向海玉

[摘要] 目的 探討熒光定量聚合酶鏈法在嬰幼兒尿液人巨細(xì)胞病毒檢測(cè)中的臨床價(jià)值。 方法 選擇患者40例，所有患者入院后進(jìn)行抗病毒及對(duì)癥支持治療，應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈法測(cè)定患者治療前后的人巨細(xì)胞病毒-DNA、人巨細(xì)胞病毒-IgM，并比較治療前后不同時(shí)間段尿液中的人巨細(xì)胞病毒-DNA水平。 結(jié)果 治療后，人巨細(xì)胞病毒-DNA、人巨細(xì)胞病毒-IgM陽(yáng)性率均低于治療前（P<0.05），熒光定量聚合酶鏈法測(cè)定其陽(yáng)性率均>90%。治療后晨尿、上午隨機(jī)尿液及下午隨機(jī)尿液中人巨細(xì)胞病毒-DNA水平低于治療前同時(shí)段（P<0.05）。 結(jié)論 熒光定量聚合酶鏈法在早期診斷嬰幼兒尿液人巨細(xì)胞病毒感染中具有重要價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 熒光定量聚合酶鏈法；嬰幼兒；人巨細(xì)胞病毒

[中圖分類(lèi)號(hào)] R446.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）12（a）-0097-03

人巨細(xì)胞病毒是一種雙鏈DNA皰疹病毒，在人群中分布極為廣泛，其主要引起先天性和圍生期的感染而出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，傳播途徑主要為母嬰垂直傳播[1]，另外嬰幼兒時(shí)期因免疫功能尚未成熟等抵抗力低下原因亦會(huì)出現(xiàn)感染[2]。一旦感染，其會(huì)導(dǎo)致全身各個(gè)器官臟器功能障礙，從而影響患兒的生長(zhǎng)發(fā)育，導(dǎo)致其智力障礙、肝腎功能受損等。據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)[3]，我國(guó)每年因人巨細(xì)胞病毒感染而導(dǎo)致的先天性發(fā)育畸形患兒超過(guò)4萬(wàn)，其給家庭及社會(huì)造成沉重負(fù)擔(dān)，故有效預(yù)測(cè)和診斷人巨細(xì)胞病毒感染對(duì)提高新生兒及嬰幼兒生活質(zhì)量，提高人口素質(zhì)十分重要[4]。目前人巨細(xì)胞病毒感染的臨床表現(xiàn)無(wú)特異性，潛伏期較長(zhǎng)等，給臨床診斷帶來(lái)一定困難。本研究主要探討熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)在嬰幼兒尿液人巨細(xì)胞病毒檢測(cè)中的臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年1月～2013年12月本院收治的嬰幼兒人巨細(xì)胞病毒感染者40例，其中男23例，女17例，年齡1～12歲，平均（5.1±0.3）歲。

1.2 方法及儀器

所有患者入院后采用抗病毒治療，聯(lián)合免疫球蛋白提高機(jī)體抵抗力，同時(shí)使用干擾素增加抗病毒治療效果，并針對(duì)患者發(fā)病部位，進(jìn)行對(duì)癥支持處理，如維持呼吸循環(huán)穩(wěn)定，保持水、電解質(zhì)、酸堿平衡等，人巨細(xì)胞病毒-DNA拷貝數(shù)用反對(duì)數(shù)形式表示。使用儀器：采用人巨細(xì)胞病毒熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)試劑盒（廣州達(dá)安基因診斷有限公司），人巨細(xì)胞病毒pp65抗原試劑盒（美國(guó)Chemicon公司）以及UF-100尿沉渣分析儀（日本SYSMEX公司）和AB7500熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)儀（美國(guó)AB公司）。

1.3 研究方法

所有患兒均于治療前后留取晨起中段尿清潔尿液15 ml，放置于無(wú)菌試管內(nèi)，立即送檢本院檢驗(yàn)科，采用熒光定量聚合酶鏈法測(cè)定治療前后患者巨細(xì)胞病毒-DNA及人巨細(xì)胞病毒-IgM結(jié)果，并分析通過(guò)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定的不同時(shí)間段尿液中人巨細(xì)胞病毒-DNA水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者治療前后人巨細(xì)胞病毒-DNA、人巨細(xì)胞病毒-IgM陽(yáng)性率的比較

治療后，人巨細(xì)胞病毒-DNA、人巨細(xì)胞病毒-IgM陽(yáng)性率均低于治療前（P<0.05）（表1）。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定其陽(yáng)性率均>90%。

2.2 治療前后不同時(shí)間段尿液中人巨細(xì)胞病毒-DNA水平的比較

治療后晨尿、上午隨機(jī)尿液及下午隨機(jī)尿液中人巨細(xì)胞病毒-DNA水平均低于治療前同時(shí)段（P<0.05）（表2）。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)定能有效區(qū)分不同時(shí)間段尿液內(nèi)人巨細(xì)胞病毒-DNA水平。

3 討論

人巨細(xì)胞病毒是普通人群常見(jiàn)感染源之一，尤其是孕婦和嬰幼兒居多，嬰幼兒感染后容易導(dǎo)致其出現(xiàn)多器官功能受到影響，從而造成嚴(yán)重的臨床危害[5]，所以目前急需一種靈敏度高、特異性強(qiáng)的臨床檢測(cè)方法，以更好地提高對(duì)人巨細(xì)胞病毒感染的診斷率，做到早診斷、早治療，同時(shí)作為預(yù)后判斷指標(biāo)[6]。鑒于人巨細(xì)胞病毒以侵犯嬰幼兒的管道上皮細(xì)胞，尤以腎臟及肝臟為主，故其尿液中存在有大量的人巨細(xì)胞病毒-DNA，所以其尿液中人巨細(xì)胞病毒-DNA測(cè)定對(duì)于早期診斷具有重要意義[7]，而以往針對(duì)尿液人巨細(xì)胞病毒的測(cè)定方法主要以定性為主，且主要通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法確定其人巨細(xì)胞病毒-IgM性質(zhì)，該方法雖然效果可靠，但是對(duì)于早期診斷價(jià)值有限。熒光定量聚合酶鏈法則是在以往聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)基礎(chǔ)上加入熒光染料，以檢測(cè)反應(yīng)過(guò)程中熒光信號(hào)的變化情況對(duì)底物進(jìn)行定量測(cè)定[8]，其能對(duì)密閉的反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，避免了產(chǎn)物的交叉污染，具有更快速、更準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)[9]。

本研究發(fā)現(xiàn)采用熒光定量聚合酶鏈法測(cè)定其陽(yáng)性率均>90%，而且治療后人巨細(xì)胞病毒-IgM的陽(yáng)性率顯著低于治療前，對(duì)于診斷具有一定指導(dǎo)意義，但機(jī)體IgM抗體產(chǎn)生的滯后性，其在人巨細(xì)胞病毒感染后需要2周左右體內(nèi)的IgM抗體才會(huì)被檢測(cè)到，所以血清IgM檢測(cè)受時(shí)間窗、機(jī)體免疫狀態(tài)等影響而不能達(dá)到有效的早診斷、早治療[10]。熒光定量聚合酶鏈法的操作簡(jiǎn)單、靈敏度高，在人巨細(xì)胞病毒的檢測(cè)中，越來(lái)越受廣大醫(yī)生和患者的青睞[11]。熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)技術(shù)則是以常規(guī)的聚合酶鏈反應(yīng)為基礎(chǔ)，可以對(duì)人巨細(xì)胞病毒-DNA進(jìn)行定量分析的一種檢測(cè)方法[12]，不但具有常規(guī)聚合酶鏈反應(yīng)的高靈敏性，同時(shí)還具有對(duì)DNA雜交測(cè)定的高特異性，并且結(jié)合光譜技術(shù)，從而能更好地進(jìn)行精確定量[13]。同時(shí)治療后晨尿、上午隨機(jī)尿液及下午隨機(jī)尿液中人巨細(xì)胞病毒-DNA水平均顯著低于治療前，提示熒光定量聚合酶鏈法測(cè)定能有效區(qū)分不同時(shí)間段尿液內(nèi)人巨細(xì)胞病毒-DNA水平[14]。臨床操作上，注意選擇留取標(biāo)本時(shí)機(jī)的重要性[15]，建議采取晨起中段尿，因人巨細(xì)胞病毒主要侵襲靶器官為腎小管的上皮細(xì)胞，而患兒一般夜間無(wú)排尿情況下，尿液中人巨細(xì)胞病毒-DNA更多，以便于檢測(cè)。人巨細(xì)胞病毒-DNA的拷貝數(shù)能有效反映病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量及其復(fù)制情況，熒光定量聚合酶鏈法可早期檢測(cè)并進(jìn)行定量分析，尤其是針對(duì)無(wú)明顯臨床表現(xiàn)以及臨床癥狀較輕和治療后病情好轉(zhuǎn)者，對(duì)于預(yù)測(cè)患者的預(yù)后具有一定價(jià)值。endprint

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（收稿日期：2014-10-30 本文編輯：許俊琴）endprint

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