陳金 吳麗娥

·實(shí)驗(yàn)研究·

抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體對(duì)腦缺血再灌注大鼠的抗氧化作用

陳金 吳麗娥

目的 探討腫瘤壞死因子-α(TNF-α)單克隆抗體對(duì)腦缺血再灌注大鼠的抗氧化作用。方法 76只健康雌性SD大鼠, 隨機(jī)分為假手術(shù)組(4只)、抗體組(36只)和生理鹽水組(36只), 采用Zea Longa線栓法建立局灶性腦缺血再灌注模型, 測(cè)定大鼠血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。結(jié)果 TNF-α單克隆抗體在再灌注3、6 h后可降低血清中MDA含量, 提高SOD活性。結(jié)論 抗TNF-α單克隆抗體在一定時(shí)間內(nèi)能提高腦缺血再灌注大鼠的抗氧化作用。

抗腫瘤壞死因子-α單克隆抗體；腦缺血再灌注損傷；丙二醛；超氧化物歧化酶

腦缺血再灌注損傷是指腦組織缺血一段時(shí)間, 當(dāng)重新恢復(fù)血流后, 組織的損傷程度較缺血時(shí)進(jìn)一步加重、功能進(jìn)一步惡化的現(xiàn)象。TNF-α是較早釋放的, 具有多種生物效應(yīng)的重要的炎性細(xì)胞因子, 在腦缺血再灌注損傷中具有重要作用并被廣為關(guān)注［1］。本研究觀察大鼠腦缺血再灌注損傷后抗氧化功能的變化, 為治療腦缺血再灌注損傷方法探索新思路?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雌性SD大鼠76只, 體重220～250 g；MDA和SOD試劑盒；抗大鼠TNF-α單克隆抗體。將大鼠隨機(jī)分三組,假手術(shù)組(4只)、抗體組(36只)和生理鹽水組(36只)。

1.2 方法 抗體組和生理鹽水組于再灌注0、3、6、12 h 4個(gè)時(shí)間點(diǎn), 每時(shí)間點(diǎn)9只, 采用Zea Longa［2］線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型, 10%水合氯醛0.3 ml/100 g腹腔麻醉, 分離頸內(nèi)、外動(dòng)脈, 在頸內(nèi)動(dòng)脈離分叉處4 mm剪一切口, 栓線插入18 mm左右, 可感阻力, 把露在體外的栓線和外科縫合線剪掉, 縫和, 放入籠內(nèi)。腦栓塞持續(xù)3 h, 緩慢把栓線拔出到頸內(nèi)、外動(dòng)脈分叉處, 實(shí)現(xiàn)大鼠腦缺血再灌注。凡動(dòng)物蘇醒后出現(xiàn)霍納綜合征(Horner征)、提尾懸空時(shí)栓塞對(duì)側(cè)前肢屈曲內(nèi)收或行走時(shí)向栓塞對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈的大鼠為栓塞成功, 否則被剔除。假手術(shù)組：栓線插入頸內(nèi)動(dòng)脈段, 仍保持大腦中動(dòng)脈血液的暢通?？贵w組在4個(gè)時(shí)間點(diǎn),按0.1 mg/kg給予頸總靜脈注射TNF-α抗體, 生理鹽水組給予等量生理鹽水。15 min取眼眥或眼眶后靜脈血1.0 ml, 按SOD、MDA檢測(cè)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清SOD含量變化 抗體組和生理鹽水組在再灌注后第3、6小時(shí)SOD比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.05) ；在第0、12小時(shí)比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 血清MDΑ含量變化 抗體組和生理鹽水組在再灌注后第3、6小時(shí)MDA比較, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在第0、12小時(shí)比較, 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表1 抗體組和生理鹽水組各時(shí)間點(diǎn)血清SOD含量比較( x-±s, U/ml)

表2 抗體組和生理鹽水組各時(shí)間點(diǎn)血清MDΑ含量比較( x-±s, nmol/ml)

3 小結(jié)

短暫的腦缺血后再灌注, ?？蓪?dǎo)致較腦缺血本身更為嚴(yán)重的損害, 急性炎性反應(yīng)在腦缺血再灌注損傷中具有重要作用［3］。本研究發(fā)現(xiàn), 在缺血再灌注3、6 h后, SOD含量抗體組較生理鹽水組升高, MDA含量較生理鹽水組降低, 二者與生理鹽水組比較差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 在0 h時(shí)可能是由于TNF-α抗體早期對(duì)SOD酶系統(tǒng)和MDA的氧化激活作用較弱, 在12 h時(shí)可能是由于TNF-α的濃度基本降低至發(fā)病前水平, 使用TNF-α抗體后, 并不能對(duì)內(nèi)源性抑制系統(tǒng)起到抵抗作用；而且由于再灌注時(shí)間的延長(zhǎng), 腦損害變成不可逆性, 使用TNF-α抗體可能已經(jīng)無(wú)作用。因此, 在腦梗死中期, 根據(jù)TNF-α含量, 使用TNF-α抗體后, SOD活性增高, MDA下降, 說(shuō)明TNF-α抗體具有抗氧化能力,對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用。但由于實(shí)驗(yàn)條件限制, 潛在的副作用和作用機(jī)制尚需進(jìn)一步的深入研究。

［1］ Αlkam T, Nitta Α, Mizoguchi H, et al.Restraining tumor necrosis factor-alpha bythalidomide prevents the amyloid beta-induced impairment of recognition memory in mice.Behav Brain Res, 2008, 189(1):100-106.

［2］ Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.Stroke, 1989, 20(1):84-91.

［3］ Van der Bijl ΑE, Emmer BJ, Breedveld FC, et al.Advanced magnetic resonance imaging of the brain in patients treated with TNF-alpha blocking agents.Clin Exp Rheumatol, 2007, 25(2):301-304.

Antioxidation effect by anti-tumor necrosis factor-α monoclonal antibody for cerebral ischemia- reperfusion rats

CHEN Jin, WU Li-e.
Department of Neurology, Inner Mongolia Autonomous Region People’s Hospital, Hohhot 010017, China

Objective To investigate antioxidation effect by tumor necrosis factor-α (TNF-α) monoclonal antibody for cerebral ischemia-reperfusion rats.Methods A total of 76 health male SD rats were randomly divided into sham operation group (4 cases), antibody group (36 ases), and normal saline group (36 cases).Model of focal cerebral ischemia-reperfusion rats was established by Zea Longa line plug method.Serum malondialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) activity were detected.Results 3 and 6 h of TNF-α monoclonal antibody reperfusion reduced serum MDA content and improvded SOD activity.Conclusion Anti-TNF-αmonoclonal antibody can improve antioxidation effect in cerebral ischemiareperfusion rats for a certain time.

Anti-tumor necrosis factor-α monoclonal antibody; Cerebral ischemia-reperfusion injury; Malondialdehyde; Superoxide dismutase

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.27.212

2015-05-08］

010017 內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(陳金)；包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科(吳麗娥)