孫媛元

山西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院口腔系，山西太原 030001

近年來，口腔念珠菌感染的發(fā)病率呈不斷上升趨勢，屬于條件致病性疾病，臨床上比較常見的一種疾病。此外，白斑、口腔扁平苔蘚等疾病中口腔念珠菌感染通常提示與惡變的可能，使得該疾病近幾年逐漸受到重視[1]。氟康唑是多年認(rèn)可的抗真菌藥，但由于其耐藥性是我們一直關(guān)注的問題。因此，藥物的合理使用是我們更加關(guān)注的話題。西帕依固齦液是有抗真菌作用的民族中藥，用單味藥材沒食子經(jīng)提取精制而成的漱口液，具有固澀、燥濕、止血、消炎和防腐之功效，廣泛地應(yīng)用于口腔的衛(wèi)生保健[2]，在抗真菌藥物中也獨(dú)具特色。本實驗通過研究西帕依固齦液對口腔白色念珠菌的溶血性的影響，了解其對白色念珠菌的毒力，對臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 實驗材料和實驗方法

1.1 材料

菌種：白色念珠菌Candidaalbicans ATCC 10231(中國山西生物制品所菌種保存中心)。沙博氏培養(yǎng)基(陜西西安微生物所)。藥物：西帕依固齦液 (新疆奇康哈博維藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z65020012)、氟康唑分散片（山西太原制藥廠有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）MIC 是指能抑制生長的最低藥物濃度，采用美國國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會推薦的微量肉湯積壓稀釋法（national com-mittee for clinical laboratory standards，NCCLS M27-A）規(guī)定的方法檢測MIC[3]。

1.2.2 將白色念珠菌接種于沙博氏液體培養(yǎng)基，30℃培養(yǎng)24 h后備用 培養(yǎng)24 h 后的菌液，將它稀釋成為濃度約為1×108 個/mL的實驗菌工作濃度，即取100 mL 細(xì)菌混懸液，接種于3組沙博氏平皿培養(yǎng)基（3%葡萄糖），從60 株臨床菌株中挑選白色念珠菌菌株，每組15 株[4]。其中一組加入西帕依固齦液，一組加入氟康唑（使其終濃度為0.5MIC），另外一組為只加培養(yǎng)基的對照組。37℃培養(yǎng)48h。

1.2.3 檢測溶血性 指標(biāo)：測定菌落直徑和總直徑（菌落+溶血環(huán)） 溶血指數(shù)計算方法：溶血指數(shù)=菌落直徑/總直徑。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 13.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)描述和統(tǒng)計，描述性統(tǒng)計分析采用比，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，推斷性統(tǒng)計分析采用析因方差分析的方法，用其進(jìn)行交互作用的顯著性推斷。檢驗標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

只加培養(yǎng)基的對照組和西帕依固齦液組、氟康唑組均有溶血現(xiàn)象，但西帕依固齦液組和氟康唑組的溶血現(xiàn)象顯著變少。溶血指數(shù)檢測結(jié)果分別為：西帕依固齦液組溶血指數(shù)為0.3241、氟康唑組溶血指數(shù)為0.3315，對照組溶血指數(shù)為0.2531，西帕依固齦液組和氟康唑組溶血指數(shù)兩者溶血指數(shù)的交互效應(yīng)無統(tǒng)計學(xué)意義（F=3.974，P＞0.05）。西帕依固齦液組、氟康唑組與未干預(yù)對照組比較，均有顯著性差異，分別為（F=2.521，P=0.015）、（F=2.612，P=0.020）。

3 討論

口腔念珠菌病(oral candidiasis)是白色念珠菌引起的口腔黏膜的真菌感染性疾病[5]。近年來口腔念珠菌感染逐年呈增長趨勢，而且為條件致病菌，常寄生于人的開放性腔道，在機(jī)體免疫力降低時容易感染此菌，所以難治療且易復(fù)發(fā)。因此，選擇有效、使用方便而無明顯副作用的藥物進(jìn)行治療白色念珠菌，以及預(yù)防其感染等是我們目前面臨的重要問題之一。

念珠菌的致病性和毒力是一組因子決定[6-7]。有二相性轉(zhuǎn)換、疏水性、粘附性、磷脂酶活性、溶血性。二相性包括：能產(chǎn)生菌絲的念珠菌有毒力且毒力增強(qiáng)，有毒力的念珠菌形態(tài)學(xué)已經(jīng)由酵母相向菌絲相的轉(zhuǎn)換了；細(xì)胞表面疏水性在黏附宿主細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白和導(dǎo)管以及躲避吞噬細(xì)胞的監(jiān)視方面，有著重要作用；白色念珠菌通過識別中間物質(zhì)黏附素來識別粘附宿主[8-9]；磷脂酶可以分解宿主細(xì)胞膜磷脂使細(xì)胞膜通透性增高，從而入侵宿主細(xì)胞；溶血性是病原微生物破壞亞鐵血紅素后提取鐵元素的能力，提取鐵元素的能力在感染過程中發(fā)揮重要作用。1994年MANNS 描述了白色念珠菌被羊血瓊脂培養(yǎng)基誘導(dǎo)后產(chǎn)生一個半透明的完全溶血環(huán)，這是念珠菌溶血性的首次報道[10]。在本實驗中，我們發(fā)現(xiàn)實驗組和未干預(yù)的對照組均發(fā)生溶血反應(yīng)，這與Samaranake LP等[11]的實驗結(jié)果相吻合。Samaranake LP 的研究結(jié)果認(rèn)為：檢測口腔白色念珠菌體外均發(fā)生溶血活性反應(yīng)。

抗真菌藥物氟康唑的耐藥問題變得日益嚴(yán)重，使臨床用藥遇到棘手問題，因此合理用藥作為解決耐藥的新思路。因此本實驗通過西帕依固齦液和氟康唑分別作用口腔白色念珠菌后，檢測其與未干預(yù)對照組溶血活性有無差異性。結(jié)果表明雖然未干預(yù)對照組和實驗組均有溶血現(xiàn)象，但西帕依固齦液組和氟康唑組的溶血現(xiàn)象明顯變少，西帕依固齦液組和氟康唑組的溶血性與未干預(yù)對照組有顯著性差異（P＜0.05）。氟康唑是在臨床中治療口腔白色念珠菌療效明確的唑類抗真菌藥，本實驗的結(jié)果證實西帕依固齦液和氟康唑?qū)Π咨钪榫苎钚杂邢嗨频淖饔?，提示西帕依固齦液的使用可以使口腔白色念珠菌毒性降低，可以作為臨床治療口腔白色念珠菌的藥物。

西帕依固齦液主要成分是沒食子，屬于具有特色的民族藥。其沒食子抗真菌、抗病毒、抗細(xì)菌等方面都具有明顯的療效。也有報道稱西帕依固齦液對口腔白色念珠菌有一定的治療作用[12]。本實驗也證實西帕依固齦液對口腔白色念珠菌毒力的降低有一定的影響。白色念珠菌的毒力因素還包括二相性轉(zhuǎn)換、疏水性、粘附性、磷脂酶活性等[13]，下一個課題我們將探討西帕依固齦液對口腔白色念珠菌其他毒力因素的研究，用以指導(dǎo)臨床用藥。

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