于彩霞 王建明 胡哲英

·輸血研究·

微柱凝膠法交叉配血試驗次側(cè)凝集的臨床因素分析

于彩霞 王建明 胡哲英

微柱凝膠；交叉配血；次側(cè)凝集

微柱凝膠法交叉配血是近年來各醫(yī)院輸血科普遍使用的一項免疫分析方法。不僅可以檢出IgM類血型抗體，也可檢出IgG類不完全抗體，極大降低了溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生[1]。它充分利用了分子篩技術(shù)，具有標(biāo)本用量少，操作簡單，靈敏度高，特異性強，結(jié)果可長期保存等優(yōu)點，其作為一項免疫學(xué)檢測技術(shù)，在輸血界已逐漸作為常規(guī)應(yīng)用[2]，但該方法在配血過程中常出現(xiàn)次側(cè)凝集的陽性結(jié)果，若不能快速作出正確合理的分析和處理，則會影響臨床輸血的及時性和安全性。通過對使用微柱凝膠法交叉配血過程中出現(xiàn)次側(cè)凝集反應(yīng)的結(jié)果進行分析，發(fā)現(xiàn)其發(fā)生可能與受血者本身的疾病情況有一定關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年1月至2012年5月我院門診及住院患者申請輸注懸浮紅細胞的2 580例中，篩選出使用微柱凝膠法交叉配血試驗出現(xiàn)次側(cè)凝集的病例42例。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 試劑：微柱凝膠試劑卡、ABO反定型紅細胞、不規(guī)則抗體篩查細胞(ⅠⅡⅢ)均由長春博訊生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.2.2 儀器：FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A型血清學(xué)專用離心機均由長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司提供。

1.3 標(biāo)本處理 獻血員抗凝血標(biāo)本及受血者常規(guī)EDTA抗凝血標(biāo)本3 ml(抗凝劑與血液比例1∶9)，2 000 r/min離心5 min分離紅細胞與血漿，并制備0.5%～0.8%紅細胞懸液，同時標(biāo)本不能溶血。

1.4 方法

1.4.1 血型鑒定：不規(guī)則抗體篩查及直接抗人球蛋白試驗：所有受血者、供血者交叉配血前均進行ABO血型正反定型及RH血型復(fù)檢，受血者血漿常規(guī)作不規(guī)則抗體篩查試驗。次側(cè)出現(xiàn)凝集者加做直接抗人球蛋白試驗，并對供血者血漿作不規(guī)則抗體篩查。所有試驗均嚴格按照試劑說明書和《輸血技術(shù)學(xué)》操作規(guī)程進行操作。

1.4.2 交叉配血試驗：標(biāo)記抗人球蛋白交叉配血卡，制備受、供血者血漿和0.5%～0.8%的紅細胞懸液。主側(cè)加入供血者紅細胞懸液和受血者血漿各50 μl，次側(cè)加入受血者紅細胞懸液和供血者血漿各50 μl。在免疫微柱孵育器內(nèi)孵育15 min，血清學(xué)專用離心機離心5 min (900 r/min，2 min；1 500 r/min，3 min)。取出肉眼觀察結(jié)果，紅細胞均勻沉于管底部者為陰性，懸浮于微柱凝膠表面或凝膠中層者為陽性(±～4+)。

2 結(jié)果

在2 580例微柱凝膠法配血結(jié)果中，檢測出42例次側(cè)有不同程度凝集的病例，對供血者的不規(guī)則抗體進行篩查，對受血者進行抗人球蛋白試驗。見表1。

表1 42例微柱凝膠法交叉配血試驗次側(cè)凝集臨床因素分析

3 討論

微柱凝膠法是建立在抗人球蛋白基礎(chǔ)上的一種新方法。此法是利用微柱凝膠的過濾作用和免疫學(xué)抗原抗體特異反應(yīng)，通過離心技術(shù)將發(fā)生凝集反應(yīng)的紅細胞阻滯于凝膠之內(nèi)，未凝集的紅細胞則通過微孔過濾到達微柱底部，從而區(qū)分有無凝集[3]。該實驗方法除能避免ABO以外的血型抗體引起的輸血反應(yīng)外，凡能引起患者直接抗人球蛋白陽性的因素均能檢出。因其特異性高，檢測靈敏，結(jié)果可靠而被普遍應(yīng)用于臨床，進一步提高了臨床用血的安全[4]。但在實際操作中，微柱凝膠法也會因為一些因素而導(dǎo)致次側(cè)凝集，若不能快速準(zhǔn)確的作出判斷，會影響臨床及時安全輸血。

微柱凝膠法交叉配血次側(cè)凝集的原因比較復(fù)雜，首先，供血者體內(nèi)存在抗受血者紅細胞的抗體，本文收集資料為次側(cè)凝集而供血者不規(guī)則抗體篩查均為陰性，這就排除了由供血者引起次側(cè)凝集的可能性。

血漿蛋白含量增高影響配血結(jié)果。由于標(biāo)本抗凝不充分，血漿中纖維蛋白會使紅細胞形成大小不同的凝塊，在配血時雖然沒有特異性的抗原抗體反應(yīng)，但離心時纖維蛋白阻礙紅細胞沉降而浮于凝膠的不同層面。但這種凝集大多較弱，粘附少量紅細胞的纖維蛋白一般聚集在凝膠的最上層，呈顏色較淺的環(huán)形，而大部分紅細胞會沉到管底，這種情況比較容易判斷。另外，心肌梗死、外傷及腫瘤患者血漿中纖維蛋白原升高；傳染病，肝病及骨髓瘤患者血漿中球蛋白升高，使清球蛋白比例倒置引起蛋白吸附。這些均可導(dǎo)致交叉配血次側(cè)凝集。對于這些非特異性次側(cè)凝集病例，本文采用重新抽取患者血液后立即注入EDTA抗凝管，并充分混勻，以此排除纖維蛋白的影響后重新配血，輸血后均未發(fā)生不良反應(yīng)。

冷凝集素對交叉配血的影響。冷凝集素屬IgM類自身免疫性非特異性抗體。正常人血清中含有少量低效價冷凝集素，一般不會對交叉配血試驗產(chǎn)生影響。但在冷凝集素綜合征、SLE、支原體肺炎、腫瘤等患者血清中含有高效價的冷凝集素，它可結(jié)合于受檢者紅細胞上，使其發(fā)生自身凝集，從而影響配血結(jié)果的判定[5]。本文中將這3例患者的配血卡在37℃孵育器內(nèi)孵育15 min后離心，凝集有不同程度減弱。采用自體吸收的方式除去冷抗體后，室溫下采用凝聚胺法、微柱凝膠法均未發(fā)現(xiàn)凝集現(xiàn)象，說明患者血清中確系含有高效價的冷凝集素。因此，這些患者應(yīng)盡量避免輸血，必須輸血時，可輸入同型洗滌紅細胞，同時，應(yīng)在室溫放置復(fù)溫后再緩慢輸注，并密切觀察輸血過程[6]。

自身凝集造成微柱次側(cè)凝集。通過對臨床資料的分析研究顯示，次側(cè)凝集主要發(fā)生在白血病和腫瘤，免疫系統(tǒng)疾病、肺部炎癥、腎臟疾病、肝硬化、骨折等疾病中，血液病和腫瘤患者多因免疫功能低下，血型特異性物質(zhì)含量高，輸血可造成免疫功能進一步受抑制，導(dǎo)致輸血產(chǎn)生的免疫復(fù)合物不能被機體及時清除或長期使用化療藥物使得紅細胞被吸附致敏導(dǎo)致交叉配血次側(cè)凝集和直接抗人球蛋白試驗陽性[7]。免疫系統(tǒng)疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡及肝硬化患者體內(nèi)存在高滴度的自身免疫性血型抗體，可與任何血型的紅細胞作用，導(dǎo)致紅細胞發(fā)生凝集，出現(xiàn)交叉配血次側(cè)的凝集反應(yīng)。對于肺部炎癥胸腔積液患者，在感染肺炎支原體后可產(chǎn)生免疫球蛋白，然而反復(fù)感染可使抗體效價逐漸增高從而產(chǎn)生自身抗體[8]，導(dǎo)致交叉配血次側(cè)凝集。腎臟疾病如腎功能不全，尿毒癥患者，主要原因是在長期的治療過程中，由于藥物的吸附改變了正常紅細胞的表達，使得在交叉配血時與微柱凝膠中的抗IgG、C3抗體發(fā)生凝集反應(yīng)。目前引起直接抗人球蛋白試驗陽性的藥物日益增多。骨折患者可能是受某些大分子藥物影響大劑量應(yīng)用等[9]，均可以使患者自身紅細胞被致敏，如果供血者不規(guī)則抗體篩查陰性，則可以輸血。另外，非緊急情況下可通知臨床停止該藥物的使用后再重新配血。我們將患者紅細胞做放散試驗，均未發(fā)現(xiàn)特異性抗體，用患者血清及放散液與供血者去白懸浮紅細胞配血均相合，輸血后未發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性輸血不良反應(yīng)。

新生兒用微柱凝膠法配血次側(cè)凝集5例中，早產(chǎn)兒貧血3例，新生兒ABO溶血病l例，感染性疾病1例。這5例次側(cè)凝集的病例其紅細胞直接抗人球蛋白試驗均為陽性。因此，紅細胞直接抗人球蛋白試驗陽性是引起次側(cè)凝集的主要原因。本組次側(cè)凝集多見于早產(chǎn)兒貧血，這與早產(chǎn)兒器官發(fā)育不成熟、肝腎功能不全有關(guān)。本文中我們在排除供血者有不規(guī)則抗體后做直接抗人球蛋白試驗，其凝集強度均大于次側(cè)凝集強度，則給予輸注同型懸浮紅細胞，未見輸血不良反應(yīng)。

有輸血史和妊娠史的患者血液中經(jīng)常含有大量異體血漿蛋白，如免疫球蛋白和補體成分，其非特異性地吸附在紅細胞表面，使患者紅細胞被致敏，在抗人球蛋白的介導(dǎo)下與微柱凝膠中的抗IgG及C3的抗體結(jié)合，在體外發(fā)生凝集反應(yīng)出現(xiàn)非特異性次側(cè)凝集[10]，大量輸注血漿的患者更為常見。這些患者應(yīng)盡量減少輸血，本文中臨床要求必須輸血，我們采用多個供血者同時與患者交叉配血，取相對凝集較弱的給予洗滌后輸注，未發(fā)生輸血不良反應(yīng)。

綜上所述，影響輸血前交叉配血的因素很多。在臨床輸血過程中要了解次側(cè)凝集的原因，多與臨床溝通，必要時做一些相關(guān)的補充試驗，比如冷凝集素效價測定試驗，自身凝集試驗，紅細胞放散試驗等，有助于針對不同疾病采取不同措施，從而保證臨床輸血的及時性和安全性。

1 張強.抗人球蛋白微柱凝膠法和凝聚胺法交叉配血敏感性分析.臨床和實驗室學(xué)雜志，2007，6：126.

2 AteE JC，Reilly N.Evaluation and implementation of the gel test for indirect antiglobulin Atesting in a community hospital laboratory.Arch BPathol lab Med，1999，123:693-694.

3 武建，劉亞玲.微柱凝膠技術(shù)在血型免疫學(xué)相關(guān)檢測的應(yīng)用進展.中國輸血雜志，2008，21：101.

4 王葆昶.安全輸血的幾點體會.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2008，29：71-73.

5 郝繁運，劉晶，董振芳.1例高效價冷凝集致配血不合及單一主側(cè)管配血不合簡析.中國輸血雜志，2003，8：283-284.

6 王靜，沈立松，沈霞.冷凝集素綜合征引起交叉配血困難1例報告.臨床輸血與檢驗，2001，3：57.

7 張慧蓮，楊婷，于洋.680例交叉配血次側(cè)凝集的結(jié)果分析.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2011，32：1015-1016.

8 姚秀俊，宋嘉，高燕.小兒肺炎支原體感染的臨床分析.上海醫(yī)藥，2007，28：135-137.

9 蔣利星，藥物致自身免疫性溶血性貧血3例分析.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2010，9：1971-1972.

10 蒯迪文，郭黠.81例微柱凝膠法交叉配血試驗次側(cè)凝集的臨床因素分析.國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2009，6：564-565.

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.03.058

072750 河北省涿州市醫(yī)院

R446．11

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1002-7386(2014)03-0445-03

2013-09-28)