焦國寶 石方方 丁長河 屈建行 屈凌波 劉仲敏
(1.河南工業(yè)大學(xué),河南 鄭州450001;2.河南仰韶生化工程有限公司,河南 三門峽472400)
淀粉水解酶是指一類能催化水解淀粉的酶的總稱,具有底物專一性,能將底物水解為各種還原性、非還原性單糖和少量的多糖等。淀粉廣泛分布于自然界中,是重要的能源來源[1]。淀粉酶是生物體中最為重要的酶類之一,也是工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用最早且最為普遍的酶制劑之一。
淀粉酶的來源多種多樣,目前在工業(yè)中大部分使用微生物發(fā)酵來獲得淀粉酶。如工業(yè)中使用枯草桿菌和芽孢桿菌、霉菌等生產(chǎn)α-淀粉酶,巨大芽孢桿菌生產(chǎn)β-淀粉酶等[2]。
α-淀粉酶通常pH值為5.5~8.0,按其酶解時最適作用pH范圍不同,可分為耐酸型和耐堿型;淀粉酶主要有α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、異淀粉酶4種。α-淀粉酶的種類非常多,按其水解產(chǎn)物的不同,可分為糖化型和液化型;按其作用溫度的不同,可分為中溫型和高溫型;按其來源不同,可分為細(xì)菌α-淀粉酶,真菌α-淀粉酶,植物α-淀粉酶,和動物α-淀粉酶。
α-淀粉酶(α-1,4-D-葡萄糖-葡萄糖苷水解酶)是一種非常重要的淀粉水解酶[4]。它以隨機作用方式切斷淀粉、糖原、寡聚或多聚糖分子內(nèi)的α-1,4葡萄糖苷鍵,生成麥芽糖、低聚糖和葡萄糖等,廣泛應(yīng)用于食品加工、釀造、醫(yī)藥、造紙、工業(yè)副產(chǎn)品、青貯飼料及微生態(tài)制劑等多個領(lǐng)域,也是國內(nèi)外應(yīng)用最廣、產(chǎn)量最大的酶種之一。α-淀粉酶應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中對縮短生產(chǎn)周期、提高產(chǎn)品得率和原料的利用率、提高產(chǎn)品質(zhì)量和節(jié)約糧食資源,都有著極其重要的作用。
在面包制作過程中,要想制成體積明顯增大,組織結(jié)構(gòu)良好的面包,就要確保淀粉糊化過程不能過度,但是在焙烤過程中溫度明顯高于60℃,普通的α-淀粉酶將迅速失活,因此,需要一種耐高溫α-淀粉酶解決這個問題。在面包發(fā)酵過程中需要一定量的還原糖,加入耐酸的α-淀粉酶就能連續(xù)地生成糊精和麥芽糖,相關(guān)研究表明,耐酸α-淀粉酶還可以代替溴酸鉀(有致癌作用的面包改良劑)。因此,從食品安全角度講,焙烤工業(yè)中使用α-淀粉酶會產(chǎn)生較大的經(jīng)濟效益和社會效益[5]。
在飼料加工業(yè)中,復(fù)合飼料中含有多種營養(yǎng)成分,這些營養(yǎng)物質(zhì)由生物聚合物組成,只有通過酶解,才可以被動物的腸道吸收。動物幼崽處于快速成長的階段,但自身的酶系不完整,酶活性不夠,通過耐酸性α-淀粉酶的使用,能夠降解生物聚合物,加強消化,提高飼料利用率,促進動物幼崽的成長和發(fā)育[7]。
β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)是糖化酶的一種。該酶作用專一性底物時,可以使麥芽糖由α-型變?yōu)棣?型,發(fā)生沃爾登轉(zhuǎn)位反應(yīng)(Walden inversion),因此得名β-淀粉酶[8-10]。當(dāng)它作用于淀粉時,會產(chǎn)生麥芽糖和β-界限糊精。其廣泛存在于各種植物(甘薯、小麥、玉米、大豆)和微生物中。在制藥方面,由于其可以制造麥芽糖,所以通常和α-淀粉酶一起用作消化劑[14]。
麥芽糖的生產(chǎn)只能依靠酶法制備。工業(yè)上經(jīng)常利用耐高溫α-淀粉酶的液化、β-淀粉酶糖化,再利用其他的酶進一步糖化,產(chǎn)生出90%以上的麥芽糖漿[15]。生產(chǎn)醫(yī)用級和食品級麥芽糖需要將淀粉漿濃度調(diào)至10%~20%[16,17]。麥芽糖的吸收不依賴于胰島素,所以糖尿病病人也可以攝取定量的麥芽糖。2005年,徐忠等人用β-淀粉酶和普魯蘭酶作用成功制備了淀粉糖漿[17]。
在釀造工業(yè)中,β-淀粉酶是一種重要的糖化酶。在啤酒生產(chǎn)中,其對啤酒的品質(zhì)及品種起著關(guān)鍵性作用。將β-淀粉酶用于麥芽的糖化過程中,能夠改善麥芽質(zhì)量,提高得率。β-淀粉酶用于啤酒生產(chǎn)時,可以提高糖化率,節(jié)約麥芽的用量,并且可以使生產(chǎn)成本降低大約25萬元[18],生產(chǎn)出來的啤酒品質(zhì)良好,口味純正。另外,β-淀粉酶在制藥業(yè)中也有廣泛地應(yīng)用[16]。
葡萄糖淀粉酶的系統(tǒng)名稱為a-1,4葡聚糖葡萄糖苷水解酶,簡稱糖化酶,是一種單鏈的酸性糖苷水解酶,具有外切酶活性。它由淀粉或類似物分子的非還原末端順序切開a-1,4糖苷鍵,生成β-葡萄糖。另外,它還可以水解a-1,6糖苷鍵和a-1,3糖苷鍵。糖化酶還用于生產(chǎn)果葡糖漿,后者被廣泛應(yīng)用于食品工業(yè),另外,其還是一種很好的面包面團改良劑。糖化酶在工業(yè)生產(chǎn)中具有非常廣泛的應(yīng)用。在酒類行業(yè)中,糖化酶制劑能夠代替自制的麩曲,簡化生產(chǎn)工藝,提高生產(chǎn)效率。在干啤酒釀造過程中,能提高麥汁中可發(fā)酵性糖的含量。在白酒和曲酒生產(chǎn)中以糖化酶代替酒曲,可以提高出酒率,減少食物的消耗,同時提升了酒的品質(zhì)。
異淀粉酶是一種脫支酶,可以專一性地切開α-1,6糖苷鍵形成直鏈淀粉。當(dāng)單獨使用異淀粉酶使支鏈淀粉變?yōu)橹辨湹矸?,具有凝結(jié)成塊的特點。利用它的這個特性,可以用作食品薄膜,這種薄膜對氧和油脂劇透具有良好的隔絕性,很適合作為食品的保護層。異淀粉酶與糖化酶協(xié)同作用時可以提高糖化速度,如:異淀粉酶與β-淀粉酶復(fù)合使用可以大大提高麥芽糖得率[19]。在酒精發(fā)酵中采用異淀粉酶,不僅可以使發(fā)酵率提高1%~3%,同時還可以提高淀粉的利用率。
α-淀粉酶和β-淀粉酶可以分解淀粉分子中α-1,4糖苷鍵,但不能水解α-1,6糖苷鍵,導(dǎo)致淀粉不完全分解。葡萄糖淀粉酶(糖化酶)不僅能夠?qū)ⅵ?1,4糖苷鍵水解,而且可以作用在α-1,6鍵,但是水解α-1,4鍵的速度比α-1,6鍵要快得多。在工業(yè)生產(chǎn)中,如何提高淀粉轉(zhuǎn)化成還原性糖的轉(zhuǎn)化率一直是科研人員所關(guān)注的問題。如果能在糖化時降低底物濃度,可以提高糖轉(zhuǎn)化率,但是過低的底物濃度提高了濃縮成本,使得生產(chǎn)率降低。所以在生產(chǎn)中,有很多關(guān)于采用幾種復(fù)合酶來提高淀粉轉(zhuǎn)化率的相關(guān)研究,多種研究表明,采用異淀粉酶與葡萄糖淀粉酶復(fù)合糖化,能夠提高底物濃度,從而提高了淀粉的轉(zhuǎn)化率。
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