周銀麗+白建波+鄧玉華+黃繼文+王朝光+張虹

摘 要：黃酮類化合物具有多種藥理作用，勐庫大葉茶中含有豐富的黃酮類物質。本試驗采用乙醇恒溫浸提的方法提取勐庫大葉茶中的總黃酮，并結合正交試驗選擇出最佳的提取工藝條件。結果表明4因素對勐庫大葉茶中總黃酮提取得率影響的主次順序為乙醇濃度>固液比>提取溫度>提取時間，最佳提取工藝條件為乙醇濃度70 %、料液比1g：30 mL、提取溫度85 ℃、提取時間2.0 h，在此條件下總黃酮的提取率為2.096 %。

關鍵詞：勐庫大葉茶 總黃酮 正交試驗 最佳工藝

我國茶葉主要產地為云南、安徽、福建、湖南、浙江等地[1 ]，云南茶樹樹高葉大，茶味濃厚，習慣上都稱之為“云南大葉種”，云南全省120個產茶縣中有大葉茶分布的近100個縣[2 ]。雙江是云南主要產茶縣之一，全縣轄勐庫等2個鎮(zhèn)及5個鄉(xiāng)，年產茶2210 t，該縣北部的勐庫鎮(zhèn)是國家級有性系茶樹良種勐庫大葉茶的原產地。勐庫大葉茶樹勢遒勁、芽葉肥壯、品質超群，受到人們的喜愛[3，4 ]。

茶葉中含有豐富的黃酮，Hodgson的研究表明，經常飲茶增加黃酮類物質攝入量能降低患心血管疾病的風險[5 ]；Grassi利用動物模型研究表明飲食結構中的類黃酮物質能延遲動脈粥樣硬化斑塊的發(fā)展[6 ]；Koutelidakis的研究表明，綠茶，白茶具有抗氧化效果，這種效果不僅在血漿中可以觀察到活性，在其他器官中同樣存在[4 ]；Wang的研究表明，喝紅茶和綠茶的防病效果不同，喝綠茶能減少患冠狀動脈疾病的危險[8 ]；Arts則研究了茶攝入量和肺癌的關系，該研究在不吸煙者和曾經吸煙者間展開，以消除吸煙的干擾效應，7個實驗中有4個證明飲茶對預防肺癌有顯著的作用[9 ]。黃酮類化合物還具有抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調節(jié)、抑菌抗病毒、抗輻射等多種藥理作用[10 ]。本文主要研究勐庫大葉茶中總黃酮的含量以及使用乙醇恒溫浸提提取勐庫大葉茶中總黃酮的最佳工藝條件，為今后勐庫大葉茶的進一步開發(fā)利用提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料、儀器與試劑

材料：勐庫大葉茶（干茶）；儀器：722S紫外可見分光光度計（上海分析儀器總廠）、電子天平、恒溫水浴鍋、高速離心機等；試劑：蘆丁、無水乙醇、三氯化鋁、三氯化鐵、濃氨水、鹽酸、鎂粉、5 %亞硝酸鈉、10 %硝酸鋁等。

1.2 實驗方法

1.2.1 黃酮的提取

首先把500 g勐庫大葉茶干茶進行粉碎，分別稱取5 g碎茶葉，加入濃度為65 %、70 %、75 %的乙醇，封口置于溫度為75 ℃、80 ℃、85 ℃的恒溫水浴鍋一定時間（2 h、3 h、4 h），然后取出離心過濾。洗滌殘渣，定容至50 mL容量瓶中，作為待測液備用（該待測液即為含茶葉總黃酮的溶液）。

1.2.2 黃酮的鑒定

對提取的黃酮類化合物進行特征性實驗，具體內容如下。

鹽酸—鎂粉反應：取1.0 mL提取液于試管中加適量鎂粉搖勻，再加入濃鹽酸數(shù)滴（1次加入），觀察其泡沫顏色；

三氯化鋁反應：取提取液點在濾紙上，滴加1 %三氯化鋁乙醇溶液，吹干，觀察顏色變化；

三氯化鐵反應：取幾滴提取液于濾紙上，滴加1 %三氯化鐵乙醇溶液，觀察其顏色；

氨顯色反應：取乙醇提取液點在濾紙上，將濾紙在濃氨水上方熏0.5 min，觀察其顏色變化。

1.2.3 測定方法及其依據

以蕓香苷為對照品測定茶葉中總黃酮的含量，加入鋁離子試劑，同時控制適當?shù)膒H值，使黃酮化合物與鋁鹽形成絡合物，在可見光區(qū)能獲得特定的吸收峰。

1.2.4 定量實驗-總黃酮的含量測定

1.2.4.1 波長的選擇

取適量的樣品液，在0.30 mL5 %亞硝酸鈉溶液的堿性條件下，經硝酸鋁顯色后，以試劑為空白參比液，在420～700 nm波長范圍測定螯合物的吸光度，螯合物在510 nm處有最大吸收，故測定時選用510 nm的波長。

1.2.4.2 標準曲線的繪制

首先進行標準溶液的制備：精密稱取120 ℃恒溫干燥至恒重的蕓香苷20 mg，置于100 mL容量瓶中，加入60 %乙醇溶液并稀釋至刻度，搖勻即得0.2 mg/mL的標準品溶液。然后進行標準曲線的制備：精密吸取標準溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mL分置于25 mL容量瓶中，分別加5 %亞硝酸鈉和10 %硝酸鋁溶液各4.0 mL，用30 %的乙醇稀釋至刻度，混勻，放置16 min。然后用722S 紫外可見分光光度計在510 nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，溶液濃度為橫坐標繪制標準曲線，由此可得回歸方程D=11.133C-0.0134，r2 =0.9989，r=0.999，n=7。

1.2.5 乙醇恒溫浸提正交試驗設計

為了確定乙醇恒溫浸提提取勐庫大葉茶中總黃酮最佳提取工藝條件，利用正交實驗法進行試驗。選用乙醇濃度、提取溫度、提取時間及固液比4個因素，每個因素選擇3個水平，用L9（34）正交表進行實驗設計優(yōu)化[11 ]。

2 結果與分析

2.1 黃酮鑒定結果分析

鹽酸-鎂粉反應呈紫紅色；三氯化鋁反應在可見光下呈灰藍色；三氯化鐵反應呈紫色；氨顯色反應在紫外光下呈極明顯的墨綠色熒光斑點，由表1的結果可證明待測液中含有黃酮類化合物。

2.2 乙醇恒溫浸提勐庫大葉茶中總黃酮正交實驗結果分析

對正交試驗結果的數(shù)據進行極差分析見表2，乙醇濃度的極差（0.429）大于固液比的極差（0.277），而且遠大于提取溫度極差（0.164）和提取時間的極差（0.095），4個因素對茶葉中黃酮提取得率影響的主次順序為A>D>B>C，即乙醇濃度和固液比對提取得率的影響最大，提取溫度與提取時間對黃酮提取率的影響較小。最佳提取條件為A2B3C1D2，即乙醇濃度為70 %，固液比（g/mL）為1：30，提取溫度為85 ℃，提取時間為2 h時勐庫大葉茶茶葉黃酮得率最高，為2.096 %。

3 結論

試驗采用乙醇恒溫浸提的方法提取勐庫大葉茶中的總黃酮，并且通過正交試驗分析了影響黃酮提取率的4個因素。這4個因素對勐庫大葉茶中總黃酮提取得率的影響順序為乙醇濃度>固液比>提取溫度>提取時間。綜合各因素分析及考慮時間和資源耗用的情況，乙醇恒溫浸提提取勐庫大葉茶中總黃酮的最佳工藝條件為：乙醇濃度70 %、固液比（g/mL）1：30、提取溫度85 ℃、提取時間2 h。最佳方案提取得率為2.096 %。

4 討論

試驗提取勐庫大葉茶中的總黃酮得率為2.096 %，與姚小敏等用其他茶葉為材料提取黃酮的黃酮得率2.19 %十分接近[11 ]。最佳提取條件為乙醇濃度70 %、固液比（g/mL）1：30、提取溫度85 ℃、提取時間2 h，4因素對茶葉提取得率影響的主次順序為乙醇濃度>固液比>提取溫度>提取時間，與王在貴等的研究結論相比也十分接近[12 ]。試驗結果表明勐庫大葉茶中含有較高的黃酮類化合物，有較高的飲用價值，可為勐庫大葉茶的進一步開發(fā)利用提供參考。

參考文獻

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[12] 王在貴，王磊，高麗萍，等. 茶葉總黃酮的提取工藝研究[J]. 飼料工業(yè)，2009，30（24）：42-44.

3 結論

試驗采用乙醇恒溫浸提的方法提取勐庫大葉茶中的總黃酮，并且通過正交試驗分析了影響黃酮提取率的4個因素。這4個因素對勐庫大葉茶中總黃酮提取得率的影響順序為乙醇濃度>固液比>提取溫度>提取時間。綜合各因素分析及考慮時間和資源耗用的情況，乙醇恒溫浸提提取勐庫大葉茶中總黃酮的最佳工藝條件為：乙醇濃度70 %、固液比（g/mL）1：30、提取溫度85 ℃、提取時間2 h。最佳方案提取得率為2.096 %。

4 討論

試驗提取勐庫大葉茶中的總黃酮得率為2.096 %，與姚小敏等用其他茶葉為材料提取黃酮的黃酮得率2.19 %十分接近[11 ]。最佳提取條件為乙醇濃度70 %、固液比（g/mL）1：30、提取溫度85 ℃、提取時間2 h，4因素對茶葉提取得率影響的主次順序為乙醇濃度>固液比>提取溫度>提取時間，與王在貴等的研究結論相比也十分接近[12 ]。試驗結果表明勐庫大葉茶中含有較高的黃酮類化合物，有較高的飲用價值，可為勐庫大葉茶的進一步開發(fā)利用提供參考。

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3 結論

試驗采用乙醇恒溫浸提的方法提取勐庫大葉茶中的總黃酮，并且通過正交試驗分析了影響黃酮提取率的4個因素。這4個因素對勐庫大葉茶中總黃酮提取得率的影響順序為乙醇濃度>固液比>提取溫度>提取時間。綜合各因素分析及考慮時間和資源耗用的情況，乙醇恒溫浸提提取勐庫大葉茶中總黃酮的最佳工藝條件為：乙醇濃度70 %、固液比（g/mL）1：30、提取溫度85 ℃、提取時間2 h。最佳方案提取得率為2.096 %。

4 討論

試驗提取勐庫大葉茶中的總黃酮得率為2.096 %，與姚小敏等用其他茶葉為材料提取黃酮的黃酮得率2.19 %十分接近[11 ]。最佳提取條件為乙醇濃度70 %、固液比（g/mL）1：30、提取溫度85 ℃、提取時間2 h，4因素對茶葉提取得率影響的主次順序為乙醇濃度>固液比>提取溫度>提取時間，與王在貴等的研究結論相比也十分接近[12 ]。試驗結果表明勐庫大葉茶中含有較高的黃酮類化合物，有較高的飲用價值，可為勐庫大葉茶的進一步開發(fā)利用提供參考。

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