胡亞男

清開靈滴丸中梔子苷的HPLC含量測定研究

胡亞男

目的 建立清開靈滴丸中梔子苷的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法(HPLC)對清開靈滴丸中梔子苷進行了含量測定實驗研究。結果 梔子苷線性范圍為0.05936～0.8904 μg，回歸方程為y=1.50×106x+4.80×103,R2=1.000；平均回收率為97.93%(RSD=2.36%)。同時測定了七批供試品中梔子苷的含量。結論 本方法可作為清開靈滴丸中梔子苷含量測定的一種準確、靈敏、可行的方法。

清開靈滴丸；梔子；梔子苷；高效液相色譜法

清開靈滴丸由膽酸、珍珠母、豬去氧膽酸、梔子、水牛角、板藍根、黃芩苷、金銀花等八味中藥組成。具有清熱解毒，鎮(zhèn)靜安神的功效。方中梔子為茜草科植物梔子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果實，收載于《中國藥典》2005年版一部[1]。梔子具有涼血止血、清熱解毒、瀉熱利濕等功效。據(jù)文獻報導，其主要活性成分為梔子苷。參照《中國藥典》2005年版一部[1]及相關文獻[2-4]項下方法，建立高效液相色譜法測定其含量。方法學試驗證明，該方法結果滿意、靈敏、準確、重現(xiàn)性好。可作為該藥內(nèi)在質(zhì)量的監(jiān)控指標。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 日本島津LC-2010高效液相色譜儀、日本島津LC-20A 高效液相色譜儀、日本島津UV-2450紫外-可見分光光度計、SartoriusME5百萬分之一電子天平、METTLER AE240十萬分之一天平、METTLER AE100萬分之一天平、超聲波清洗儀、資生堂CAPCELL PAK-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm)。

1.2 試藥與試劑 梔子苷對照品(批號：110749-200512，供含量測定用)：由中國藥品生物制品檢定所提供。樣品：由江蘇正大清江制藥有限公司(批號： 080216)、內(nèi)蒙古包頭中藥廠(批號： 070519、 070520、070521)、海南賽立克藥業(yè)有限公司(批號：080103、080201、080202)提供。乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 試驗條件的選擇

2.1 提取時間的選擇 以甲醇為提取溶劑，分別考察了超聲提取20、30、40 min三種方法對含量的影響，結果如下：20 min，取藥量2.0234 g，含量1.659 mg/g;30 min,取藥量2.0155 g，含量1.726 mg/g; 40 min,取藥量2.0327 g，含量1.728 mg/g。試驗結果表明，超聲20 min提取含量較低，而超聲30 min和40 min提取結果基本一致，所以選用超聲30 min提取法。

2.2 色譜條件的選擇

2.2.1 流動相的選擇 參照《中國藥典》2005年版一部“梔子”含量測定項下，以乙腈-水(10 ∶ 90)、(12 ∶ 88)、(15 ∶ 85)為流動相，進行試驗。試驗結果表明，以乙腈-水(12 ∶ 88)為流動相，可使梔子苷與其他成分達到基線分離，且峰形較好，故選擇該流動相。

2.2.2 檢測波長的選擇 取梔子苷對照品溶液在190～300 nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描，結果梔子苷在238.64 nm處有最大吸收，參照《中國藥典》2005年版一部“梔子”項下【含量測定】項下規(guī)定，確定測定波長為238 nm。

2.3 溶液的配制 對照品溶液的配制: 取梔子苷對照品適量，精密稱定，置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 ml含梔子苷30 μg)。供試品溶液的配制: 取本品150丸，研碎，取2 g，精密稱定，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理30 min(功率250 W，頻率40 Hz),放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻即得。陰性空白溶液的配制: 取梔子空白對照品，同供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液，即得。

3 方法與結果

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 資生堂CAPCELL PAK-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；檢測波長238 nm；流動相：乙腈-水(12∶88)；流速：1.0 ml/min；柱溫：30℃；進樣量：10 μl；理論板數(shù)按梔子苷峰計算應≥1500。

3.2 空白干擾試驗 取陰性空白對照溶液，在上述色譜條件下測定，結果陰性對照品色譜圖中，在與梔子苷對照品色譜圖相對應的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明處方中其它藥味所含組分對梔子苷的測定無干擾。

3.3 線性關系考察 精密稱取梔子苷對照品2.968 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取2 μl、5 μl、10 μl、15 μl、25 μl、30 μl，分別注入液相色譜儀，測定峰面積值。以峰面積積分值對進樣量進行回歸分析，結果梔子苷在0.05936～0.8904 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系，回歸方程為y=1.50×106x+4.80×103,R2=1.000。標準曲線測定結果如下：進樣量0.05936 μg，峰面積積分值89764；進樣量0.1484 μg，峰面積積分值226917；進樣量0.2968 μg，峰面積積分值453003；進樣量0.4452 μg，峰面積積分值679068；進樣量0.7420 μg，峰面積積分值1116751；進樣量0.8904 μg，峰面積積分值1339570。

3.4 精密度試驗 精密吸取按擬定的方法制備的供試品溶液(批號：070521)10 μl,重復進樣6次，測定供試品中梔子苷峰面積積分值。結果如下：各組的峰面積分值分別為：1135152、1119011、1113402、1122785、1146711、1136928，結果RSD(%)為1.11%。試驗結果表明，精密度良好。

3.5 穩(wěn)定性試驗 取同一批號樣品(批號：070521)，按擬定的方法制備供試品溶液，精密吸取10 μl，分別在0 h、3 h、6 h、9 h、12 h進樣，測定供試品中梔子苷的峰面積積分值。結果如下：0 h進樣，峰面積積分分值分別為1107034；3 h進樣，峰面積積分分值分別為1077805；6 h進樣，峰面積積分分值分別為1113762；9 h進樣，峰面積積分分值分別為1112106；12 h進樣，峰面積積分分值分別為1124646，結果RSD(%)為1.58%。試驗結果表明，精密度良好。試驗結果表明，供試品溶液中梔子苷在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.6 重現(xiàn)性試驗 取同一批號樣品(批號：070521)，分別按上述供試品溶液的配制方法制備6份樣品溶液，測得峰面積積分值并計算含量，平均含量=1.713 mg/g，RSD=1.78%。結果：重現(xiàn)性試驗良好。

3.7 加樣回收試驗 采用加樣回收法，精密稱取已知梔子苷含量的樣品(批號:070521)6份，精密稱取1 g， 分別加入1 ml(14.15 mg/10 ml)梔子苷對照品溶液，按【樣品含量測定】項下方法操作并測定每份的含量，計算回收率，結果：平均回收率=97.93%，RSD=2.36%。試驗結果表明，回收率在95%～105%之間，RSD為2.36%，準確度較好。

3.8 樣品含量測定 測定法精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10 μl，分別注入高效液相色譜儀，測定，即得。樣品的含量測定結果見表1。

表1 樣品中梔子苷含量測定結果

4 小結

本課題對其所含主要活性成分梔子苷進行了HPLC含量測定。試驗證明，該方法操作簡便，測定結果準確，重現(xiàn)性好，對控制清開靈滴丸內(nèi)在質(zhì)量具有重要意義。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典2005年版(一部).北京:化學工業(yè)出版社,2005 ：173.

[2] 孫斌.HPLC法測定梔柏合劑中梔子苷的含量.中國藥房,2007,18(33):2609-2610.

[3] 羅布倉.液相色譜法同時測定梔子金花丸中梔子苷和鹽酸小檗堿的含量.湖北大學學報(自然科學版),2007,29(3)：283-285.

[4] 李海洲，亓彥平.高效液相色譜法測定梔子金花中梔子苷的含量.中國藥業(yè),2005,14(9)：50-51.

024000赤峰市第二醫(yī)院藥劑科