康馨元,任伯穎,曲 朋,張 輝,孫佳明

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117)

左金丸出自《丹溪心法·火六》，丹溪認(rèn)為：“氣從左邊起者，乃肝火也。”左金丸作為治火“入方”(主方),書中標(biāo)明：“左金丸,治肝火,一名回令丸?！盵1]本品左金膠囊是在左金丸的基礎(chǔ)上采用現(xiàn)代工藝提取精制而成的膠囊劑型[2]。左金膠囊由黃連總堿和吳茱萸總堿組成，清肝瀉火，主治肝經(jīng)火旺之脅肋脹痛、嘔吐吞酸、噯氣口干、舌紅苔黃、脈象弦數(shù)等。方中重用黃連為主，以瀉心火[1]，黃連主要含有小檗堿、黃連堿、藥根堿、甲基黃連堿等生物堿成分,其中以小檗堿含量最高[3]。黃連中生物堿的含量測定方法報道較多[4-9]，為了有效控制藥品質(zhì)量，確保該制劑的療效，在文獻(xiàn)報道及法定標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，本試驗采用高效液相色譜法對其有效成分鹽酸小檗堿為定量控制指標(biāo)進(jìn)行測定。

1 試驗材料

1.1 儀器與試劑 Aglient 1100高效液相色譜儀，G1314A紫外檢測器，7725i手動進(jìn)樣器，Aglient色譜數(shù)據(jù)工作站。鹽酸小檗堿化學(xué)對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110715-200212，規(guī)格：供含量測定用)。所用試劑均為色譜純和分析純。

1.2 色譜工作條件 色譜柱為ZORBAX 80A Extend-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相為0.05 mol/L磷酸二氫鉀-乙腈(75∶25)；流速為0.6 mL/min，進(jìn)樣體積5 μL，檢測波長為350 nm。

2 試驗方法

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取在60 ℃真空干燥4 h的鹽酸小檗堿對照品0.010 59 g，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL含0.105 9 mg鹽酸小檗堿)。

2.2 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項下內(nèi)容物，混勻，取0.1 g，精密稱定置100 mL量瓶中，加鹽酸-甲醇(1∶100)約95 mL，置60 ℃水浴中加熱15 min，取出超聲處理30 min，放置過夜，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性對照品溶液的制備 取不含黃連總堿的處方,按制備工藝制成缺黃連總堿的陰性對照品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

3 結(jié)果與分析

3.1 檢測波長的選擇 按試驗方法對鹽酸小檗堿進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在350 nm處有較大吸收，試驗選擇檢測波長為350 nm。

3.2 流速的選擇 曾選用流速為0.8 mL/min，0.6 mL/min，0.4 mL/min，后改為0.6 mL/min，分離度較好，保留時間適中。

3.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗 按上述色譜條件測定,理論板數(shù)按鹽酸小檗堿計算應(yīng)不低于3 000，高效液相色譜圖略。

3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液(0.105 9 mg/mL)2、4、6、8、10 μL分別注入液相色譜儀,依法測定，根據(jù)對照品的峰面積積分值對鹽酸小檗堿質(zhì)量繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見表1。

表1 鹽酸小檗堿進(jìn)樣量與峰面積

結(jié)果表明鹽酸小檗堿對照品在0.211 8～1.059 0 mg之間,進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系，r=0.999，回歸方程Y=583.715 62X-149.859 015。

3.5 精密度考察 分別吸取同一劑量的對照品溶液，依法測定其峰面積值。精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液(0.105 9 mg/mL)5 μL連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果見表2，RSD%=1.09(n=5)，表明儀器精密度良好。

表2 方法精密度試驗

3.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取對照品溶液5 μL,于0、2、4、24、36 h分別進(jìn)樣5 μL進(jìn)行測定(n=5)，峰面積見表3。RSD%=1.47(n=5)，結(jié)果表明鹽酸小檗堿對照品溶液在36 h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

表3 鹽酸小檗堿對照品穩(wěn)定性試驗

3.7 重現(xiàn)性試驗 精密稱取同一批樣品(批號:040601)5份，每份約0.1 g，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果見表4，RSD%=0.86(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

3.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知樣品含量(418.92 mg/g)樣品(批號： 040401)5份， 分別加入一

表4 樣品重現(xiàn)性實驗

定量鹽酸小檗堿，測定，并根據(jù)樣品含量及鹽酸小檗堿對照品加入量，計算回收率。結(jié)果見表5，RSD%=0.19(n=5)。

表5 回收率試驗

3.9 樣品含量測定 分別精密吸取10批供試品溶液5 μL,注入液相色譜儀，測定，即得。結(jié)果見表6。

表6 樣品中鹽酸小檗堿含量

4 結(jié)論

經(jīng)過多次實驗，本品中鹽酸小檗堿總含量為每粒不得低于22.7 mg。本試驗建立的采用高效液相色譜法測定左金膠囊中鹽酸小檗堿的含量，方法學(xué)考察結(jié)果表明，本方法測定左金膠囊中鹽酸小檗堿的含量快速、簡便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，穩(wěn)定性較好。

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