袁柏思 金鑫鑫 路又可 劉 炯 王少東 王震凱 吳 琳 汪芳裕

南京軍區(qū)南京總醫(yī)院消化內(nèi)科(210002)

克羅恩病(Crohn’s disease，CD)是一種病因和發(fā)病機制尚不十分清楚的腸道慢性炎癥性疾病，目前認為遺傳、環(huán)境、微生物、免疫因素共同參與了CD的發(fā)病，免疫應答的過度激活和失衡可能是其中最直接和最重要的因素［1］。免疫應答異常將導致腸黏膜防御能力下降和腸黏膜炎癥損傷加重，T細胞是機體免疫應答的主要參與者。本研究擬探討CD患者外周血CD3+、CD4+和CD8+T細胞的表達變化及其與血清炎癥標記物的關系。

對象與方法

一、一般資料

收集2014年1月-2014年7月南京軍區(qū)南京總醫(yī)院消化內(nèi)科CD住院患者26例，其中男17例，女9例，平均年齡(33.0±12.7)歲，病程1個月～15年(病程≤1個月計為1個月)，平均40.4個月。CD診斷參照中華醫(yī)學會消化病學分會炎癥性腸病學組制訂的“炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)”［2］的診斷標準。按蒙特利爾表型分類法［3］分型，A1型2例，A2型17例，A3型7例;L1型10例，L2型6例，L3型9例，L4型1例;P型4例;B1型16例，B2型8例，B3型2例。采用簡化CD疾病活動指數(shù)(Crohn’s disease activity index，CDAI)［4］判斷 CD的活動期和緩解期，活動期14例，緩解期12例。納入同期8名健康志愿者作為對照，其中男5名，女3名，平均年齡(38.8±15.9)歲，既往無肝炎、結(jié)核、自身免疫病等疾病史，近3個月內(nèi)未服用激素、免疫抑制劑、生物制劑等藥物。本研究方案由南京軍區(qū)南京總醫(yī)院倫理委員會批準，入選者均知情同意。

二、標本采集和檢測

受檢者于早晨空腹采集靜脈血2 mL，用流式細胞儀檢測外周血CD3+、CD4+和CD8+T細胞比例;生化儀檢測靜脈血白蛋白水平;魏氏法檢測紅細胞沉降率(ESR);血細胞儀檢測白細胞、血小板計數(shù)、血紅蛋白;免疫比濁法檢測C反應蛋白(CRP)水平。

三、統(tǒng)計學分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件。兩組間比較采用t檢驗，相關性分析采用Spearman檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

一、外周血T細胞比例

對照組和CD組的CD3+、CD4+和CD8+T細胞測定結(jié)果見圖1。CD組僅CD8+T細胞比例明顯高于對照組(P=0.018)，CD活動期所有T細胞比例均明顯高于緩解期和對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);CD緩解期與對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)(圖2)。

圖1 對照組和CD組流式細胞圖

二、外周血炎癥相關指標

與對照組相比，CD組和CD活動期ESR和CRP水平明顯升高(P＜0.05)，而白蛋白和血紅蛋白水平明顯降低(P＜0.001)，CD緩解期白蛋白水平明顯低于對照組(P=0.007);與CD緩解期相比，CD活動期ESR和CRP水平明顯升高(P＜0.05)，而白蛋白、血紅蛋白水平明顯降低(P＜0.05);CD組、CD活動期和緩解期患者的白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)與對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)(圖2)。

三、T細胞與外周血炎癥指標的相關性分析

CD3+、CD4+和CD8+T細胞比例與CRP呈正相關(P＜0.05)，與血紅蛋白呈負相關(P＜0.05)，CD3+、CD4+T細胞比例與 ESR呈正相關(P＜0.05)(圖3);而 CD8+T細胞比例與 ESR以及CD3+、CD4+和CD8+T細胞比例與白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)和白蛋白均無相關性(P＞0.05)。

圖2 CD組和對照組T細胞和炎癥相關指標比較

圖3 T細胞與外周血炎癥指標的相關性

討 論

腸道炎癥和黏膜組織損傷是CD的重要特征，免疫因素與之密切相關，T細胞作為免疫調(diào)節(jié)的中心環(huán)節(jié)，在疾病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，參與黏膜炎癥的多種免疫反應，免疫反應不適當?shù)脑鰪娀驕p弱，將造成組織損傷或炎癥持久存在［5］。本研究發(fā)現(xiàn)，CD組CD8+T細胞比例明顯高于對照組，CD活動期CD3+、CD4+和CD8+T細胞比例均明顯高于緩解期和對照組，CD緩解期與對照組無明顯差異，提示CD患者外周血CD3+、CD4+和CD8+T細胞比例隨病情加劇而升高。檢測與CD病情嚴重程度相關的炎癥指標(白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)、ESR、CRP、白蛋白和血紅蛋白)發(fā)現(xiàn)，CD活動期ESR和CRP明顯高于對照組，白蛋白和血紅蛋白水平明顯降低，且ESR和CRP高于緩解期;緩解期白蛋白水平明顯低于對照組，而白細胞計數(shù)和血小板計數(shù)與對照組無明顯差異，提示CD病情活動時相關的炎癥指標亦出現(xiàn)改變。進一步行相關性分析發(fā)現(xiàn)，CD3+、CD4+和CD8+T細胞比例與CRP呈正相關，與血紅蛋白呈負相關，CD3+、CD4+T細胞比例與ESR呈正相關，提示T細胞比例升高與CRP、ESR呈正相關。T細胞能介導炎癥性腸病(IBD)患者腸道組織損傷，抗CD3抗體治療能明顯減少IBD患者炎癥細胞因子的生成［6］，緩解潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者的臨床癥狀［7］，改善 CD 患者內(nèi)鏡下評分［8］，提示CD3+T細胞參與IBD的發(fā)病、發(fā)展。Funderburg等［9］的研究發(fā)現(xiàn)CD4+和CD8+T細胞比例與促炎細胞因子(IL-6和IFN-α)和CRP呈正相關，且T細胞的活化與血清炎癥標記物的升高和IBD病情密切相關［10］。因此，推測CD患者腸道炎癥和黏膜組織損傷導致腸黏膜屏障受損，腸腔內(nèi)細菌毒素通過受損屏障進入腸黏膜，引起細胞因子和炎癥介質(zhì)釋放入血，從而使T細胞活化和比例升高，T細胞的失衡導致免疫反應異常，造成組織損傷或炎癥持久存在，加重病情進展［11］。

由于本研究納入的病例數(shù)較少，且部分患者入院前已在外院接受包括激素、免疫抑制劑在內(nèi)對免疫反應有影響的藥物治療，在一定程度上對本研究結(jié)果會產(chǎn)生影響，因此可能具有一定的局限性，仍需行大宗病例和多中心研究進一步證實。

1 Kaser A，Zeissig S，Blumberg RS.Inflammatory bowel disease［J］.Annu Rev Immunol，2010，28:573-621.

2 中華醫(yī)學會消化病學分會炎癥性腸病學組.炎癥性腸病診斷與治療的共識意見(2012年·廣州)［J］.中華內(nèi)科雜志，2012，51(10):818-831.

3 Silverberg MS，Satsangi J，Ahmad T，et al.Toward an integrated clinical，molecular and serological classification of inflammatory bowel disease:report of a Working Party of the 2005 Montreal World Congress of Gastroenterology［J］.Can J Gastroenterol，2005，19(Suppl A):5A-36A.

4 Harvey RF，Bradshaw JM.A simple index of Crohn’sdisease activity［J］.Lancet，1980，1(8167):514.

5 Geremia A，Biancheri P，Allan P，et al.Innate and adaptive immunity in inflammatory bowel disease［J］.Autoimmun Rev，2014，13(1):3-10.

6 Vossenk?mper A，Hundsrucker C，Page K，et al.A CD3-specific antibody reduces cytokine production and alters phosphoprotein profiles in intestinal tissues from patients with inflammatory bowel disease ［J］.Gastroenterology，2014，147(1):172-183.

7 Baumgart DC，Targan SR，Dignass AU，et al.Prospective randomized open-labelmulticenter phaseⅠ/Ⅱ dose escalation trial of visilizumab(HuM291)in severe steroidrefractory ulcerative colitis［J］.Inflamm Bowel Dis，2010，16(4):620-629.

8 van der Woude CJ，Stokkers P，van Bodegraven AA，et al.PhaseⅠ，double-blind，randomized，placebo-controlled，dose-escalation study of NI-0401(a fully human anti-CD3 monoclonal antibody)in patients with moderate to severe active Crohn’s disease［J］.Inflamm Bowel Dis，2010，16(10):1708-1716.

9 Funderburg NT，Stubblefield Park SR，Sung HC，et al.Circulating CD4(+)and CD8(+)T cells are activated in inflammatory bowel disease and are associated with plasma markers of inflammation［J］.Immunology，2013，140(1):87-97.

10 Solem CA，Loftus EV Jr，Tremaine WJ，et al.Correlation of C-reactive protein with clinical，endoscopic，histologic，and radiographic activity in inflammatory bowel disease［J］.Inflamm Bowel Dis，2005，11(8):707-712.

11 Kawashima R，Kawamura YI，Oshio T，et al.Interleukin-13 damages intestinal mucosa via TWEAK and Fn14 in mice-a pathway associated with ulcerative colitis［J］.Gastroenterology，2011，141(6):2119-2129.