李永東 葛智平 溫慧華 劉丹 阿拉坦高勒

.基礎(chǔ)研究.

貝那普利對(duì)高血壓患者內(nèi)皮祖細(xì)胞凋亡及氧化應(yīng)激的影響

李永東 葛智平 溫慧華 劉丹 阿拉坦高勒

目的 探討貝那普利對(duì)高血壓患者內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPC）凋亡和氧化應(yīng)激的影響。方法入選符合《中國(guó)高血壓防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)的1級(jí)高血壓患者15例，同時(shí)選取年齡、性別相匹配的健康體檢者15名為對(duì)照組。所有受試者抽取外周血，常規(guī)密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，將經(jīng)鑒定的正在分化的EPC培養(yǎng)5 d后用于實(shí)驗(yàn)。將分離、培養(yǎng)獲得的每一例高血壓患者EPC培養(yǎng)5 d后將細(xì)胞平行分為5份，每份細(xì)胞根據(jù)不同的刺激處理?xiàng)l件分為高血壓組、不同濃度貝那普利（1、10和100 μmol/L）干預(yù)組、貝那普利（10 μmol/L）+基質(zhì)細(xì)胞衍生因子/受體趨化因子4（SDF-1/CXCR4）拮抗劑AMD3100干預(yù)組。上述干預(yù)24 h后進(jìn)行EPC凋亡檢測(cè)：用Annexin-V/PI法；氧化應(yīng)激檢測(cè)：黃嘌呤氧化法測(cè)定上清液中超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥酸法測(cè)定丙二醛含量。結(jié)果 （1）與對(duì)照組比較，高血壓組外周血EPC凋亡率明顯增加（t早=6.6334，t晚=3.812；均為P＜0.01），氧化應(yīng)激反應(yīng)明顯增高（tSOD=8.258，tMDA=6.6806；均為P＜0.01）；（2）隨著貝那普利干預(yù)濃度的增加（1、10和100 μmol/L），EPC凋亡率也隨之降低（F早=17.39，F(xiàn)晚=51.65；均為P＜0.05），氧化應(yīng)激反應(yīng)也隨之降低，呈濃度依賴(lài)性（FSOD=14.56，F(xiàn)MDA=7.859；均為P＜0.05）。與10 μmol/L貝那普利干預(yù)組比較，10 μmol/L貝那普利+AMD 3100干預(yù)組的EPC凋亡率增加（t早=3.551，t晚=5.333；均為P早、晚＜0.05），氧化應(yīng)激反應(yīng)增高（tSOD=1.931，tMDA=0.6407；均為P＜0.05）。結(jié)論 貝那普利能顯著改善高血壓患者體外EPC凋亡及氧化應(yīng)激反應(yīng)，并可能通過(guò)SDF-1/CXCR4軸發(fā)揮作用。

高血壓； 內(nèi)皮祖細(xì)胞； 凋亡； 氧化應(yīng)激； 拮抗劑AMD 3100

原發(fā)性高血壓是最常見(jiàn)的心血管疾病之一，并可造成心腦腎及周?chē)軆?nèi)皮損害，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cell，EPC）是一群能增殖分化為成熟血管內(nèi)皮細(xì)胞，參與出生后血管新生、血管形成及內(nèi)皮損傷修復(fù)的前體細(xì)胞。EPC可維持內(nèi)皮的完整和抑制內(nèi)皮的激活，這種生物學(xué)作用在高血壓的發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用。高血壓的發(fā)病機(jī)制中腎素-血管緊張素系統(tǒng)起了重要作用，血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑（angiotensin converting enzyme inhibitors，ACEI）通過(guò)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，削弱血管緊張素Ⅱ介導(dǎo)的各種病理作用，降低血壓，改善血管、心臟重構(gòu)，改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能。已有研究表明，高血壓血管損傷與EPC的凋亡增加和氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)有關(guān)［1-2］，而ACEI對(duì)高血壓患者外周循環(huán)中EPC凋亡及氧化應(yīng)有何影響，ACEI對(duì)高血壓患者的治療作用是否與EPC凋亡和氧化應(yīng)激的改善有關(guān)目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)相關(guān)研究。已知基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）及其受體趨化因子4（CXC chemokine receptor 4，CXCR4）之間的受體配體生物軸在EPC動(dòng)員、遷移及歸巢過(guò)程中起重要作用［3］。本實(shí)驗(yàn)擬探討貝那普利能否改善高血壓患者EPC凋亡和氧化應(yīng)激反應(yīng)，同時(shí)探討SDF-1/ CXCR4軸在其中的可能作用。

1　材料和方法

1.1研究對(duì)象

2011年10月在內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院心內(nèi)科入選符合《中國(guó)高血壓防治指南》（2012版）診斷標(biāo)準(zhǔn)的1級(jí)高血壓患者15例，年齡38～63歲，平均（47±12）歲，其中男性9例，女性6例。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往服用過(guò)降壓藥物的患者；合并血脂、血糖代謝異常的患者；抽煙、酗酒者；合并感染性疾病如嚴(yán)重的上呼吸道感染、肺部、肝膽道感染等；高熱，應(yīng)用炎癥抑制藥物如非固醇類(lèi)消炎鎮(zhèn)痛藥、類(lèi)固醇和鴉片類(lèi)藥物者。同時(shí)選取年齡、性別相匹配的健康體檢者15名作為對(duì)照組，年齡36～61歲，平均（46±11）歲，其中男性10例，女性5例。

1.2主要試劑和儀器

EGM-2-MV培養(yǎng)基為L(zhǎng)onza公司產(chǎn)品，DiI標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍祝╝cLDL-DiI）和FITC-lectin為BTI公司產(chǎn)品，AMD3100為Roche公司產(chǎn)品，SDF-1試劑盒、CD34、CD133、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）試劑盒、丙二醛（malonaldehyde，MDA）試劑盒購(gòu)自北京博奧森公司。細(xì)胞培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)品，流式細(xì)胞儀為BD公司產(chǎn)品，熒光倒置顯微鏡為尼康公司產(chǎn)品。

1.3人EPC的分離、培養(yǎng)和鑒定

所有研究對(duì)象于入選后第2天空腹采集新鮮外周抗凝血20 ml，常規(guī)密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞。將單個(gè)核細(xì)胞以1×105個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種在人纖維連接蛋白包被的6孔培養(yǎng)板上。加入EGM-2-MV培養(yǎng)基（hEGF，Hydrocortisone，VEGF，F(xiàn)GF-B，R3-IGF-1），于5%CO2培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)。培養(yǎng)4 d后，用PBS洗掉非貼壁細(xì)胞。為維持細(xì)胞原生存環(huán)境，EGM-2-MV培養(yǎng)基中加入20%的患者來(lái)源血清細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)至5 d后進(jìn)行各種檢測(cè)分析。貼壁細(xì)胞用acLDL-DiI和FITC-lectin行熒光化學(xué)染色，激光共聚焦顯微鏡下觀察，染色雙陽(yáng)性細(xì)胞被認(rèn)為是正在分化的EPC，每孔隨機(jī)選擇15個(gè)視野（×200）行EPC計(jì)數(shù)。取其平均值換算為每平方毫米的細(xì)胞個(gè)數(shù)記錄。將培養(yǎng)5 d的EPC消化，制成細(xì)胞懸液，按操作說(shuō)明書(shū)加入CD34及CD133單克隆抗體，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞CD34、CD133的表達(dá)。

1.4實(shí)驗(yàn)分組和方法

將上述分離得到的每例人群EPC培養(yǎng)5 d后用于實(shí)驗(yàn)研究；15例正常組人群EPC作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，而15例高血壓患者人群分離得到的EPC培養(yǎng)5 d后，將每例患者來(lái)源的內(nèi)皮祖細(xì)胞平行分為5份，根據(jù)不同的處理?xiàng)l件設(shè)置為5組：高血壓組、不同濃度貝那普利（1、10和100 μmol/L）干預(yù)高血壓組和貝那普利（10 μmol/L）+SDF-1/CXCR4拮抗劑AMD3100干預(yù)組；每組都為15例。其中貝那普利原粉以不同濃度（1、10和100 μmol/L）與高血壓組EPC共培養(yǎng)24 h（在含20%患者來(lái)源血清的培養(yǎng)基中同時(shí)加入貝那普利，于37 C、5%CO2飽和濕度條件的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)）。隨后檢測(cè)所有實(shí)驗(yàn)組外周血EPC凋亡率和氧化應(yīng)激水平。

1.5檢測(cè)項(xiàng)目和方法

1.5.1貝那普利干預(yù)對(duì)EPC凋亡的影響 用含1%患者來(lái)源血清細(xì)胞的EGM-2-MV培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12 h后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。需用AMD3100預(yù)處理的細(xì)胞組，經(jīng)20 μmol/L AMD3100預(yù)處理1 h，用含20%患者血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，按Annexin-V-FLUOS staining kit的操作說(shuō)明進(jìn)行FITC-Annexin-V/PI的熒光染色，在熒光顯微鏡下（×400）觀察并應(yīng)用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞占所有細(xì)胞的比例，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。FITC+PI-的細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞，F(xiàn)ITC+PI+的細(xì)胞為晚期凋亡細(xì)胞。

1.5.2貝那普利干預(yù)EPC氧化應(yīng)激的檢測(cè) 1%患者來(lái)源血清細(xì)胞的EGM-2-MV培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)12 h后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。需AMD3100預(yù)處理的細(xì)胞組，經(jīng)20 μmol/L AMD 3100預(yù)處理1 h，用含20%患者血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，黃嘌呤氧化法測(cè)定上清液中SOD活力，硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量。按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，分光光度儀測(cè)定各組的吸光度OD值，計(jì)算各組的SOD活性和MDA含量。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料用表示，組間比較采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1EPC的鑒定

人EPC分離培養(yǎng)第5天時(shí)，倒置顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈短梭形，為單層細(xì)胞。用acLDL-DiI及FITC標(biāo)記荊豆凝集素（FITC-UEA-I）對(duì)細(xì)胞染色后，用熒光顯微鏡觀察，發(fā)紅色熒光的為acLDL-DiI陽(yáng)性細(xì)胞，發(fā)綠色熒光的是UEA-I陽(yáng)性細(xì)胞，染色雙陽(yáng)性的細(xì)胞為正在分化的EPC。流式細(xì)胞儀分析CD34和CD133的陽(yáng)性率分別為72.55%±5.17%和71.31±4.39%。見(jiàn)圖1。

圖1　人外周血EPC經(jīng)acLDL-DiI和FITC-UEA-Ⅰ雙熒光染色鑒定結(jié)果

2.2貝那普利對(duì)EPC凋亡的影響及SDF-1 CXCR 4拮抗劑AMD3100在其中的作用

與對(duì)照組比較，高血壓組樣本EPC凋亡率明顯增高（t早=6.6334，t晚=3.812；均為P＜0.01）。用1、10和100 μmol/L的貝那普利干預(yù)體外培養(yǎng)的高血壓患者EPC 24 h，檢測(cè)其凋亡率顯示，隨著貝那普利濃度逐漸增加，EPC早期、晚期凋亡率均逐漸降低，并呈濃度依賴(lài)性（F早=17.39，F(xiàn)晚=51.65；均為P＜0.05）。與10 μmol/L貝那普利干預(yù)組比較，10 μmol/L貝那普利+AMD 3100組的EPC凋亡率升高（t早=3.551，t晚=5.333；均為P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1　不同濃度貝那普利對(duì)EPC凋亡率的影響（，%）

表1　不同濃度貝那普利對(duì)EPC凋亡率的影響（，%）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.01；與高血壓組比較，bP＜0.05；與10 μmol/L干預(yù)組比較，cP＜0.05

組別例數(shù)早期凋亡率晚期凋亡率對(duì)照組153.2±2.14.7±2.9高血壓組159.2±3.1a8.6±3.2a貝那普利干預(yù)組1 μmol/L組157.4±2.7b6.5±2.0b10 μmol/L組155.3±2.4b4.6±3.1b100 μmol/L組153.6±1.9b2.6±1.6b10 μmol/L+AMD 3100組158.9±2.9c7.9±3.0c

2.3貝那普利對(duì)EPC氧化應(yīng)激的影響及SDF-1 CXCR4拮抗劑AMD3100在其中的作用

與對(duì)照組比較，高血壓組樣本SOD活性明顯降低，MDA含量明顯升高（tSOD=8.258，tMDA=6.6806；P＜0.01），用1、10和100 μmol/L貝那普利干預(yù)體外培養(yǎng)的高血壓患者EPC 24 h，檢測(cè)其氧化應(yīng)激的變化顯示，隨著貝那普利濃度逐漸增加，EPC的SOD活性逐漸升高，MDA含量逐漸減低，并呈濃度依賴(lài)性（FSOD=14.56，F(xiàn)MDA=7.859；均為P＜0.05）。與10 μmol/L貝那普利干預(yù)組比較，10 μmol/L貝那普利+AMD3100組SOD活性降低，MDA含量升高（tSOD=1.931，tMDA=0.6407；均為P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2　不同濃度貝那普利對(duì)EPC的SOD、MDA影響（）

表2　不同濃度貝那普利對(duì)EPC的SOD、MDA影響（）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.01；與高血壓組比較，bP＜0.05；與10 μmol/L干預(yù)組比較，cP＜0.05

組別例數(shù)SOD（U/ml）MDA（mmol/ml）對(duì)照組1578.49±8.999.41±1.61高血壓組1540.64±9.84a16.17±2.41a貝那普利干預(yù)組1 μmol/L組1552.81±10.29b14.81±2.18b10 μmol/L組1564.74±10.84b12.71±1.93b100 μmol/L組1576.29±11.12b9.84±1.73b10 μmol/L+AMD 3100組1541.59±10.12c15.89±2.07c

3　討論

EPC是一類(lèi)具有特異性歸巢于損傷區(qū)域并能分化增殖為成熟內(nèi)皮細(xì)胞的干（祖）細(xì)胞。存在于外周血、骨髓和臍靜脈血中，是成熟內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，其生物學(xué)功能主要是促進(jìn)血管新生和參與血管損傷后的內(nèi)皮修復(fù)［4］。

Oliveras等［5］發(fā)現(xiàn)，高血壓患者外周血EPC數(shù)量明顯減少，而且比EPC數(shù)量減少發(fā)生更早的是EPC功能的紊亂，功能受損與凋亡及氧化應(yīng)激有密切關(guān)系。

MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的主要代謝產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性，能較好地反映細(xì)胞氧化損傷的程度；而SOD是清除體內(nèi)自由基系統(tǒng)的主要酶，SOD活力的高低間接反映機(jī)體清除氧自由基的能力；SOD活性和MDA含量可反映機(jī)體清除氧自由基的能力及細(xì)胞受自由基損傷的嚴(yán)重程度，兩者水平的變化在一定程度上可以反映過(guò)氧化損傷的程度［6］。

本研究顯示，與對(duì)照組比較，高血壓組外周血EPC早期、晚期凋亡率明顯增加，與以往研究相一致；而與對(duì)照組比較，高血壓組SOD明顯降低，MDA明顯升高，表明高血壓患者的EPC氧化應(yīng)激反應(yīng)增強(qiáng)。氧化應(yīng)激通過(guò)減弱EPC抗氧化酶的表達(dá)，增加氧化酶的表達(dá)而促進(jìn)EPC的凋亡進(jìn)而影響其數(shù)量與功能［7］。

高血壓發(fā)生時(shí)，血管緊張素Ⅱ通過(guò)誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)抑制EPC分化，抑制端粒酶活性，加速EPC老化，且使EPC分化成熟為完整內(nèi)皮細(xì)胞的能力減弱，會(huì)削弱其血管修復(fù)的能力［8］；Imanishi等［9］指出，EPC的衰老是加速基礎(chǔ)血壓升高和惡化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

我們應(yīng)用1、10和100 μmol/L貝那普利干預(yù)體外培養(yǎng)的高血壓患者EPC 24 h，檢測(cè)凋亡和氧化應(yīng)激的變化顯示，隨著貝那普利濃度逐漸增加，EPC早期、晚期凋亡率降低，同時(shí)SOD活性逐漸升高，MDA含量逐漸減低，即改善了氧化反應(yīng)水平，并呈濃度依賴(lài)性（均為P＜0.05）。提示貝那普利可減少高血壓患者EPC的凋亡，改善EPC的氧化應(yīng)激反應(yīng)?？紤]可能機(jī)制：（1）ACEI貝那普利通過(guò)促進(jìn)EPC的動(dòng)員，引起EPC數(shù)量的增多；（2）提高EPC的抗氧化酶活性及抑制脂質(zhì)過(guò)氧化物生成；（3）局部的腎素血管緊張素系統(tǒng)也可調(diào)節(jié)EPC功能［10-11］。

SDF-1又名前B細(xì)胞刺激因子，屬于CXC族趨化因子成員，SDF-1主要在骨髓基質(zhì)細(xì)胞及骨髓內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。研究表明，在損傷血管的平滑肌也有SDF-1強(qiáng)表達(dá)。SDF-1唯一的受體CXCR4，是一個(gè)有7個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的G蛋白偶聯(lián)受體，在EPC表面高度表達(dá)。SDF-1/CXCR4軸參與EPC的生物學(xué)性能，如動(dòng)員、遷移和歸巢等［3］。

本研究中，應(yīng)用SDF-1/CXCR4軸特異性拮抗劑AMD 3100觀察了其對(duì)貝那普利干預(yù)EPC的影響，發(fā)現(xiàn)與10 μmol/L貝那普利干預(yù)組比較，在加入AMD 3100共培養(yǎng)后EPC凋亡增加和氧化應(yīng)激水平明顯升高，提示貝那普利對(duì)高血壓患者EPC凋亡和氧化應(yīng)激的影響可能通過(guò)SDF-1/CXCR4軸起作用。

綜上，EPC凋亡增加和氧化應(yīng)激導(dǎo)致內(nèi)皮修復(fù)和血管再生能力受損，加速高血壓的發(fā)生發(fā)展。貝那普利可改善EPC的凋亡和氧化應(yīng)激反應(yīng)，改善血管內(nèi)皮功能。對(duì)于EPC在高血壓病理過(guò)程中作用的研究才剛剛開(kāi)始，高血壓與EPC關(guān)系的研究還需要進(jìn)一步深入，隨著兩者之間的關(guān)系逐漸明朗，將可能為高血壓的防治提供一條新的途徑。

［1］Lu QM，Di CX，Zhang RQ，et al.Number and function of bone marrow-derivedendothelialprogenitorcellsinessential hypertension［J］.China Med Herald，2013，10：20-24.（in Chinese）

陸慶明，邸春霞，張榮慶，等.原發(fā)性高血壓條件下骨髓來(lái)源內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及功能的變化［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10：20-24.

［2］Zhang TX，ZhouJZ.Endothelialprogenitorcellsand hypertension［J］.Modern Med J，2008，36：141-144.（in Chinese）

張鐵須，周建中.內(nèi)皮祖細(xì)胞與高血壓?。跩］.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2008，36：141-144.

［3］Kang QL，Lu LS，Chen J.Effects of SDF-1/CXCR4 axis on biological characteristics of bone marrow derived endothelial progenitor cells in rat in vitro［J］.Anat Res，2011，33：413-416.（in Chinese）

康慶林，陸聯(lián)松，陳佳.SDF-1/CXCR4生物軸活化誘導(dǎo)對(duì)鼠骨髓源性?xún)?nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)性能的影響［J］.解剖學(xué)研究，2011，33：413-416.

［4］Yang M，Xiao ZL，Lyu QS，et al.Effect of polyI：C on quantity and activity of endothelial progenitor cells from human umbilical cord blood［J］.Chin J Arteriosclerosis，2011，19：668-673.（in Chinese）

楊梅，肖智林，呂青山，等.PolyI：C對(duì)人肚血內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量及功能的影響［J］.中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志，2011，19：668-673.

［5］Oliveras A，Soler MJ，Martinez-Estrada OM，et al.Endothelial progenitor cells are reduced in refractory hypertension［J］.J Hum Hypertens，2008，22：183-190.

［6］MA J，Ji KT，Guan XQ，et al.Protective effects of gink golide B on oxidative damage of EPCs and study its possible mechanism［J］.J Wenzhou Med Coll，2013，43：714-718.（in Chinese）

馬駿，季亢挺，官學(xué)強(qiáng)，等.銀杏內(nèi)酯B對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制［J］.溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，43：714-718.

［7］Chen SC，Song GY.Research progress of endothelial progenitor cells and oxidative stress［J］.J Clin Rehab Tiss Engin Res，2011，15：1119-1122.（in Chinese）

陳樹(shù)春，宋光耀.內(nèi)皮細(xì)胞與氧化應(yīng)激研究進(jìn)展［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2011，15：1119-1122.

［8］Liu X，Zhang GX，Xia WH，et al.Effect of hypertension on the in vivo reendothelialization capacity of endothelial progenitor cells［J］.Mol Cardiol China，2011，8：23-25.（in Chinese）

劉星，張高星，夏文豪，等.高血壓對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞再生能力的影響［J］.中國(guó)分子心臟病學(xué)雜志，2011，8：23-25.

［9］Imanishi T，Moriwaki C，Hano T，et al.Endothelial progenitor cell senescence is accelerated in both experimental hypertensive rats and patients with essential hypertension［J］.J Hypertens，2005，23：1831-1837.

［10］Bahlmann FH，de Groot K，Mueller O，et al.Stimulation of endothelial progenitor cells：a new putative therapeutic effect of angiotensinⅡreceptor antagonists［J］.Hypertension，2005，45：526-529.

［11］Dernbach E，Urbich C，Brandes RP，et al.Antioxidative stressassociated genes in circulating progenitor cells：evidence for enhanced resistance against oxidative stress［J］.Blood，2004，104：3591-3597.

Effects of Benner Pury on endothelial progenitor cells apoptosis and oxidative stress in patients with hypertension

Li Yongdong1，2，Ge Zhiping1，Wen Huihua1，Liu Dan1，Alatan Gaole2.1 Department of Cardiology，the Third Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University，Baotou 014010，China；2 College of Life Science Hohhot，Inner Mongolia University

Li Yongdong，Email：lyd20070501@163.com

Objective To investigate the effection of Benner Pury on endothelial progenitor cells apoptosis and oxidative stress in vitro hypertension.Methods The patients who were diagnosed as hypertension grade 1，according to the standard″Guidelines for Prevention and Treatment of Hypertension″. The control group were healthy subjects matched with study group in age and gender.Mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation，and fluorescence chemical staining in acLDL-DiI，F(xiàn)ITC-lectin，observed under confocal laser scanning microscope，staining positive cells were considered as the differentiation of endothelial progenitor cell（EPC）.EPC cultivated for 5 days were used for study.The cells isolated from each hypertensive were divided into five copies in parallel，and according to the different stimulation，the cells were divided into five groups：hypertension group，different concentrations of Benner Pury（1 μmol/L，10 μmol/L，100 μmol/L）intervention in hypertension group，and Benner Pury（10μmol/L）+stromal cell derived factor-1（SDF-1）/its receptor chemokine 4（CXCR4）antagonist AMD 3100 pretreatment group.EPC cultivated for 24 h under the different stimulation were used for study EPC apoptosis detection：Annexin-V/PI method；oxidative stress detection：the activity of superoxide dismutase（SOD），xanthine-oxidation method，the content of Malonaldehyde（MDA）malondialdehyde thiobarbituric acid method.Results （1）Compared with the control group，peripheral blood EPS apoptosis rate was obviously increased in hypertension group，oxidative stress was significantly increased too（tearly=6.6334，tlate=3.812；both P＜0.01）.（2）Detection of the apoptosis and oxidative stress level display，different concentrations of Benner Pury 1 μmol/L，10 μmol/L，100 μmol/L intervention in vitro hypertensive patients EPC for 24 h，with the concentrations of Benner Pury gradually increased，the apoptosis rate of EPC was reduced（Fearly=17.39，F(xiàn)late=51.65；both P＜0.05），oxidative stress response also come down in a concentration dependent manner（FSOD=14.56，F(xiàn)MDA=7.859；both P＜0.05）.Compared with 10 μmol/L pretreatment group，10 μmol/L+group AMD 3100，EPC apoptosis rate increased（tearly=3.551，tlate= 5.333，both P＜0.05），oxidative stress response raised up（tSOD=1.931，tMDA=0.6407，both P＜0.05）. Conclusions BennerPury significantly improved the apoptosis of EPC and oxidative stress response in vitro hypertension，and the function may be through the SDF-1/CXCR4 axis.

Hypertension； Endothelial progenitor cells； Apoptosis； Oxidative stress；Antagonist AMD 3100

2014-10-10）

（本文編輯：譚瀟）

10.3969/j.issn.1007-5410.2015.01.012

內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2011MS1150）

014010包頭，內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院心內(nèi)科（李永東、葛智平、溫慧華、劉丹）；內(nèi)蒙古大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院（李永東、阿拉坦高勒）

李永東，電子信箱：lyd20070501@163.com

This workwassupportedbyagrantfrom theNaturalScienceFundProjectofInnerMongolia（No.2011MS1150）