吳偉宏　王豐平　費(fèi)勝琪　陳貴平

直腸癌組織MRP的表達(dá)及臨床意義

吳偉宏王豐平費(fèi)勝琪陳貴平

目的 探討直腸癌組織中多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP）的表達(dá)情況與臨床病理資料、生存情況的相關(guān)性。方法 應(yīng)用免疫組化方法檢測直腸癌組織中MRP的表達(dá)情況，并分析MRP表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后之間的關(guān)系。結(jié)果 在194例直腸癌術(shù)后組織標(biāo)本中，有86例（44.3%）存在MRP的高表達(dá)，與腫瘤組織分化程度（P=0.029）顯著相關(guān)，而未發(fā)現(xiàn)其與直腸癌患者年齡、性別、生長方式、TNM分期等因素的相關(guān)性。生存分析發(fā)現(xiàn)MRP高表達(dá)的患者遠(yuǎn)期生存時間明顯長于低表達(dá)組（P=0.014）。結(jié)論 直腸癌組織中MRP的表達(dá)情況與腫瘤分化程度存在關(guān)聯(lián)，并影響患者的預(yù)后。

直腸癌 多藥耐藥相關(guān)蛋白 免疫組化

多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP）是多種惡性腫瘤產(chǎn)生化療耐藥的物質(zhì)基礎(chǔ)，近年來對其生理功能、轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控等機(jī)制進(jìn)行了較多研究和探討，但是在具體臨床應(yīng)用中的研究不多。為此，本觀察應(yīng)用免疫組化方法檢測直腸癌組織中MRP的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床探討其與病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。報道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 收集長興縣人民醫(yī)院2007年11月至2012年9月194例直腸癌患者的術(shù)后組織標(biāo)本，病理均證實(shí)為直腸腺癌，患者之前均未被診斷為其他惡性腫瘤，未行放化療等抗腫瘤治療。本組中男118例，女76例；年齡17～82歲，平均（56.8±11.5）歲。浸潤深度：T1 2例、T2 46例、T3 141例、T4 4例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：N0 87例、N1 53例、N2 108例。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移：陰性183例、陽性11例。病理分期：Ⅰ期28例、Ⅱ期46例、Ⅲ期109例、Ⅳ期11例。

1.2試劑與方法 MRP一抗試劑盒購自福州邁新生物工程技術(shù)公司。免疫組化：所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，制成4μm連續(xù)切片；用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作陰性對照，已知表達(dá)陽性的腫瘤組織作陽性對照。結(jié)果判斷在光學(xué)顯微鏡下觀察，以細(xì)胞結(jié)構(gòu)中存在粗細(xì)一致的棕黃色顆粒為陽性，無著色或陽性細(xì)胞比例＜10%為（-），陽性細(xì)胞在10%～25%為（+），25%～75%為（++），＞75%為（+++）。參考既往文獻(xiàn)，將其分成兩組：（-）和（+）合并成低表達(dá)組；（++）和（+++）合并成高表達(dá)組。

1.3隨訪 隨訪方式為門診+電話隨訪，記錄完整的隨訪資料。定義終點(diǎn)事件為死亡，自確診日期開始計算總生存期（OS），末次隨訪時間為2013年12月10日，失訪者以最近一次有效隨訪日期作為截尾值處理。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件。采用Pearson卡方檢驗(yàn)進(jìn)行MRP表達(dá)與各項(xiàng)臨床病理資料之間的分析。采用乘積極限法進(jìn)行單因素生存分析，繪制生存曲線，用對數(shù)秩檢驗(yàn)進(jìn)行生存曲線比較。采用COX回歸進(jìn)行多因素生存分析，顯著性檢驗(yàn)采用Wald檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1直腸癌組織MRP表達(dá)狀態(tài) 在194例直腸癌術(shù)后標(biāo)本中，表達(dá)（-）者40例，表達(dá)（+）者68例，表達(dá)（++）者50例，表達(dá)（+++）者36例，MRP高表達(dá)組占44.3%（86/194）。

2.2MRP表達(dá)與直腸癌患者臨床病理特征 MRP表達(dá)與腫瘤組織分化程度（P=0.029）相關(guān)，與患者性別，年齡，腫瘤局部浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分期等情況均不存在統(tǒng)計學(xué)上的相關(guān)性（P＞0.05）。

2.3MRP表達(dá)與直腸癌患者預(yù)后 108例MRP低表達(dá)的患者中有33例在隨訪期內(nèi)死亡，5年生存率為63.3%，而86例陰性表達(dá)的患者只有13例死亡，5年生存率為80.3%，兩者之間差異顯著（χ2=6.309，P=0.012）。Kaplan-Meier單因素生存分析發(fā)現(xiàn)：患者的總生存期（OS）在T分期（χ2=9.768，P=0.020）、N分期（χ2=14.129，P=0.001）、M分期（χ2=34.872，P=0.000）、病理分期（χ2=41.325，P=0.000）、MRP表達(dá)（χ2=6.046，P=0.014）中差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，提示病理分期晚、MRP低表達(dá)等因素致患者總生存期縮短，而在性別、年齡、腫瘤大小，生長方式、分化程度等因素上無差異?；颊呖偵嫫冢∣S）的Cox多因素回歸分析結(jié)果為T分期（P=0.033）、N分期（P=0.018）、M分期（P=0.000）、MRP表達(dá)（P=0.023）進(jìn)入方程，其中MRP表達(dá)的相對危險度（relative risk，RR）為0.460（95%CI：0.236～0.899），即MRP高表達(dá)組在隨訪期間死亡的風(fēng)險是低表達(dá)組的0.460倍。

3　討論

MRP是一種由1531個氨基酸組成的膜磷蛋白，結(jié)構(gòu)序列分析提示其屬于轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的ABC超家族的成員，自1992年被Cole等［1］在非P-gp介導(dǎo)的MDR小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株上發(fā)現(xiàn)報道后，大部分研究都是在其產(chǎn)生腫瘤耐藥的機(jī)制方面進(jìn)行。近年來的臨床研究均認(rèn)為MRP高表達(dá)會降低化療療效［2，3］，但患者的生存是否獲益，則根據(jù)腫瘤類型及研究方法的不同，存在意見不一的情況［4，5］。

本資料用免疫組化方法對194例直腸癌術(shù)后組織中MRP的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)直腸癌組織中MRP的高表達(dá)率為44.3%（86/194）。將MRP表達(dá)與患者臨床資料進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)與腫瘤組織分化程度相關(guān)，該現(xiàn)象在其它腫瘤中亦有類似報道。Koshiyama等［6］在卵巢癌的研究中發(fā)現(xiàn)93% 的G1中存在MRP高表達(dá)，高于G2/G3的44%（P＜0.05），提示MRP在直腸癌的組織分化過程中發(fā)揮一定作用，其表達(dá)水平高可使組織分化較好。

在預(yù)后方面，患者的OS在MRP低表達(dá)組明顯長于高表達(dá)組（P=0.014），這提示直腸癌術(shù)后患者的預(yù)后和MRP表達(dá)相關(guān)。這與很多研究認(rèn)為MRP高表達(dá)會降低患者生存率的結(jié)論相反，從既往已知的機(jī)制解釋，MRP主要是通過減少細(xì)胞內(nèi)化療藥物聚集濃度而發(fā)生耐藥［7，8］，進(jìn)而導(dǎo)致存在腫瘤負(fù)荷的患者無法獲得有效的化療，腫瘤不能得到有效控制，生存時間也就相應(yīng)變短。但不同于這些研究，本資料的入選人群均為術(shù)后患者，腫瘤負(fù)荷已基本消除，不存在原發(fā)腫瘤對化療耐藥的情況，而在此種狀態(tài)下MRP的高表達(dá)能使患者的生存獲益，這提示MRP的作用機(jī)制可能存在另外一種未知的途徑，值得進(jìn)一步研究。

1 Cole SP，Bhardwaj G，Gerlach JH，et al. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line. Science， 1992，258：1650～1654.

2 Morrow CS， Peklak-Scott C， Bishwokarma B， et al. Multidrug resistance protein 1 （MRP1， ABCC1） mediates resistance to mitoxantrone via glutathione-dependent drug efflux. Mol Pharmacol， 2006， 69（4）：1499～1505.

3 魏學(xué)明，顧國利，任力，等.多藥耐藥基因產(chǎn)物在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義. 世界華人消化雜志，2009，17（24）：463～2468.

4 Xu Y， Wang L， Zheng X， et al. Positive expression of p53， c-erbB2 and MRP proteins is correlated with survival rates of NSCLC patients. Mol Clin Oncol， 2013，1（3）：487-492.

5 Yu Z， Peng S， Hong-Ming P， et al. Expression of multi-drug resistancerelated genes MDR3 and MRP as prognostic factors in clinical liver cancer patients. Hepatogastroenterology， 2012，59（117）：1556～1559.

6 Koshiyama M， Fujii H， Kinezaki M， et al. Immunohistochemical expression of topoisomerase IIalpha （Topo IIalpha） and multidrug resistance-associated protein （MRP）， plus chemosensitivity testing，as chemotherapeutic indices of ovarian and endometrial carcinomas. Anticancer Res， 2001，21：2925～2932.

7 Zaman GJR， Flens MJ， van Leusden MR， et al. The human multidrug resistance-associated protein MRP is a plasma membrane drug-efflux pump. Proc Natl Acad Sci USA 1994， 91（19）： 8822～8826.

8 Breuninger LM， Paul S， Gaughan K， et al. Expression of multidrug resistance-associated protein in NIH/3T3 cells confers multidrug resistance associated with increased drug efflux and altered intracellular drug distribution. Cancer Res. 1995， 55 （11）： 5342～5347.

313100 浙江省長興縣人民醫(yī)院外科（吳偉宏 王豐平費(fèi)勝琪）

310022浙江省腫瘤醫(yī)院大腸科（陳貴平）