楊遠東，蔡 惠，張靈敏，袁 慧，袁 偉，劉 琳(西安交通大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院麻醉科，西安 710061;通訊作者，E-mail:yyd519@163.com)

磷脂酶A2(PLA2)是一種脂質(zhì)代謝酶，參與多種前炎癥因子的合成代謝，其主要由激活的炎性細胞分泌釋放，在炎癥反應中活性明顯增高，并參與到多種疾病的發(fā)生、發(fā)展，如惡性腫瘤等。目前的研究顯示，多種麻醉藥物能影響到機體的免疫、炎癥反應，調(diào)節(jié)不同炎癥因子的活化或釋放，其中，異丙酚及依托咪酯由于是臨床最常用的靜脈麻醉藥物，往往受到更多的關注。這兩種麻藥均具有起效快、作用時間短、恢復迅速而平穩(wěn)，對呼吸循環(huán)影響輕微的特點［1］。但研究發(fā)現(xiàn)，這兩種靜脈麻醉藥物在用于臨床麻醉誘導及維持時表現(xiàn)出不同的免疫、炎癥調(diào)節(jié)作用［2］。當機體發(fā)生損傷或炎癥時，異丙酚能通過抑制中性粒等細胞的功能顯著降低IL-1、IL-6、IL-8、IFN-γ、TNF-α 等炎癥因子的釋放，而大多研究認為依托咪酯抑制炎癥反應的能力較異丙酚低，但該結論仍存在一定的爭議［3］。而對于其能否影響PLA2的活性尚無相關研究，同時，關于這兩種麻醉藥物對正常機體中炎癥因子的作用也無類似報道。

為此，本研究擬通過檢測異丙酚及依托咪酯作用于實驗兔后血清中的PLA2活性及其他炎癥因子濃度的變化，研究各炎癥因子之間的相關性，以期發(fā)現(xiàn)這兩種麻醉藥物對正常動物體內(nèi)PLA2等炎癥因子的不同影響，為研究其影響機制提供前期基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

新西蘭大白兔24只，雌雄不拘，體重大于2 kg，由西安交通大學實驗動物中心提供，常規(guī)混合飼料喂養(yǎng)。隨機分為3組，每組8只:對照組(C組)、異丙酚組(P組)和依托咪酯組(E組)。

1.2 實驗方法

固定動物后，由耳緣靜脈分別注入誘導劑量的異丙酚(2 mg/kg，P 組)或依托咪酯(0.3 mg/kg，E組)后，異丙酚4 mg/(kg·h)或依托咪酯 0.6 mg/(kg·h)維持泵入2 h。對照組動物由等量生理鹽水替代藥物。所有實驗動物分別于藥物干預前(T0)、麻藥誘導后10 min(T1)、維持劑量后60 min(T2)、120 min(T3)及停止用藥后60 min(T4)、120 min(T5)時采集靜脈血，2 000 r/min離心10 min后，取上清液，液氮保存。

1.3 指標檢測

血清磷脂酶A2活性定量測定參照Cai等［4］描述的熒光底物激發(fā)方法，血清白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)及C反應蛋白(CRP)濃度采用ELISA法測定(ELISA試劑盒均購于美國R＆D公司)。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 一般資料的比較

選用的24只新西蘭大白兔，雄性為14只，雌性10只，平均年齡(10 ±1.4)月，體重為(4.2 ±0.7)kg，三組動物性別、年齡、體重比較差異無統(tǒng)計學意義(P ＞0.05)。

2.2 血清PLA2活性的比較

麻醉藥物干預前(T0)，實驗兔血清PLA2平均活性值分別為 C組(476±99.2)intensity/(min·μl)、P 組(408 ± 95.4)intensity/(min·μl)、E 組(435±92.5)intensity/(min·μl)，三組 PLA2活性差異無統(tǒng)計學意義(P=0.425)，基線水平一致。當給予實驗干預后，三組動物血清PLA2活性在T1時均表現(xiàn)出不同程度的輕微升高，但與T0時刻相比，該活性變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，且組間相比也無統(tǒng)計學差異(P=0.320)。隨著給藥的持續(xù)，PLA2活性在三組動物中呈現(xiàn)出不同的變化趨勢(圖1):在C組中，T2、T3的血清PLA2活性未發(fā)生顯著性變化，停藥后兩個時間點測得的活性值也與基線值相似(P＞0.05);在P組中，隨著藥物的持續(xù)泵入，PLA2的活性呈下降趨勢，且T3時的活性明顯低于基線值(299 ±67.0 vs 408 ±95.4，P=0.025);與之相反的是，E組中PLA2活性在給藥后表現(xiàn)為持續(xù)的升高，并在 T2、T3時分別達到(596 ±63.7)intensity/(min·μl)及(699 ±77.5)intensity/(min·μl)，與T0相比具有統(tǒng)計學差異(P值分別為 0.047、0.022)。此外，停藥60 min(T4)及120 min(T5)后，這兩組實驗動物血清PLA2的活性迅速向基線值靠近，與T0值相比均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。

圖1 三組兔血清PLA2活性變化趨勢比較Figure 1 Changes of activation of serum PLA2 in rabbits at different time after different treatments

2.3 血清其他炎癥因子濃度變化的比較

三組實驗兔血清中炎癥因子 IL-6、TNF-α及CRP的濃度變化見表1。不同組別中，這三種炎癥因子的濃度在T0時均表現(xiàn)出很高的一致性。當給予異丙酚后，血清中IL-6及TNF-α的濃度未出現(xiàn)明顯變化，而CRP的濃度呈下降趨勢。在依托咪酯組，三種炎癥因子的濃度在給藥后(T2、T3)均出現(xiàn)明顯升高(P＜0.05)，且在停藥后又恢復至基線濃度。

表1 三組兔血清炎癥因子濃度對比分析 (pg/ml)Table 1 Com parison of expression of inflammatory cytokines at different time between three groups (pg/ml)

2.4 血清PLA2與其他炎癥因子的相關性分析

對所有實驗動物四種炎癥因子進行相關性分析顯示，PLA2的活性變化與CRP的濃度呈明顯正相關(r=0.686，P=0.014)，而與 IL-6 及 TNF-α 的表達無關;同時，血清IL-6濃度與TNF-α濃度的變化具有較強的相關性(r=0.876，P ＜0.001)。

表2 血清炎癥因子表達變化的相關性分析Table 2 Correlation analysis of expression of seruminflammatory cytokines

3 討論

異丙酚是臨床上最常使用的靜脈全麻藥物之一，近年來大量的研究報道了其對患者免疫炎癥功能的影響。證據(jù)顯示，在機體發(fā)生炎癥反應或器官損傷時，異丙酚能抑制中性粒細胞、單核細胞和巨噬細胞的功能，抑制 COX2和 PGE2合成，從而減少IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α 等炎癥因子的釋放，具有一定的炎癥抑制及器官功能保護作用［5-7］。如趙文暉等［8］對大鼠心肌缺血再灌注損傷的研究中發(fā)現(xiàn)，異丙酚能抑制 TNF-α的表達，保護心肌受損。此外，對于細菌感染、肺損傷及其他器官缺血再灌注損傷等引起的炎癥反應，異丙酚也具有一定的抑制保護作用［9-13］。但在正常情況下，異丙酚對機體炎癥相關因子的影響尚無相關報道。因此，在本研究中我們利用家兔作為研究模型，檢測異丙酚對正常動物血清中炎癥因子的影響，結果顯示，異丙酚未能引起正常動物血清中IL-6及TNF-α濃度的變化，但卻能降低血清中PLA2的活性及C-反應蛋白(C-reaction protein，CRP)的濃度，這表明異丙酚對各種炎癥因子的作用存在不同的調(diào)控機制，該機制有待進一步的研究。

PLA2是一種脂質(zhì)代謝酶，參與花生四烯酸、前列腺素、血小板活化因子及溶血磷脂酸的合成代謝。研究顯示，其主要由激活的單核細胞、巨噬細胞及中性粒細胞分泌釋放，在炎癥反應中活性明顯增高，是一種重要的炎癥標志物［14，15］。考慮到異丙酚能抑制中性粒細胞的活性，因此，異丙酚也能降低PLA2的活性。事實上，吳新軍等［16］的研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠小腸缺血再灌注引起肺損傷時，臨床劑量異丙酚可明顯降低肺組織內(nèi)PLA2活性增高，產(chǎn)生肺保護作用。在本研究中，我們同樣觀察到異丙酚能顯著降低正常動物血清中PLA2的活性，其機制可能與異丙酚能降低細胞內(nèi)鈣離子濃度［16］，抑制活性氧代謝產(chǎn)物［16］，從而抑制PLA2激活有關。此外，我們還發(fā)現(xiàn)PLA2的活性變化與CRP的濃度變化存在相關性，這與于路等在冠心病患者中的發(fā)現(xiàn)一致［17］，提示PLA2的活化與CRP的分泌可能存在相同的上游信號通路。

與異丙酚相比，依托咪酯抑制炎癥反應的能力較低，但該結論仍存在爭議。如Ke等［18］認為異丙酚和依托咪酯在誘導劑量范圍內(nèi)對重型創(chuàng)傷患者免疫功能的影響無明顯差異。在本實驗中，依托咪酯促進正常機體中炎癥因子的釋放，表明其可能具有炎癥細胞激活作用，該現(xiàn)象未見于其他研究報道，其原因可能與依托咪酯引起的暫時性腎上腺皮質(zhì)功能低下有關［19］，但具體機制有待進一步研究。

［1］謝才姣，楊昭云，徐軍美.丙泊酚和依托咪酯靜脈麻醉對婦科腹腔鏡手術炎癥因子的影響［J］.中國內(nèi)鏡雜志，2006，12(12):1271-1272.

［2］Yu HP.Role of anesthetic agents on cardiac and immune systems［J］.Shock，2011，36(6):532-541.

［3］劉蔚然，李錦成.麻醉對惡性腫瘤患者免疫功能和腫瘤轉移的影響［J］.中國腫瘤臨床，2012，39(15):1131-1133.

［4］Cai H，Chiorean EG，Chiorean MV，et al.Elevated phospholipase A(2)activities in plasma samples from multiple cancers［J］.PLoS One，8(2):e57081.

［5］Inada T，Kubo K，Ueshima H，et al.Intravenous anesthetic propofol suppresses prostaglandin E2 production in murine dendritic cells［J］.J Immunotoxicol，2011，8(4):359-366.

［6］Von DV，Baur S，Sander MP，et al.Propofol increased the interleukin-6 to interleukin-10 ratio more than isoflurane after surgery in long-term alcoholic patients［J］.J Int Med Res，2007，35(3):395-405.

［7］Takaono M，Yogosawa T，Okawa-Takatsuji M.Effects of intravenous anesthetics on interleukin IL-6 and IL-10 production by lipopo-lysaccharide-stimulated mononuclear cells from healthy volunteers［J］.Acta Anaesthesiol Scand，2002，46(2):176-179.

［8］趙文暉，陳軍，景桂霞，等.異丙酚對大鼠心肌缺血再灌注損傷中Toll-4、TNF-α和NF-κb表達的影響及其超微結構改變［J］.西安交通大學學報:醫(yī)學版，2014，35(3):357-360.

［9］Vojvodic D，Miljanovic O，Djurdjevic D，et al.Effect of different anesthetic agents on GM-CSF，MCP1，IL1 alpha and TNF alpha levels in rat sepsis model［J］.Acta Veterinaria，2013，63(2/3):p125.

［10］Cui WY，Tian AY，Bai T.Protective effects of propofol on endotoxemia-induced acute kidney injury in rats［J］.Clin Exp Pharmacol Physiol，2011，38(11):747-754.

［11］Li J，Yu W，Li XT.The effects of propofol on mitochondrial dysfunction following focal cerebral ischemia-reperfusion in rats［J］.Neuropharmacology，2014，77:358-368.

［12］Eroglu A.The effect of intravenous anesthetics on ischemia-reperfusion injury［J］.Biomed Res Int，2014:Epub ahead of print.

［13］蔣柳明，金建國，祝卿，等.異丙酚對油酸型急性肺損傷兔血清TNF-α、IL-1β水平的影響［J］.中國臨床藥理學與治療學，2011，16(9):1002-1005.

［14］Sevastou I，Kaffe E，Mouratis MA，et al.Lysoglycerophospholipids in chronic inflammatory disorders:The PLA(2)/LPC and ATX/LPA axes［J］.Biochim Biophys Acta，2013，1831(1):42-60.

［15］Magrioti V，Kokotos G.Phospholipase A(2)inhibitors for the treatment of inflammatory diseases:a patent review(2010-present)［J］.Expert Opin Ther Pat，2013，23(3):333-344.

［16］吳新軍，孫艷紅，王俊科，等.異丙酚對大鼠小腸缺血再灌注后肺損傷磷脂酶A2變化的影響［J］.中國醫(yī)科大學學報，2004，33(2):118-120.

［17］于路，姜文兵，傅國勝，等.冠心病患者分泌型磷脂酶A2的變化及其與高敏C反應蛋白的關系［J］.中國動脈硬化雜志，2006，14(10):884-886.

［18］Ke JJ，Zhan J，F(xiàn)eng XB，et al.A comparison of the effect of total intra-venous anaesthesia with propofol and remifentanil and inhalational anaesthesia with isoflurane on the release of pro-and antiinflammatory cytokines in patients undergoing open cholecystectomy［J］.Anaesth Intensive Care，2008，36(1):74-78.

［19］李優(yōu)春，王志萍.持續(xù)靜脈輸注不同時間的依托咪酯對腎上腺皮質(zhì)功能的影響［J］.臨床麻醉學雜志，2012，2:155-157.