尚　坤　伍穎慧　農(nóng)云鳳　申　靜　張　野　于馨博　包楠楠　楊寄渝　吳　萌　李　亞　張　欣

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林　長(zhǎng)春　130117)

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背部推拿療法對(duì)機(jī)體不同組織免疫網(wǎng)絡(luò)介質(zhì)β-內(nèi)啡肽含量的影響

尚坤伍穎慧農(nóng)云鳳申靜張野于馨博包楠楠楊寄渝吳萌李亞張欣

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130117)

摘要〔〕目的觀察在免疫抑制家兔背部開展推拿療法對(duì)機(jī)體不同組織免疫網(wǎng)絡(luò)介質(zhì)β-內(nèi)啡肽(EP)含量的影響。方法將21只家兔隨機(jī)平均分為空白組、模型組和推拿組，采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法造模，觀察各組動(dòng)物下丘腦、血漿、淋巴組織β-EP含量的變化。結(jié)果模型組、推拿組下丘腦組織β-EP的含量增加，與空白組比較差異顯著(P<0.05，P<0.01)；與模型組比較，推拿組下丘腦組織β-EP的含量增加(P<0.05)。模型組、推拿組血漿β-EP的含量降低，與空白組比較差異顯著(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，血漿β-EP的含量降低(P<0.05)。模型組、推拿組淋巴組織β-EP的含量降低，與空白組比較差異顯著(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，淋巴組織β-EP的含量增加(P<0.01)。結(jié)論背部推拿療法提高機(jī)體免疫功能的可能機(jī)制之一是能夠有效促進(jìn)機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)介導(dǎo)物質(zhì)β-EP的合成、分泌與分布，從而發(fā)揮其預(yù)防疾病、保健身體的作用。

關(guān)鍵詞〔〕推拿；免疫介質(zhì)；β-EP

第一作者：尚坤(1978-)，女，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)藥治療心腦血管疾病的臨床與機(jī)制研究。

本課題組前期的實(shí)驗(yàn)研究表明，背部推拿療法對(duì)免疫抑制家兔的局部免疫功能具有良好的調(diào)節(jié)作用，能夠有效提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和局部MHC-Ⅱ、白介素(IL)-12含量〔1〕。然而，背部推拿療法改善機(jī)體免疫功能的作用途徑與調(diào)控機(jī)制尚不明確。本課題組從神經(jīng)肽β-內(nèi)啡肽(β-EP)在免疫應(yīng)答中的功能入手，立足于“β-EP是機(jī)體神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)介質(zhì)”的理論，提出了“推拿療法能夠增強(qiáng)機(jī)體合成β-EP并促進(jìn)其分布至外周免疫組織從而發(fā)揮免疫功能”的假說(shuō)，并以免疫力低下的亞急性衰老家兔模型為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，以推拿手法刺激背部足太陽(yáng)膀胱經(jīng)等為主要干預(yù)手段，觀察家兔下丘腦組織、血漿以及外周淋巴組織β-EP含量的變化情況，對(duì)此假說(shuō)進(jìn)行初步的論證。

1材料與方法

1.1動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)藥品與儀器由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供純種新西蘭大耳家兔21只，兔齡4個(gè)月，體重(1 948±230)g。按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白組、模型組、推拿組，每組7只。環(huán)磷酰胺注射液(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)、推拿手法測(cè)定儀(TAP-Ⅱ型，上海益聯(lián)醫(yī)學(xué)發(fā)展有限公司)、超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備廠)、電熱恒溫水浴箱(北京市醫(yī)療設(shè)備廠)以及低溫離心機(jī)(北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司)。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處理模型組、推拿組的動(dòng)物采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法造模。以29.6 mg·kg-1·d-1的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算每日的注射量，連續(xù)腹腔注射4次，隔日1次。空白組動(dòng)物腹腔注射等量生理鹽水，連續(xù)開展腹腔注射4次，隔日1次。推拿組動(dòng)物造模結(jié)束后第二天開始每天進(jìn)行推拿手法刺激，推拿時(shí)家兔不做固定處理?？瞻捉M動(dòng)物每天抓取1次，不做其他處理。

1.2.2推拿方法(1)操作部位：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)足太陽(yáng)膀胱經(jīng)的循行路線，從肺俞穴至腎俞穴之間段(穴位選取按《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》〔2〕定位)。(2)操作方法：①按揉法：以拇指指腹為著力點(diǎn)，在家兔相應(yīng)操作部位上由頭頸部至尾部施以按揉法，手法力量經(jīng)推拿手法測(cè)試儀測(cè)定約為0.5 kg，操作時(shí)間5 min；②推法：以拇指指腹為著力點(diǎn)，在家兔相應(yīng)操作部位由頭頸部至尾部施以推法，手法力量經(jīng)推拿手法測(cè)試儀測(cè)定約為0.5 kg，操作時(shí)間5 min；③捏脊法：以雙手拇指、食指指端夾持家兔背部相應(yīng)操作部位的皮毛及皮下組織，由尾部至頭頸部施以捏脊法，反復(fù)操作10遍。上述推拿方法每天操作1次，每次15 min，連續(xù)操作21 d。

1.2.3樣本處理及檢測(cè)指標(biāo)最后一次推拿結(jié)束后第二天，于超凈工作臺(tái)處置實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。將各組動(dòng)物固定后，抽取靜脈血，注入加有抗凝劑、抑肽酶的試管中，離心低溫保存?zhèn)溆?；然后將?shí)驗(yàn)動(dòng)物斷頭，迅速開顱，無(wú)菌摘取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物顱內(nèi)下丘腦組織；同時(shí)摘取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外周淋巴組織，迅速用錫紙包裹投入液氮罐保存?zhèn)溆谩z測(cè)各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下丘腦、血漿及外周淋巴組織β-EP含量。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行單因素方差分析(OneWay-ANOVA)、Q檢驗(yàn)(Newan-keuls法)。

2結(jié)果

模型組〔(25.96±2.38)pg/mg〕、推拿組〔(29.54±6.13)pg/ml〕與空白組〔(22.32±4.15)pg/mg〕比較，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下丘腦組織β-EP的含量增加(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下丘腦組織β-EP的含量增加(P<0.05)。模型組〔(92.46±26.47)pg/ml〕、推拿組〔(66.88±16.37)pg/ml〕與空白組〔(154.54±41.28)pg/ml〕比較，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血漿β-EP的含量降低(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血漿β-EP的含量降低(P<0.05)。模型組〔(6.36±3.65)pg/ml〕、推拿組〔(17.61±7.7)pg/ml〕與空白組〔(23.80±8.11)pg/ml〕比較，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物淋巴組織β-EP的含量降低(P<0.05，P<0.01)；推拿組與模型組比較，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物淋巴組織β-EP的含量增加(P<0.01)。

3討論

大量的臨床與實(shí)驗(yàn)研究均表明，推拿療法能夠有效調(diào)整機(jī)體的免疫功能〔3～5〕。足太陽(yáng)膀胱經(jīng)在人體十二經(jīng)脈中分布最長(zhǎng)最廣，是人體的藩籬。中醫(yī)理論認(rèn)為，太陽(yáng)為諸陽(yáng)之首，在三陽(yáng)經(jīng)中陽(yáng)氣最盛；同時(shí)，足太陽(yáng)膀胱經(jīng)背部循行路線上分布著肺俞、心俞、肝俞、脾俞、腎俞等背俞穴，是五臟六腑之氣輸注于體表的位置，具有良好的調(diào)節(jié)五臟功能、改善正氣盛衰的作用。

β-EP是機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)共同的介導(dǎo)物質(zhì)之一，是已被公認(rèn)為具有較強(qiáng)免疫調(diào)節(jié)作用的活性肽之一，參與機(jī)體的細(xì)胞免疫，在免疫學(xué)學(xué)研究中是一個(gè)有價(jià)值的指標(biāo)〔6〕。β-EP主要在機(jī)體的下丘腦弓狀核和腦垂體中葉合成分泌，并通過(guò)血液循環(huán)系統(tǒng)運(yùn)輸〔7〕。本研究采用腹腔注射環(huán)磷酰胺的方法制造免疫功能低下的動(dòng)物模型，對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物而言屬于一種劣性應(yīng)激，在使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫功能低下的同時(shí)，也會(huì)激活其交感神經(jīng)系統(tǒng)和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸，導(dǎo)致其下丘腦組織中β-EP含量有所增加，這正解釋了模型組動(dòng)物下丘腦組織β-EP含量反而高于空白組的原因。背部推拿療法能夠有效刺激實(shí)驗(yàn)動(dòng)物下丘腦組織合成β-EP，使其含量增加，并分泌進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。但本研究模型組、推拿組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血漿β-EP含量反而降低，而空白組和推拿組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物淋巴組織中β-EP含量增加，這說(shuō)明背部推拿療法不但能夠促進(jìn)機(jī)體β-EP的合成，還能夠有效調(diào)節(jié)機(jī)體β-EP的分布，促進(jìn)血漿中β-EP進(jìn)入機(jī)體淋巴組織盡快發(fā)揮免疫作用，這與部分報(bào)道的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相吻合〔8〕。

本研究結(jié)果表明，背部推拿療法提高機(jī)體免疫功能的可能機(jī)制之一是能夠有效促進(jìn)機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)介導(dǎo)物質(zhì)β-EP的合成、分泌與分布，從而發(fā)揮其預(yù)防疾病、保健身體的作用。

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〔2014-11-19修回〕

(編輯李相軍)

The influence of Tuina therapy on the content of β-EP in different body tissues

SHANG Kun, WU Ying-Hui, NONG Yun-Feng,etal.

Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117, Jilin, China

【Abstract】ObjectiveTo observe the influence of Tuina therapy on the back to the content ofβ-EP in different body tissues of immune suppression rabbits.Methods21 rabbits were randomly divided into blank, model and tuina groups. The peritoneal injection of cyclophosphamide was used to prepare the immunosuppressive rabbit．The contents of β-EP in the hypothalamus, plasma and lymphoid tissue were observed．ResultsThe contents ofβ-EP in the hypothalamus of model and tuina groups were higher than those of control group(P<0.05，P<0.01). The content ofβ-EP in the hypothalamus of tuina group was higher than that of model group(P<0.05); The contents of β-EP in plasma of model and tuina groups were lower than those of control group(P<0.05，P<0.01),the content of β-EP in plasma of tuina group was lower than that of model group(P<0.05); The contents of β-EP in lymphoid tissue of model and tuina groups were lower than those of control group(P<0.05，P<0.01),the content of β-EP in lymphoid tissue of tuina group was higher than that of model group(P<0.05).ConclusionsTuina therapy could promote the synthesis, secretion and distribution of β-EP to play the role of physical health and disease prevention.

【Key words】Tuina; Immune medium; β-EP

通訊作者：張欣(1976-)，男，副教授，博士，在站博士后，碩士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)手法治未病的臨床與機(jī)制研究。

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.81273867);吉林省科技廳基金項(xiàng)目(No.20130101137JC);長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)SRT計(jì)劃項(xiàng)目(No.2013-14)

中圖分類號(hào)〔〕R2〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2015)23-6683-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.23.017