管建云+++李軍擴(kuò)

[摘要] 目的 探討人類表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其臨床意義。 方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HER2蛋白在62例膀胱尿路上皮細(xì)胞癌和23例正常膀胱黏膜組織標(biāo)本中的表達(dá)情況，分析其與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展、病理分級(jí)及臨床分期的關(guān)系。 結(jié)果 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為43.5%，顯著高于正常膀胱黏膜組織的0，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；HER2蛋白表達(dá)水平與膀胱尿路上皮細(xì)胞癌的病理分級(jí)、臨床分期及復(fù)發(fā)相關(guān)（P<0.05）。 結(jié)論 HER2蛋白的過表達(dá)與人膀胱尿路上皮細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。檢測(cè)HER2的表達(dá)情況可能對(duì)預(yù)測(cè)膀胱尿路上皮細(xì)胞癌的預(yù)后及選擇治療方法具有重要價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 膀胱腫瘤；尿路上皮細(xì)胞癌；人類表皮生長(zhǎng)因子受體2蛋白；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號(hào)] R737.14 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）08（c）-0013-04

膀胱癌是常見的惡性腫瘤，其中90%以上為尿路上皮細(xì)胞癌[1]，病死率較高。腫瘤的藥物靶向治療具有選擇性好、毒副作用小、臨床療效顯著等特點(diǎn)，近年來(lái)已成為腫瘤臨床治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。人類表皮生長(zhǎng)因子受體2（human epidermal growth factor receptor-2，HER2）蛋白在多種惡性腫瘤，如乳腺、卵巢、膀胱、胃、結(jié)腸、小腸和肺癌高表達(dá)?？笻ER2治療已成功應(yīng)用于乳腺癌、胃癌的臨床治療，將來(lái)也有可能成為膀胱癌治療的靶點(diǎn)。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌中的表達(dá)并分析其與膀胱尿路上皮細(xì)胞癌的臨床病理關(guān)系，探討其臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本組收集2010年6月～2013年3月安陽(yáng)市腫瘤醫(yī)院開放手術(shù)切除，均經(jīng)病理證實(shí)為膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者的組織標(biāo)本62例，男47例，女15例；年齡34～78歲，平均（57.8±6.1）歲；按WHO病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ級(jí)22例，Ⅱ級(jí)24例，Ⅲ級(jí)16例；按UICC-TNM臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：Ta～Tl期37例，T2～T4期25例；初發(fā)35例，復(fù)發(fā)27例。23例對(duì)照組正常膀胱組織取自同期其他膀胱手術(shù)患者，男17例，女6例；年齡26～72歲，平均（55.3±7.5）歲。兩組患者的年齡、性別等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 試劑與方法

鼠抗人HER2/neu單克隆抗體購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司；SP免疫組織化學(xué)試劑盒及DAB顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。所有標(biāo)本經(jīng)常規(guī)10%甲醛固定，脫水，包埋，4 μm薄切片，脫蠟，分別作HE及免疫組織化學(xué)染色。免疫組織化學(xué)SP法，按試劑盒說明書操作。用PBS代替一抗作陰性對(duì)照，己知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

HER2蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要定位于腫瘤細(xì)胞膜，光鏡下觀察到細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒，顯色過強(qiáng)時(shí)呈棕褐色，計(jì)為陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞。采用修訂后的HercepTest評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[2]作結(jié)果判定：細(xì)胞膜無(wú)著色或<10%的細(xì)胞膜著色計(jì)為0，>10%的細(xì)胞膜見輕微著色計(jì)為+，>10%的細(xì)胞膜弱著色計(jì)為++，>10%的細(xì)胞膜中到強(qiáng)的完全著色計(jì)為+++；0和+為陰性，++和+++為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，小樣本資料采用Fisher確切概率法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 膀胱尿路上皮癌和正常膀胱黏膜組織中HER2蛋白的表達(dá)

HER2蛋白陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞膜棕黃色顆粒狀著色（圖1）。HER2蛋白在62例膀胱癌組織中有27例呈陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)率為43.5%，在23例正常膀胱組織中未見表達(dá)，表達(dá)率為0。HER2蛋白在膀胱癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常膀胱黏膜組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 HER2蛋白表達(dá)與膀胱尿路上皮癌臨床病理特征的關(guān)系

HER2蛋白在膀胱尿路上皮癌Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為22.7%、41.7%、75.0%，隨著膀胱癌病理分級(jí)的增高而增高，其組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HER2蛋白在T2～T4組中的陽(yáng)性表達(dá)率為64.0%，明顯高于Ta～T1組的29.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HER2蛋白在初發(fā)、復(fù)發(fā)的膀胱癌組織中，陽(yáng)性表達(dá)率分別為25.7%、66.7%，復(fù)發(fā)組明顯高于初發(fā)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

HER2基因（也即c-erbB-2基因）為原癌基因，是HER家族的第2個(gè)成員，它定位人染色體17q21，編碼p185跨膜糖蛋白。HER2蛋白為生長(zhǎng)因子受體蛋白，由胞外配體結(jié)合區(qū)（extracellular domain，ECD）、單鏈跨膜區(qū)及胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)組成，具有內(nèi)源性酪氨酸激酶活性。目前尚未發(fā)現(xiàn)其特異性配體，一般認(rèn)為HER2蛋白的ECD與配體結(jié)合后，引發(fā)自身變構(gòu)，導(dǎo)致其與同種蛋白或EGFR家族的其他成員形成同、異二聚體，使其胞內(nèi)區(qū)發(fā)生自身磷酸化，從而具有酪氨酸激酶活性。其作用于特定的信號(hào)蛋白，激活磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K/Akt）和絲裂原活化蛋白激酶通路（RAS/MAPK）等信號(hào)通路，引發(fā)級(jí)聯(lián)式放大反應(yīng)，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)經(jīng)細(xì)胞膜和細(xì)胞間質(zhì)至細(xì)胞核，使核內(nèi)早期反應(yīng)基因如原癌基因c-fos、c-jun等激活，在轉(zhuǎn)錄水平增加，促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化、抗凋亡，從而導(dǎo)致癌變。MAPK信號(hào)通路對(duì)于促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂、阻止細(xì)胞凋亡起到關(guān)鍵作用[3]，PI3K/Akt信號(hào)通路與多種腫瘤的細(xì)胞增殖、凋亡抑制、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及血管生成密切相關(guān)[4]。另外，RAS也可以直接激活PI3K[5]。HER2還可通過上調(diào)低氧誘導(dǎo)因子（HIF）而誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)，促腫瘤血管生成。

HER2蛋白通常只在坯胎時(shí)期表達(dá)，成年后極少數(shù)組織內(nèi)有低水平表達(dá)。在多種人類腫瘤包括乳腺癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、肺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和唾液腺癌等可見過度表達(dá)，并與之預(yù)后關(guān)系密切[6-7]；有研究表明除乳腺癌、大腸癌外，膀胱癌是第三個(gè)有HER2較高表達(dá)的惡性腫瘤[8]。國(guó)內(nèi)外學(xué)者[9-10]對(duì)HER2基因及HER2蛋白與膀胱癌的關(guān)系進(jìn)行了研究，證實(shí)在部分膀胱癌組織中HER2蛋白呈現(xiàn)出陽(yáng)性過表達(dá)，此類腫瘤分期和分級(jí)多較高，容易發(fā)生浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移，預(yù)后不佳。有報(bào)道顯示[11-12]，HER2陽(yáng)性表達(dá)與浸潤(rùn)性膀胱癌相關(guān)，并能作為指示腫瘤復(fù)發(fā)及病死率的獨(dú)立預(yù)后因素。本研究顯示HER2蛋白在部分膀胱癌組織中高表達(dá)，正常膀胱黏膜組織無(wú)表達(dá)，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示HER2參與了膀胱癌的發(fā)生，HER2蛋白過表達(dá)與膀胱癌的病理分級(jí)、臨床分期和復(fù)發(fā)均有密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示HER2蛋白表達(dá)陽(yáng)性的膀胱癌惡性程度較高，且更容易復(fù)發(fā)。通過檢測(cè)HER2的表達(dá)能夠篩選出高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的膀胱腫瘤患者并于術(shù)后密切監(jiān)測(cè)[13]。這些腫瘤患者在根治性全膀胱切除術(shù)后HER2單克隆抗體的輔助性治療可能獲益。

臨床上，膀胱移行細(xì)胞癌是一種常見的和致命性的癌癥，易復(fù)發(fā)、復(fù)發(fā)后惡性程度增高，約25%的膀胱癌患者已是或?qū)l(fā)展成為浸潤(rùn)性病變[1]，目前對(duì)這些患者的治療是根治膀胱切除術(shù)或根治術(shù)后放、化療相結(jié)合。盡管采取這些措施，仍有約50%的患者治療后復(fù)發(fā)并最終在5年內(nèi)死于該疾病。近20年來(lái)，晚期膀胱癌的生存率無(wú)明顯提高，很大一方面是局限于無(wú)有效的新藥物可用。近年來(lái)雖然其他實(shí)體腫瘤的分子靶向治療已取得明顯效果，但靶向治療在膀胱癌的應(yīng)用已明顯落后。選擇可能的分子靶點(diǎn)，應(yīng)用靶向藥物實(shí)施個(gè)體化治療將會(huì)使更多患者受益。HER2在許多類型的癌癥，包括膀胱尿路上皮癌中可能發(fā)揮重要的作用。目前曲妥珠單抗無(wú)論是單用還是聯(lián)合化療都己在HER2表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌臨床治療中取得了明顯療效，以HER2為靶點(diǎn)的藥物也已用于消化系統(tǒng)惡性腫瘤的臨床治療[14-15]。膀胱癌的抗HER2治療已在動(dòng)物試驗(yàn)及臨床試驗(yàn)開展[16-17]，并顯示出抗腫瘤療效，但是要應(yīng)用于臨床治療，還需要更深入的研究及整個(gè)泌尿外科參與和支持。

綜上所述，HER2在部分膀胱尿路上皮癌中高表達(dá)，并與之發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后關(guān)系密切，檢測(cè)HER2的表達(dá)情況可能對(duì)預(yù)測(cè)膀胱尿路上皮癌的預(yù)后及選擇治療方法具有重要價(jià)值。相信隨著研究的不斷深入，對(duì)于HER2過表達(dá)的膀胱尿路上皮癌患者，選擇應(yīng)用有效抑制HER2信號(hào)激活通路的藥物，有望提高療效、改善預(yù)后。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Bellmunt J，Petrylak DP.New therapeutic challenges in advanced bladder cancer[J].Semin Oncol，2012，39（5）：598-607.

[2] Hofmann M，Stoss O，Shi D，et al.Assessment of a HER2 scoring system for gastric cancer：results from a validation study[J].Histopathology，2008，52（7）：797-805.

[3] Garrett JT，Olivares MG，Rinehart C，et al.Transcriptional and posttranslational up-regulation of HER3 （ErbB3） compensates for inhibition of the HER2 tyrosine kinase[J].Proc Natl Acad Sci USA，2011，108（12）：5021-5026.

[4] Gomez-Cambronero J.New concepts in phospholipase D signaling in inflammation and cancer[J].Sci World J，2010， 10：1356-1369.

[5] Koperek O，Kornauth C，Capper D，et al.Immunohistochemical detection of the BRAF V600E-mutated protein in papillary thyroid carcinoma[J].Am J Surg Pathol，2012，36（6）：844-850.

[6] Burandt E，Schreiber M，Stein A，et al.Continuous tissue microarray based identification of cancers with homogeneous target expression for successful targeted therapy in clinical routine practice[J].Genes Chromosomes Cancer，2014， 53（3）：228-239.

[7] Révillion F，Lhotellier V，Hornez L，et al.ErbB/HER ligands in human breast cancer，and relationships with their receptors，the bio-pathological features and prognosis[J].Ann Oncol，2008，19（1）：73-80.

[8] 俞平，楊兆瑞，路光中，等.乳腺癌HER-2/neu的免疫組織化學(xué)檢測(cè)[J].中華病理學(xué)雜志，2003，32（5）：479-481.

[9] 胡文暉，郝斌，李惠翔，等.不同組織學(xué)類型膀胱癌組織中HER2蛋白的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014， 49（1）：96-98.

[10] Ross JS，Wang K，Gay LM，et al.A high frequency of activating extracellular domain ERBB2 （HER2） mutation in micropapillaryurothelialcarcinoma[J].Clin Cancer Res，2014，20（1）：68-75.

[11] Enache M，Simionescu CE，Stepan A.EGFR and Her2/neuimmunoexpression in papillary urothelialbladder carcinomas[J].Rom J Morphol Embryol，2013，54（1）：137-141.

[12] Grivas PD，Day KC，Karatsinides A，et al.Evaluation of the antitumor activity of dacomitinib in models of human bladder cancer[J].Mol Med，2013，8（19）：367-376.

[13] Chen PC，Yu HJ，Chang YH，et al.HER2 amplification distinguishes a subset of non-muscle-invasive bladder cancers with a high risk of progression[J].J Clin Pathol，2013，66（2）：113-119.

[14] 毛必靜，張志敏，陳川，等.HER2在胃癌靶向治療中的作用及意義[J].世界華人消化雜志，2014，22（1）：31-38.

[15] J？尷rgensen JT.Role of human epidermal growth factor receptor 2 in gastric cancer： biological and pharmacological aspects[J].World J Gastroenterol，2014，20（16）：4526-4535.

[16] Peyromaure M，Scotté F，Amsellem-Ouazana D，et al.Tras-tuzumab （Herceptin） in metastatic transitional cell carcinoma of the urinary tract： report on six patients[J].Eur Urol，2005，48（5）：771-775.

[17] Hussain MH，MacVicar GR，Petrylak DP，et al.Trastuzumab，paclitaxel，carboplatin，and gemcitabine in advanced human epidermal growth factor receptor-2/neu-positive urothelial carcinoma：results of a multicenter phaseⅡ National Cancer Institute trial[J].J Clin Oncol，2007，25（16）：2218-2224.

（收稿日期：2014-06-27 本文編輯：郭靜娟）

[9] 胡文暉，郝斌，李惠翔，等.不同組織學(xué)類型膀胱癌組織中HER2蛋白的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014， 49（1）：96-98.

[10] Ross JS，Wang K，Gay LM，et al.A high frequency of activating extracellular domain ERBB2 （HER2） mutation in micropapillaryurothelialcarcinoma[J].Clin Cancer Res，2014，20（1）：68-75.

[11] Enache M，Simionescu CE，Stepan A.EGFR and Her2/neuimmunoexpression in papillary urothelialbladder carcinomas[J].Rom J Morphol Embryol，2013，54（1）：137-141.

[12] Grivas PD，Day KC，Karatsinides A，et al.Evaluation of the antitumor activity of dacomitinib in models of human bladder cancer[J].Mol Med，2013，8（19）：367-376.

[13] Chen PC，Yu HJ，Chang YH，et al.HER2 amplification distinguishes a subset of non-muscle-invasive bladder cancers with a high risk of progression[J].J Clin Pathol，2013，66（2）：113-119.

[14] 毛必靜，張志敏，陳川，等.HER2在胃癌靶向治療中的作用及意義[J].世界華人消化雜志，2014，22（1）：31-38.

[15] J？尷rgensen JT.Role of human epidermal growth factor receptor 2 in gastric cancer： biological and pharmacological aspects[J].World J Gastroenterol，2014，20（16）：4526-4535.

[16] Peyromaure M，Scotté F，Amsellem-Ouazana D，et al.Tras-tuzumab （Herceptin） in metastatic transitional cell carcinoma of the urinary tract： report on six patients[J].Eur Urol，2005，48（5）：771-775.

[17] Hussain MH，MacVicar GR，Petrylak DP，et al.Trastuzumab，paclitaxel，carboplatin，and gemcitabine in advanced human epidermal growth factor receptor-2/neu-positive urothelial carcinoma：results of a multicenter phaseⅡ National Cancer Institute trial[J].J Clin Oncol，2007，25（16）：2218-2224.

（收稿日期：2014-06-27 本文編輯：郭靜娟）

[9] 胡文暉，郝斌，李惠翔，等.不同組織學(xué)類型膀胱癌組織中HER2蛋白的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014， 49（1）：96-98.

[10] Ross JS，Wang K，Gay LM，et al.A high frequency of activating extracellular domain ERBB2 （HER2） mutation in micropapillaryurothelialcarcinoma[J].Clin Cancer Res，2014，20（1）：68-75.

[11] Enache M，Simionescu CE，Stepan A.EGFR and Her2/neuimmunoexpression in papillary urothelialbladder carcinomas[J].Rom J Morphol Embryol，2013，54（1）：137-141.

[12] Grivas PD，Day KC，Karatsinides A，et al.Evaluation of the antitumor activity of dacomitinib in models of human bladder cancer[J].Mol Med，2013，8（19）：367-376.

[13] Chen PC，Yu HJ，Chang YH，et al.HER2 amplification distinguishes a subset of non-muscle-invasive bladder cancers with a high risk of progression[J].J Clin Pathol，2013，66（2）：113-119.

[14] 毛必靜，張志敏，陳川，等.HER2在胃癌靶向治療中的作用及意義[J].世界華人消化雜志，2014，22（1）：31-38.

[15] J？尷rgensen JT.Role of human epidermal growth factor receptor 2 in gastric cancer： biological and pharmacological aspects[J].World J Gastroenterol，2014，20（16）：4526-4535.

[16] Peyromaure M，Scotté F，Amsellem-Ouazana D，et al.Tras-tuzumab （Herceptin） in metastatic transitional cell carcinoma of the urinary tract： report on six patients[J].Eur Urol，2005，48（5）：771-775.

[17] Hussain MH，MacVicar GR，Petrylak DP，et al.Trastuzumab，paclitaxel，carboplatin，and gemcitabine in advanced human epidermal growth factor receptor-2/neu-positive urothelial carcinoma：results of a multicenter phaseⅡ National Cancer Institute trial[J].J Clin Oncol，2007，25（16）：2218-2224.

（收稿日期：2014-06-27 本文編輯：郭靜娟）