nèi)糖皮質(zhì)能抑制鼻息肉上皮細(xì)胞的EGF的表達(dá)，但對腺體細(xì)胞、炎癥細(xì)胞的EGF和上皮細(xì)胞、腺體細(xì)胞的EGFR表達(dá)不產(chǎn)生抑制作用。鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素僅對鼻息肉上皮細(xì)胞EGF產(chǎn)生抑制作用，推測這可能和鼻息肉組織上皮細(xì)胞存在糖皮質(zhì)激素受體且接觸鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素劑量最大有關(guān)。

本研究結(jié)果表明鼻內(nèi)糖皮質(zhì)激素對鼻息肉具有一定的治療效果，其機(jī)制可能是通過抑制鼻息肉上皮細(xì)胞EGF的表達(dá)進(jìn)而抑制上皮細(xì)胞的增殖活性。但是對于糖皮質(zhì)激素對上皮細(xì)胞EGF的抑制作用是通過減輕炎癥對黏膜上皮的損傷從而減少EGF分子的表達(dá)，還是直接抑制EGF的合成，具體還不清楚，需要以后進(jìn)一步的研究。

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Effects of intranasal glucocorticoid on the expression of EGF and EGFR in nasal polyps.

LIU Zhi-biao,LIUShou-hou,TANG Chen,MA Yong-chi.

Department of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery,Huai'an First People's Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Huai'an 223300,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo explore the effects of intranasal glucocorticoid on the expression of epidermal growth factor(EGF)and epidermal growth factor receptor(EGFR)in nasal polyps.MethodsForty-two patients with nasal polyps were equally randomized divided into two groups:group A(n=21,treated with budesonide 128 μg, BID,12 weeks)and group B(n=21,normal saline,BID,12 weeks).The expression of EGF and EGFR in nasal polyps were detected with immunohistochemistry and the therapeutic effect of nasal polyps were evaluated with the nasal endoscopic score system.ResultsThe expression of EGF in the epithelial cells[(0.15±0.04)vs(0.24±0.06)]and endoscopic staging of nasal polyps were significantly lower in group A than that in group B(P＜0.05).The expression of EGFR in group B did not differ significantly from group A(P＞0.05).ConclusionInhibiting the expression of EGF and not EGFR in the epithelial cells of nasal polyps may be one of mechanisms for the therapeutic effect of intranasal glucocorticoid on the nasal polyps．

Glucocorticoid;Nasal polyps;Epidermal growth factor(EGF);Epidermal growth factor receptor (EGFR)

R765.25

A

1003—6350（2014）24—3643—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.24.1420

2014-05-02)

劉志標(biāo)。E-mail：liuzhibiao321@126.com