嚴(yán)鳳英，李曉潔，呂 群，張小建

(四川省人民醫(yī)院 婦產(chǎn)科，四川 成都，610072)

輔助生育技術(shù)是治療不孕不育癥的有效方法,其給越來(lái)越多的不孕不育癥患者帶來(lái)了希望。體外受精-胚胎移植(IVF-ET)是其重要代表[1-2]。胚胎在體外培養(yǎng)至囊胚期可行囊胚移植。囊胚培養(yǎng)可經(jīng)篩選而發(fā)展為優(yōu)質(zhì)胚胎，但其也減少了可移植胚胎的利用率。本研究觀察優(yōu)質(zhì)囊胚培養(yǎng)與D2D3胚胎卵裂球數(shù)及碎片評(píng)級(jí)的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析本院2013年11月—2014年1月行囊胚培養(yǎng)的IVF-ET患者臨床資料，年齡21～44歲，平均年齡(31.1±5.2)歲。入選標(biāo)準(zhǔn): ① 患者為輸卵管、排卵障礙及男性等因素引起; ② 胚胎均為受精后2原核不符合移植和冷凍標(biāo)準(zhǔn)，包括D3發(fā)育遲緩的4～6個(gè)細(xì)胞。D3發(fā)育過(guò)快的≥10個(gè)細(xì)胞。D3發(fā)育正常7～9個(gè)細(xì)胞的胚胎; ③ 無(wú)嚴(yán)重重要臟器功能衰竭者; ④ 患者均簽署治療知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 染色體異常和子宮畸形等患者; ② 嚴(yán)重重要臟器功能障礙者; ③ 未簽署治療知情同意書(shū)者。

1.2 方法

采用G2囊胚培養(yǎng)液對(duì)所選囊胚進(jìn)行培養(yǎng)。將其放置35 mm的培養(yǎng)皿中，40 μL液滴覆蓋礦物油。將其放于37 ℃、6% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.3 胚胎評(píng)分

將胚胎分為4個(gè)等級(jí)。Ⅰ級(jí):胚胎卵裂球均勻、規(guī)則，透明帶完成且折光良好。碎片≤5%；Ⅱ級(jí)：卵裂球稍欠均勻、輕度不規(guī)則。折光度稍變化，碎片≤20%; Ⅲ級(jí)：卵裂球欠均勻，透明帶完整。碎片≤50%，有一定折光性；Ⅳ級(jí)：胚胎內(nèi)碎片≥50%。碎片外卵裂球具有活力。優(yōu)質(zhì)胚胎：D2為4個(gè)細(xì)胞數(shù)、D3為7～9個(gè)細(xì)胞數(shù)的Ⅰ、Ⅱ級(jí)胚胎。根據(jù)Gamder囊胚分級(jí)法對(duì)形成的囊胚進(jìn)行分級(jí)。將囊胚分成1～6級(jí): 3～6級(jí)囊胚需對(duì)內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(ICM)進(jìn)行評(píng)分。將其分為A級(jí)、B級(jí)、C級(jí)。將5～6 d囊胚評(píng)分≥3級(jí)，且其ICM為A或B級(jí)定為優(yōu)質(zhì)囊胚[3]。

2 結(jié) 果

2.1 優(yōu)質(zhì)囊胚與D3胚胎卵裂球數(shù)

D3≥10個(gè)細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為38.9%，7～9個(gè)細(xì)胞43.1%，比較無(wú)顯著差異(χ2=0.96，P>0.05)。7～9個(gè)細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為43.1%，顯著高于4～6個(gè)細(xì)胞10.3%，比較有顯著差異(χ2=97.53，P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 優(yōu)質(zhì)囊胚與D3胚胎卵裂球數(shù)關(guān)系[n(%)]

2.2 優(yōu)質(zhì)囊胚與D2胚胎卵裂球數(shù)

D24個(gè)細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為43.6%，顯著高于5個(gè)細(xì)胞28.9%，比較有顯著差異(χ2=10.22，P<0.05)，同時(shí)其也顯著高于2～3個(gè)細(xì)胞數(shù)12.3%，比較有顯著差異(χ2=63.78，P<0.05)。5個(gè)細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為28.9%，6個(gè)細(xì)胞23.4%，比較無(wú)顯著差異(χ2=0.77，P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 優(yōu)質(zhì)囊胚與D2胚胎卵裂球數(shù)關(guān)系[n(%)]

2.3 優(yōu)質(zhì)囊胚與D3、D2胚胎碎片

Ⅰ、Ⅱ級(jí)D3胚胎碎片的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為36.4%，顯著高于Ⅲ、Ⅳ級(jí)6.1%，比較有顯著差異(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ級(jí)D2胚胎碎片的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為35.3%，顯著高于Ⅲ、Ⅳ級(jí)4.7%，比較有顯著差異(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 優(yōu)質(zhì)囊胚與D3、D2胚胎碎片的關(guān)系

3 討 論

輔助生殖技術(shù)是治療不孕不育的常用方法。多胎妊娠發(fā)生率為30%，明顯高于自然妊娠[4-5]。人類(lèi)胚胎以囊胚形式植入母體。卵子受精后第5～7天即可形成囊胚，其同時(shí)也是胚胎體外培養(yǎng)的終末階段。胚胎從卵裂期至囊胚經(jīng)歷較大變化。其包括細(xì)胞融合、囊胚腔形成、囊胚腔擴(kuò)張和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)孵出[6-7]。染色體異常及發(fā)育潛能低者可停止發(fā)育。條件較好的胚胎才有發(fā)育為囊胚的潛能。胚胎在體外發(fā)育至囊胚期可行囊胚移植。其可明顯提高胚胎種植率。同時(shí)還可明顯降低多胎妊娠的發(fā)生率。但囊胚移植既有優(yōu)勢(shì)，也有不足之處[8-9]。囊胚培養(yǎng)可經(jīng)篩選而發(fā)展為優(yōu)質(zhì)胚胎，但其也減少了可移植胚胎的利用率。囊胚培養(yǎng)可有效地篩選優(yōu)良胚胎，進(jìn)而提高囊胚著床率及妊娠率。臨床可根據(jù)胚胎形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行評(píng)價(jià)、分級(jí)。研究[10-11]顯示，胚胎卵裂球數(shù)及碎片評(píng)級(jí)與優(yōu)質(zhì)囊胚密切相關(guān)。胚胎碎片的增多可降低囊胚形成率，同時(shí)碎片會(huì)影響細(xì)胞之間的連接，進(jìn)而干擾細(xì)胞融合、囊胚腔的形成。碎片可釋放有毒物質(zhì)而損傷鄰近的細(xì)胞。

本研究探討IVF治療周期中體外培養(yǎng)優(yōu)質(zhì)囊胚形成情況，同時(shí)分析其與D2D3胚胎卵裂球數(shù)及碎片評(píng)級(jí)關(guān)系。結(jié)果顯示: D3≥10個(gè)細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為38.9%，7～9個(gè)細(xì)胞43.1%，比較無(wú)顯著差異(P>0.05)。7～9個(gè)細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為43.1%，顯著高于4～6個(gè)細(xì)胞10.2%，比較有顯著差異(P<0.05); D24個(gè)細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為43.6%，顯著高于5個(gè)細(xì)胞28.9%，比較有顯著差異(P<0.05)，同時(shí)其也顯著高于2～3個(gè)細(xì)胞數(shù)12.3%，比較有顯著差異(P<0.05)。5個(gè)細(xì)胞的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為28.9%,6個(gè)細(xì)胞23.4%，比較無(wú)顯著差異(P>0.05); Ⅰ、Ⅱ級(jí)D3胚胎碎片的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為36.4%，顯著高于Ⅲ、Ⅳ級(jí)6.1%，比較有顯著差異(P<0.05)。Ⅰ、Ⅱ級(jí)D2胚胎碎片的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率為35.3%，顯著高于Ⅲ、Ⅳ級(jí)4.7%，比較有顯著差異(P<0.05)。因此，延長(zhǎng)體外受精培養(yǎng)可有效篩選發(fā)育潛力的胚胎。D3胚胎卵裂球數(shù)越多，優(yōu)質(zhì)囊胚越多。D2胚胎4個(gè)細(xì)胞，囊胚發(fā)育能力較好。Ⅰ、Ⅱ級(jí)D2、D3胚胎碎片的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率較高。優(yōu)質(zhì)囊胚形成與D2、D3胚胎卵裂球數(shù)及碎片評(píng)級(jí)密切相關(guān)，這一結(jié)果與國(guó)內(nèi)相關(guān)研究相一致[12-13]。這表明囊胚發(fā)育潛能的關(guān)鍵因素在于D3胚胎發(fā)育速度，發(fā)育速度過(guò)快的胚胎更易形成優(yōu)質(zhì)囊胚。10個(gè)或以上細(xì)胞的D3胚胎也易形成優(yōu)質(zhì)囊胚。

綜上所述，延長(zhǎng)體外受精培養(yǎng)可有效篩選發(fā)育潛力的胚胎。D3胚胎卵裂球數(shù)越多，優(yōu)質(zhì)囊胚越多。D2胚胎4個(gè)細(xì)胞，囊胚發(fā)育能力較好。Ⅰ、Ⅱ級(jí)D2、D3胚胎碎片的優(yōu)質(zhì)囊胚形成率較高。優(yōu)質(zhì)囊胚形成與D2、D3胚胎卵裂球數(shù)及碎片評(píng)級(jí)密切相關(guān)。

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