王宏

全自動(dòng)加樣器陽(yáng)性拖帶現(xiàn)象的分析

王宏

目的 通過(guò)倍比稀釋, 確定區(qū)別anti-HCV強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和普通陽(yáng)性標(biāo)本(不發(fā)生陽(yáng)性拖帶)的臨界滴度范圍。方法 用HAMILTON Microlab AT Plus 2 全自動(dòng)加樣器對(duì)經(jīng)倍比稀釋的anti-HCV強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和普通陽(yáng)性標(biāo)本(不發(fā)生陽(yáng)性拖帶)加樣, 進(jìn)行ELISA檢測(cè), 通過(guò)對(duì)引起陽(yáng)性拖帶現(xiàn)象的強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本臨界滴度和不引起陽(yáng)性拖帶的普通陽(yáng)性標(biāo)本臨界滴度的比較, 找到能區(qū)別兩者的臨界滴度范圍。結(jié)果 區(qū)別anti-HCV強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和普通陽(yáng)性標(biāo)本(不發(fā)生陽(yáng)性拖帶)的臨界滴度范圍為1:2048~1:4096。結(jié)論 能夠區(qū)別anti-HCV強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和普通陽(yáng)性標(biāo)本(不發(fā)生陽(yáng)性拖帶)的臨界滴度是存在的, 并可通過(guò)將疑似陽(yáng)性拖帶的標(biāo)本按照臨界滴度倍比稀釋后所得結(jié)果來(lái)快速判斷是否是陽(yáng)性拖帶, 這在血液檢測(cè)工作中具有一定的實(shí)際意義。

全自動(dòng)加樣器；陽(yáng)性拖帶；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；倍比稀釋；臨界滴度

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 2012年8月~11月長(zhǎng)春地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者。

1.2 試劑 丙肝抗體ELISA檢測(cè)試劑盒(廈門(mén)新創(chuàng), 批號(hào)201206065815), 試劑批件合格, 并在有效期內(nèi)使用。

1.3 儀器 HAMILTON Microlab AT Plus 2 全自動(dòng)加樣器, HAMILTON Microlab FAME全自動(dòng)酶免處理系統(tǒng)。

1.4 方法

1.4.1 倍比稀釋 對(duì)anti-HCV強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和普通陽(yáng)性標(biāo)本(不發(fā)生陽(yáng)性拖帶)進(jìn)行1:2、1:4、1:8、1:16倍比稀釋。

1.4.2 加樣

1.4.2.1 強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本的加樣 根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目和試劑說(shuō)明書(shū)的要求, HAMILTON Microlab AT Plus 2控制微機(jī)上編制加樣程序, 由加樣器自動(dòng)加樣。在強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本所在行的下一行每個(gè)孔內(nèi)加入2 ml正常標(biāo)本。

1.4.2.2 普通陽(yáng)性標(biāo)本的加樣 同1.4.2.1。

1.4.3 酶免反應(yīng) 將加完樣的酶標(biāo)板放入Microlab FAME,自動(dòng)進(jìn)行ELISA檢測(cè)并判讀結(jié)果。

2 結(jié)果

在對(duì)血液的酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)中, 用電腦控制的全自動(dòng)加樣系統(tǒng)來(lái)處理樣本, 可以快速、準(zhǔn)確及分配一致性的處理大量樣本, 避免了人工加樣的誤差。但因使用非一次性加樣針,在加樣過(guò)程中遇到高濃度抗原、抗體標(biāo)本, 可能會(huì)出現(xiàn)對(duì)其后幾孔的連續(xù)污染, 即陽(yáng)性拖帶現(xiàn)象?，F(xiàn)通過(guò)倍比稀釋不同濃度標(biāo)本并用ELISA檢測(cè)的方法對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行分析如下, 具體見(jiàn)1。

2.1 引起陽(yáng)性拖帶的強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和其下一行正常標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 三個(gè)強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本造成了不同程度的陽(yáng)性拖帶現(xiàn)象。

表1 強(qiáng)陽(yáng)性、普通陽(yáng)性與被拖帶標(biāo)本進(jìn)一步倍比稀釋所得的OD值

2.2 不引起陽(yáng)性拖帶的普通陽(yáng)性標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 在相同滴度條件下, 強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本的OD值大于普通陽(yáng)性標(biāo)本, 這說(shuō)明能引起陽(yáng)性拖帶現(xiàn)象的標(biāo)本所含的anti-HCV含量高于不引起拖帶的標(biāo)本。進(jìn)一步對(duì)強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和普通陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行倍比稀釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果, 在同樣兩個(gè)相鄰滴度間, 強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本OD值的下降幅度大于普通陽(yáng)性標(biāo)本。

2.3 對(duì)10個(gè)不同滴度的強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和普通陽(yáng)性標(biāo)本的OD值進(jìn)行秩和檢驗(yàn), 實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出, 在滴度為1:2048~1:4096之間, 6

3 討論

如果在對(duì)血液標(biāo)本的檢測(cè)中將因拖帶污染而形成的假反應(yīng)性標(biāo)本誤判為反應(yīng)性不但會(huì)造成寶貴血液資源的浪費(fèi), 同時(shí)還會(huì)給獻(xiàn)血者帶來(lái)巨大的心理壓力, 對(duì)廣大自愿者的積極性帶來(lái)巨大的負(fù)面影響。因此設(shè)法減少甚至避免陽(yáng)性拖帶現(xiàn)象的發(fā)生成為了一個(gè)值得讓檢驗(yàn)人員關(guān)心的問(wèn)題［1］。找到造成陽(yáng)性拖帶的強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和不同陽(yáng)性標(biāo)本的區(qū)別方法, 不僅能夠有效地減少再檢次數(shù), 節(jié)約試劑, 還能做到能迅速判斷拖帶現(xiàn)象并減少因拖帶導(dǎo)致的誤檢。

能引起陽(yáng)性拖帶現(xiàn)象的anti-HCV標(biāo)本和通常的陽(yáng)性標(biāo)本相比, 含有更高濃度的抗體, 因此這些標(biāo)本能對(duì)下一行的標(biāo)本形成拖帶污染。而其在經(jīng)過(guò)倍比稀釋后, 所含抗體濃度下降的趨勢(shì)和普通陽(yáng)性標(biāo)本也有不同［2］。在起初的幾個(gè)滴度下, 強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本所含抗體濃度下降比普通陽(yáng)性標(biāo)本更為明顯。而隨著稀釋倍數(shù)的增大, 兩者的OD值開(kāi)始相對(duì)的逐漸接近,當(dāng)達(dá)到能區(qū)別它們的臨界滴度時(shí), 強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本和普通陽(yáng)性標(biāo)本的OD值最為接近。繼續(xù)稀釋, 當(dāng)?shù)味瘸^(guò)這個(gè)臨界滴度時(shí), 由于普通陽(yáng)性標(biāo)本所含抗體濃度已達(dá)到陰性值, OD值有了較大的下降。因此通過(guò)這些可以大致確定臨界滴度的范圍。

同時(shí)本試驗(yàn)有很多不足之處, 如引起拖帶的強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本量少, 統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算結(jié)果與真實(shí)情況相比難免有些誤差, 在今后的學(xué)習(xí)研究中要盡量減少這種情況。

［1］ 閆曉鵬,李雪英,王文莉.ELISA檢測(cè)中全自動(dòng)加樣引起拖帶污染現(xiàn)象的原因分析及對(duì)策.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用, 2011, 5(13): 136-137.

［2］ 張國(guó)強(qiáng),徐力東,毛秀軍.抗-HCV陽(yáng)性標(biāo)本隔批拖帶引起S/ CO值升高結(jié)果分析,中國(guó)輸血雜志, 2011, 24(6):511-512.

130000 長(zhǎng)春市中心血站