竇 勤，季志紅，李柯翱，李治建，艾西木江·熱甫卡提，買合素提·卡德爾，斯拉甫·艾白，閆 明(1．新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，烏魯木齊 80049；2．新疆維吾爾醫(yī)方劑學實驗室，烏魯木齊 80049；．新疆奇康哈博維藥有限公司，烏魯木齊 80001)

祖卡木顆粒是維吾爾醫(yī)臨床常用的、具有代表性的特色維吾爾醫(yī)經典方劑，由山柰、睡蓮花、薄荷、大棗、洋甘菊、破布木果、甘草、蜀葵子、大黃、罌粟殼10味藥材組成，具有調節(jié)異常氣質、清熱、發(fā)汗、通竅功能，用于治療感冒咳嗽、發(fā)熱無汗、咽喉腫痛、鼻塞流涕。長期臨床應用實踐證明，該方劑能夠有效緩解感冒癥狀。為其臨床應用安全性進行再評價，本研究通過大鼠長期給藥，探討其對SD大鼠體質量及主要臟器的影響。

1 儀器與材料

1.1 儀器 DM2500生物顯微鏡，德國萊卡公司；RM2235切片機，德國萊卡公司。KD-BM生物組織自動包埋機，浙江金華科迪儀器設備有限公司。生物組織自動脫水機：KD-TS3D，浙江金華科迪儀器設備有限公司。攤片烤片機：KZPG-1A，天津天利航空機電有限公司。EL電子天平：常州市天之平儀器設備有限公司。

1.2 試藥 祖卡木顆粒(干浸膏)由新疆奇康哈博維藥有限公司提供，國藥準字：Z20054213，批號130103，1 g干浸膏相當于生藥14.88 g；羧甲基纖維素鈉(sodium carboxymethy cellulose CMC-Na)；對照品(天津市光復精細化工研究所提供，批號100409)；蘇木色精(上海藍季科技發(fā)展有限公司，批號 110405)；伊紅染色(天津市福晨化學試劑廠，批號2012120612)。

1.3 動物 SD 大鼠，SPF 級，120只，雌雄各半，體質量180～220 g，由新疆實驗動物研究中心提供，實驗動物生產許可證號：SCXK(新)2011-0001，動物合格證號：SCXK-LAC2013-4-3。

2 方法

2.1 動物分組 120只SD大鼠適應性飼養(yǎng)1 周后，按體質量隨機分為4組，每組30只，雌雄各半，分別為對照組及低、中、高劑量藥物組。

2.2 劑量設計 祖卡木顆粒以供試品計算，成人每日用量為2.862 g，成人體質量按60 kg計算，即成人每日每千克體質量用供試品的量為2.862 g/60 kg=0.047 7 g· kg-1bw。低、中、高劑量藥物組分別為臨床成人每日每千克體質量用量的15，30和60倍，分別為0.7(10.4 g生藥)、1.4(20.8 g生藥)、2.8(41.6 g生藥) g·kg-1。

2.3 給藥方法與觀察指標 供試品灌胃給予大鼠，0.01 mL·g-1bw，每天1 次，連續(xù)1 個月，空白對照組給予等量CMC-Na，每天觀察并記錄動物的外觀體征、行為活動、飲食、大便、體質量等情況，如出現(xiàn)中毒反應的應重點觀察。每4 天稱體質量1 次，并根據體質量情況調整給藥量，于停藥后24 h，各組分別處死大鼠20只，進行全面、細致地系統(tǒng)尸檢，取腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢等稱定質量，計算臟器器官系數(臟器系數=臟器質量/體質量×100)。對腦、心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢用15%中性甲醛固定，首先對高劑量藥物組和對照組動物標本進行常規(guī)石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅(HE)染色、光鏡檢查、觀察臟器組織病理變化[1-5]。剩余大鼠繼續(xù)飼養(yǎng)2 周，同樣進行上述觀察和檢測。通過上述觀察和檢測，以了解大鼠在給藥期間的毒性反應及停藥后一段時間內的恢復情況。

3 結果

3.1 體質量 各給藥組動物的體質量與對照組動物的體質量比較無差異。

3.2 臟器質量 祖卡木顆粒給藥1個月和停藥2周各給藥組臟器質量與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3.3 臟器系數 祖卡木顆粒給藥1個月和停藥2周各給藥組臟器系數與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1、表2。

表1 祖卡木顆粒長期給藥對大鼠(給藥結束)臟器系數的影響

表2 祖卡木顆粒長期給藥對大鼠(停藥2周)臟器系數的影響

3.4 組織病理學檢查

3.4.1 大腦、腦干、小腦 溶媒對照組：腦蛛網膜下腔及腦軟膜血管結構正常、腦皮質區(qū)及髓質區(qū)結構清晰，層次分明；高劑量組：神經細胞未見變性與壞死等病理變化，腦蛛網膜下腔及腦軟膜血管未見明顯的充血、出血及水腫，腦組織內血管未見充血及出血，血管周圍未見間隙增寬及淋巴細胞圍管浸潤等。

3.4.2 心臟 溶媒對照組：心臟大小正常。心內膜、心肌、心外膜三層結構清楚、完整。心肌纖維結構清楚，橫紋清晰；高劑量組：心肌三層結構清晰，心內膜光滑，心外膜完整；心肌纖維無增殖肥大或萎縮變細，亦無肌纖維斷裂，心肌細胞未見變性與壞死；停藥2 周心肌間質單核細胞浸潤1 例。

3.4.3 肺臟 溶媒對照組：細小支氣管黏膜完整，肺泡壁結構清晰，肺泡腔內未見漏出液。其中肺間質淋巴細胞局部浸潤末期2例；高劑量組：細小支氣管黏膜未見變性與壞死，肺泡壁毛細血管無顯著擴張淤血，肺泡腔內清澈，未見漏出液及滲出物。肺間質未見岀血。其中肺間質淋巴細胞局部浸潤末期2 例，單核細胞局部浸潤末期1例。

3.4.4 肝臟 溶媒對照組：肝小葉結構完整。肝細胞排列呈索狀，以小葉中央靜脈為中心呈放射狀排列。肝細胞胞漿紅染，細胞核多位于中央。肝血竇見少量紅細胞。門管區(qū)小葉間動靜脈及結構完整。末期肝細胞點狀壞死1 例、肝細胞脂肪變性1例；高劑量組：肝臟大部分結構正常，末期肝細胞點狀壞死2 例，停藥2 周肝細胞點狀壞死1 例。

3.4.5 腎臟 溶媒對照組：皮質腎小球與腎小管結構完整，髓質集合管結構完整；高劑量組：腎小球無增生及硬化，未見纖維化及玻璃樣變的腎小球；腎小管上皮無水腫；間質未見水腫及明顯炎性細胞浸潤；髓質集合管未見明顯改變，其中末期單核細胞浸潤1例。

3.4.6 睪丸 溶媒對照組：睪丸小葉內的曲細精管內生殖上皮的生精細胞結構正常，可見精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞及精子細胞；曲細精管間可見睪丸間質細胞；高劑量組：睪丸曲細精管及間質未見明顯病理變化。

3.4.7 卵巢、子宮、附睪、脾臟、胸腺、腎上腺 溶媒對照組和高劑量組結構完整，未見明顯病理組織學改變。

4 討論

祖卡木顆粒0.7，1.4，2.8 g·kg-1分別相當于生藥量10.4，20.8，41.6 g·kg-1，連續(xù)灌胃大鼠1個月，各給藥組動物體質量、臟器質量和臟器系數與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義，表明祖卡木顆粒對大鼠的體質量、臟器質量和臟器系數基本無影響。組織病理學檢查顯示：各組間主要臟器病變例數差異不大，僅肺臟出現(xiàn)淋巴和單核細胞局部浸潤、心臟出現(xiàn)心肌間質單核細胞浸潤、肝臟出現(xiàn)脂肪變性和點狀壞死、腎臟出現(xiàn)單核細胞浸潤。以上病變高劑量組和對照組都有，且病變數量甚少，考慮為動物自身病變，而非藥物長期給藥所致，其余臟器未見明顯病理變化。

綜上所述，在本次實驗條件下，祖卡木顆粒長期給藥對SD大鼠體質量，主要臟器的臟器質量、臟器系數和主要臟器的組織病理學無明顯的影響。祖卡木顆粒是維吾爾醫(yī)臨床常用的、具有代表性的特色維吾爾醫(yī)經典方劑[6-8]，在臨床上已應用多年，療效甚佳，本次實驗為祖卡木顆粒的臨床應用提供實驗依據。

參考文獻：

[1] 袁伯俊，繆明陽，李波． 藥物毒理學實驗方法與技術[M]．北京：化學工業(yè)出版社，2007：200-210．

[2] 徐叔云，卞如濂，陳修． 藥理實驗方法學[M]．3 版． 北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：226-229．

[3] 熱比姑麗·伊斯拉木. 新疆曼陀羅子及其代表制劑艾比西帕丸的大鼠長期毒性實驗[J].中國藥理學通報，2011，27(10)∶1479-1480.

[4] 黃繼漢，黃曉軍，陳志揚，等.藥理實驗中動物間和動物與人體間的等效劑量換算[J].中國臨床藥理學與治療學，2004，9(9):1069-1072.

[5] 朱愛華，萬忠民，阮于平，等.倒卵葉五加莖的毒理學實驗[J].西北藥學雜志，1991，6(1):8-9.

[6] 謝秀瓊．中藥新制劑開發(fā)與應用[M]． 北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：527-535．

[7] 易沙克江·馬合穆德． 中國醫(yī)學百科全書：維吾爾醫(yī)學[M]．上海：上?？茖W技術出版社，2005：302-303．

[8] 李儀奎，金若敏，王欽茂.中藥藥理實驗方法學[M].2版.上海:上?？茖W技術出版社，2006:722-723.