周 健,陳 峰,于洪忠

（1.湖南省瀏陽市棖沖鎮(zhèn)動物防疫檢疫站，湖南瀏陽410316；2.湖南五指峰生化有限公司，湖南瀏陽410329）

眾所周知，養(yǎng)殖場的消毒池是門衛(wèi)消毒系統(tǒng)一個關(guān)鍵組成部分，是杜絕外界病原微生物進(jìn)入養(yǎng)殖場內(nèi)環(huán)境的重要門戶。筆者通過調(diào)查走訪多家規(guī)模養(yǎng)豬場和養(yǎng)雞場，了解到目前規(guī)模場技術(shù)人員對消毒池的消毒劑選擇、更換頻率、消毒效果的認(rèn)知存在許多誤區(qū)。因此，筆者模擬消毒池狀況對當(dāng)前消毒池多種常用消毒劑進(jìn)行殺菌對比試驗(yàn)，希望試驗(yàn)結(jié)果能對規(guī)模養(yǎng)殖場的相關(guān)技術(shù)人員起到參考借鑒作用。

1 材料

1.1 消毒劑

2%NaOH水溶液（工業(yè)級燒堿，市場購買，25kg包裝，含98%NaOH，批號：20150304），編號為A消毒劑；消毒威水溶液（含30%二氯異氰脲酸鈉，批號:20150501，按1∶1200倍稀釋），編號為B消毒劑；五指峰新菌敵水溶液（含量：5%戊二醛+5%癸甲溴銨，批號：20150517，按1∶500倍稀釋），編號為C消毒劑；好典水溶液（含5%聚維酮碘，批號：20150602，按1:300倍稀釋），編號為D消毒劑。A消毒劑為自行配制，B、C、D消毒劑均由湖南五指峰生化有限公司提供。

1.2 消毒劑指標(biāo)菌

消毒劑指標(biāo)菌分別為大腸埃希氏菌（8099）、多殺性巴氏桿菌（禽株）、金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、蠟狀桿菌芽孢（SSICl/1）（均購自中國獸藥監(jiān)察所）。

1.3 中和劑的配制

1.3.1 中和劑Ⅰ：為自制復(fù)合中和劑，用于中和消毒威水溶液、新菌敵水溶液、好典水溶液。精密稱取無水磷酸氫二鈉2.83g、磷酸二氫鉀1.36g、胰蛋白胨10g、牛肉粉3g、葡萄糖2g、硫代硫酸鈉5g、卵磷脂3g、甘氨酸3g、吐溫-80各30mL。將各成分加入到1L蒸餾水中，待完全溶解后，調(diào)pH至7.2～7.4，于121℃壓力蒸氣滅菌20min，冰箱保存?zhèn)溆茫ㄒ陨显噭┖驮囁幘徸試幖瘓F(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.3.2 中和劑Ⅱ：2%NaOH水溶液，需要等當(dāng)量的酸來中和。因此，通過計(jì)算摩爾含量，將5.56g含量為36%的濃鹽酸加入1000g純化水中配制成NaOH水溶液中和劑，于121℃壓力蒸氣滅菌20 min，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 稀釋液

0.9 %氯化鈉注射液，購自四川科倫藥業(yè)公司。

2 試驗(yàn)方法

方法參照《獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范》[1]。

2.1 中和劑選擇試驗(yàn)

選擇指定濃度的消毒劑，以蠟樣桿菌芽孢和大腸桿菌為受試菌，分別進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)。試驗(yàn)分為6組：第1組：消毒劑＋菌懸液；第2組：（消毒劑＋菌懸液）＋中和劑；第3組：中和劑＋菌懸液；第4組：（消毒劑＋中和劑）＋菌懸液；第5組：稀釋液＋菌懸液；第6組：中和劑＋稀釋液。

2.2 細(xì)菌、芽孢懸液定量殺菌試驗(yàn)

2.2.1 將制備的菌液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，然后用氯化鈉注射液稀釋成含菌106～107CFU/mL的試驗(yàn)菌液；

2.2.2 將消毒劑樣品用純化水按指定稀釋比例稀釋至測試濃度；

2.2.3 吸取0.5mL試驗(yàn)菌液于4.5mL測試濃度的消毒劑溶液內(nèi)；

2.2.4 置20℃水浴中作用5分鐘；

2.2.5 立即吸取上述菌藥混合液1.0mL，加入9.0mL中和液中混勻；

2.2.6 以0.9%氯化鈉注射液代替消毒液，同時進(jìn)行上述各步驟，作為對照組；

2.2.7 以上各步驟均設(shè)置一個平行對照；

2.2.8 中和10min后進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，37℃培養(yǎng)24h，計(jì)算殺菌率；

2.2.9 模擬消毒池實(shí)際狀況，將各試驗(yàn)消毒劑敞開暴露在室外，每天重復(fù)進(jìn)行上述試驗(yàn)，共7天，記錄試驗(yàn)數(shù)據(jù)，分析試驗(yàn)結(jié)果。

3 結(jié)果

3.1 中和劑選擇試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果

中和劑選擇試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果為第1組不長菌或有極少數(shù)菌生長；第2組長少量菌且比第1組多，比第3、4、5組的菌數(shù)少；第3、4、5組的菌數(shù)相當(dāng)且誤差率小于15%；第6組無污染。說明所配制中和劑在細(xì)菌和芽孢的殺菌試驗(yàn)中可有效中和本消毒劑，并對細(xì)菌、芽孢及培養(yǎng)基無不良影響。

3.2 消毒劑（第1天）對細(xì)菌、芽孢懸液定量殺菌試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 消毒池常用消毒劑A～D（現(xiàn)配現(xiàn)用）殺菌效果對比

3.3 消毒池常用消毒劑（持續(xù)7天）殺菌效果對比試驗(yàn)持續(xù)7天，每天重復(fù)殺菌試驗(yàn)效果見表2。

表2 消毒池常用消毒劑A～D（持續(xù)7天）殺菌效果對比

4 試驗(yàn)說明

4.1 依據(jù)張均田[2]的體外殺菌實(shí)驗(yàn)的菌落計(jì)數(shù)方法，低于5個菌落的視同為殺菌完全，故試驗(yàn)消毒劑（現(xiàn)配現(xiàn)用）對大腸埃希氏菌、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀桿菌芽孢的殺菌率計(jì)為100%。

4.2 氯化鈉注射液對照組的平板均有大量細(xì)菌生長，其菌落數(shù)按試驗(yàn)菌液100倍稀釋后的菌落數(shù)計(jì)算。

4.3 依據(jù)《獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范》[1]的試驗(yàn)消毒效能判斷標(biāo)準(zhǔn)，殺滅指數(shù)須達(dá)103或殺菌率達(dá)99.9%以上，故試驗(yàn)消毒劑消毒效能符合規(guī)定。

5 結(jié)論

2%NaOH水溶液、消毒威1∶1200倍稀釋、新菌敵1∶500倍稀釋、好典1∶300倍稀釋的水溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用），作用5分鐘對大腸埃希氏菌、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀桿菌芽孢的殺滅率99.9%以上，其消毒效能符合規(guī)定。

四種試驗(yàn)消毒劑對大腸埃希氏菌、多殺性巴氏桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀桿菌芽孢四種指標(biāo)菌的殺滅率在第1天都能達(dá)到99.9%以上，其消毒效能符合要求。2%NaOH水溶液在第2天殺菌率未達(dá)到99.9%以上；30%消毒威1∶1200倍稀釋的水溶液在第4天殺菌率未達(dá)到99.9%以上；新菌敵1∶500倍稀釋的水溶液在第3天殺菌率未達(dá)到99.9%以上；好典1∶300倍稀釋的水溶液在第2天殺菌率未達(dá)到99.9%以上，其消毒效能不符合規(guī)定。

6 分析

通過試驗(yàn)結(jié)果可知，四種消毒池常用消毒劑在現(xiàn)配現(xiàn)用的情況下都具有良好的消毒效果，具有速效、強(qiáng)效的殺滅效力，在5分鐘內(nèi)即車輪緩慢經(jīng)過消毒池時能有效消毒。在持續(xù)7天的試驗(yàn)中可見，NaOH水溶液和好典稀釋液在暴露室外的第2天還能維持90%以上對四種消毒劑指標(biāo)菌的殺滅率，在第4天殺菌率下降一半，在第6天基本不具備殺菌能力。分析其原因，NaOH水溶液能與空氣中的二氧化碳反應(yīng)生成NaCO3，使溶液中NaOH含量迅速下降，導(dǎo)致殺菌效力急速遞減；好典中的聚維酮碘在高溫和陽光曝曬下急速分解，當(dāng)超過40℃時由于碘蒸汽的產(chǎn)生，使游離碘濃度下降，殺菌作用亦減弱[4]。這兩種消毒劑不適合長期使用，因此建議養(yǎng)殖場用戶不要在消毒池使用NaOH和聚維酮碘溶液。

消毒威和新菌敵稀釋液在1～2天內(nèi)能維持99.9%以上的殺菌率，在第4天還能維持90%左右的殺菌率，在第7天還具有60%～80%的殺菌率，具有高效、速效、長效作用，能做為消毒池專用消毒劑使用。消毒威主要成分為二氯異氰脲酸鈉，屬于有機(jī)含氯消毒劑，具有很強(qiáng)的氧化作用；有效氯含量55%～65%，在空氣中可分解出氯氣，在水中可形成次氯酸；其主要優(yōu)點(diǎn)是殺菌譜廣、殺菌力強(qiáng)、儲存穩(wěn)定、易于運(yùn)輸、水溶性好、適用范圍廣[3]，可殺滅各種細(xì)菌、藻類、真菌和病毒。新菌敵主要含有戊二醛和癸甲溴銨。戊二醛屬高效消毒劑，具有廣譜、高效、快速、腐蝕性小、水溶液穩(wěn)定性比較好等優(yōu)點(diǎn)[4]，可有效殺滅各種細(xì)菌繁殖體、結(jié)核桿菌、真菌、細(xì)菌芽孢、病毒等[3]。癸甲溴銨為雙長鏈季銨鹽類陽離子表面活性劑，具有比單鏈季銨鹽殺菌效果更好，在清潔條件下用5～10mg/L能殺滅水中多數(shù)細(xì)菌繁殖體；殺菌譜更廣，除對多數(shù)細(xì)菌繁殖體有較強(qiáng)殺滅能力外，也可殺滅真菌和酵母菌[3]。二者復(fù)配而成的新菌敵消毒劑，具協(xié)同增效作用，能充分發(fā)揮二者的特性，使用后殘留少、安全、環(huán)保，是理想的新型復(fù)配消毒劑。

通過結(jié)論分析，我們推薦在養(yǎng)殖場消毒池使用30%消毒威（通用名：二氯異氰脲酸鈉粉）按1∶1200倍稀釋、新菌敵（通用名：戊二醛癸甲溴銨溶液）按1∶500倍稀釋進(jìn)行車輪和鞋底消毒，每5～6天更換1次；不建議使用燒堿（NaOH）和聚維酮碘溶液消毒。

[1]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范(試行)[S].1992,農(nóng)(牧藥)字第101 號.

[2]張均田，杜冠華主編.現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法(第2 版)[M].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2012.

[3]楊華明，易濱主編.現(xiàn)代醫(yī)院消毒學(xué)(第2 版)[M].北京：中國軍醫(yī)出版社，2008.

[4]薛廣波主編.現(xiàn)代消毒學(xué)[M].北京：中國軍醫(yī)出版社，2002.