尹柏雙　王秋竹　付連軍等

摘要： 為研究不同程度奶牛隱性乳房炎發(fā)病情況與乳清中C-反應(yīng)蛋白（CRP）含量變化的關(guān)系，選取6頭健康奶牛和18頭患輕、中、重度隱性乳房炎奶牛，采集乳樣，分離乳清，利用Elisa CRP檢測試劑盒測定樣品中CRP含量。結(jié)果表明，隨著隱性乳房炎病情加重、乳汁體細胞數(shù)的增加，乳清中CRP含量逐漸升高，與健康對照組比較升高極顯著。結(jié)果表明，乳清中CRP含量變化與隱性乳房炎發(fā)病具有一定相關(guān)性，乳腺損傷程度與乳汁體細胞數(shù)增加和乳清中CRP含量呈正相關(guān)。

關(guān)鍵詞： 隱性乳房炎；奶牛；乳清；C-反應(yīng)蛋白

中圖分類號：S858 237 2+6 文獻標志碼：A

文章編號：1002-1302（2015）08-0214-02

奶牛隱性乳房炎引起泌乳奶牛產(chǎn)奶量下降，牛奶品質(zhì)降低，養(yǎng)殖成本增加，產(chǎn)后發(fā)情延長，妊娠時間推遲，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失，是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最嚴重的疾病之一 [1]。C-反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP） 是一種由IL-1、IL-6、TNF-α刺激下肝細胞和局部炎癥巨噬細胞合成的急性反應(yīng)蛋白 [2]。CRP不僅可以與侵入的細菌、真菌細胞壁上的磷酸膽堿結(jié)合，激活補體，促使內(nèi)源性或外源性配體物質(zhì)清除等功能 [3]；還具有增強巨噬細胞對各種細菌和異物的吞噬能力 [4]，從而發(fā)揮抗炎作用 [5]。研究發(fā)現(xiàn)，CRP在細菌感染性腦膜炎、心血管疾病、心房顫動、冠心病和妊娠糖尿病等疾病診斷中具有重要意義 [6-10]。C-反應(yīng)蛋白作為一個新的診斷細菌性感染的細胞因子指標，在感染性疾病的診斷中發(fā)揮重要作用 [11]。大多數(shù)奶牛隱性乳房炎是由鏈球菌、葡萄球菌、大腸桿菌等細菌感染引起的一種疾病，伴發(fā)炎癥反應(yīng)、乳腺局部病變等臨床癥狀，而奶牛隱性乳房炎發(fā)病與C-反應(yīng)蛋白的相關(guān)性報道較少。本試驗研究乳清中C-反應(yīng)蛋白與不同程度奶牛隱性乳房炎發(fā)病的關(guān)系，為隱性乳房炎快速診斷方法的建立提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1 1 試驗動物

通過乳汁體細胞計數(shù)監(jiān)測后選擇年齡、胎次、產(chǎn)奶量、泌乳期等指標相近的健康奶牛6頭和患不同程度奶牛隱性乳房炎奶牛18頭，奶牛由吉林市某奶牛場提供。

1 2 主要試劑與儀器

C-反應(yīng)蛋白（CRP）測定試劑盒（南京建成生物試劑研究所）；Fossmatic 5000體細胞計數(shù)儀（FOSS 公司，丹麥）；Varioskan 酶標儀（Thermo 公司，美國）；離心機（Sigma公司，美國）。

1 3 試驗動物分組

通過乳汁體細胞計數(shù)監(jiān)測后將試驗?zāi)膛７殖山】祵φ战M（6頭，乳中體細胞數(shù)（SCC）≤10萬個/mL）、輕度隱性乳房炎組（6頭，50×104 mL500萬個/mL）。

1 4 乳樣采集

采集試驗?zāi)膛５娜橹蓸忧皩θ閰^(qū)進行清洗，然后用70%的乙醇消毒乳區(qū)，棄掉頭3 把乳汁，分別采乳10 mL裝入無菌試管中，將采集的乳樣放到冰盒中，帶回實驗室檢測。

1 5 乳清制備

將采集的乳樣于3 000 r/min離心5 min，除去上層乳脂，然后于16 000 r/min高速離心機中離心10 min，去除沉淀，保留上清，4 ℃保存，待測。

1 6 檢測方法

乳汁體細胞計數(shù)采用體細胞計數(shù)儀測定，C-反應(yīng)蛋白（CRP）含量采用CRP Elisa試劑盒測定，在酶標儀上比色測定D450 nm，根據(jù)試劑盒說明繪制標準曲線后計算CRP含量。

1 7 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17 0數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)做單因素方差分析，結(jié)果以“均值±標準誤”表示，分析樣品間差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

患輕度乳房炎奶牛乳清中CRP含量為（49 01±9 46 ）μg/mL，與健康對照組比較升高極顯著；患中、重度乳房炎奶牛乳清中CRP含量較健康對照組極顯著升高（表1）。隨著乳房炎病情加重，乳汁體細胞數(shù)增加，乳清中CRP含量逐漸升高，表明乳腺損傷程度和乳汁體細胞數(shù)增加與乳清中CRP含量呈正相關(guān)。

3 討論與結(jié)論

急性期蛋白是機體受感染、炎癥等應(yīng)激原刺激下所產(chǎn)生

變化的蛋白，又叫應(yīng)激敏感蛋白質(zhì)，C-反應(yīng)蛋白是急性期蛋白成員之一。CRP是由以非共價對稱連接完全相同的5個單體組成，分子量約為118 ku [12]。CRP 通過結(jié)合具有磷酸基的物質(zhì)，來識別各種病原體和機體受傷或壞死的細胞膜，具有推動組織修復和再生的功能；細菌感染后，CRP 能與病原體結(jié)合，激活經(jīng)典的補體途徑，清除異物，殺死病原微生物 [13-14]。安芳蘭等研究表明，血清中急性期蛋白的濃度變化可為疾病診斷、預防提供可靠的依據(jù) [15]。伍濤等研究表明，C-反應(yīng)蛋白在奶牛乳房受到病理損傷時，具有較高的敏感性，當奶牛發(fā)生乳房炎時，可以通過測定其血清和乳汁中C-反應(yīng)蛋白水平，監(jiān)測乳房組織的炎癥狀態(tài) [16]。楊洪森報道，家兔乳頭管灌注金黃色葡萄球菌和大腸桿菌后引起家兔乳腺上皮細胞排列改變，腺泡腔擴張顯著、腔內(nèi)分泌物增加，中性粒細胞浸潤或崩解，間質(zhì)小靜脈和毛細血管充血，血清中CRP含量顯著升高 [17]。本試驗結(jié)果表明，患隱性乳房炎奶牛乳清中CRP含量極顯著高于健康對照組，隨著隱性乳房炎病情加劇乳汁中CRP含量逐漸升高，與王洪偉報道的患乳房炎奶牛血清中CRP變化基本一致 [18]。在臨床獸醫(yī)學領(lǐng)域針對我國奶牛隱性高發(fā)病率和診斷技術(shù)相對落后的情況下，利用乳清中CRP變化的特點，開展早期快速診斷將具有廣闊的研究空間和發(fā)展前景。

本研究結(jié)果表明，乳清中CRP含量變化與隱性乳房炎發(fā)病具有一定相關(guān)性，隨著乳腺炎癥加劇和乳汁體細胞數(shù)增加，乳清中CRP含量顯著升高。

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