飛行時間質(zhì)譜技術(shù)對慢性病患者焦慮相關(guān)蛋白質(zhì)水平的判斷價值

徐 麗 ，侯向華 ，朱 林 ，，王清馨

（1.山東濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)寧 272029；2.山西省腫瘤醫(yī)院，山西 太原 030013）

【論 著】

飛行時間質(zhì)譜技術(shù)對慢性病患者焦慮相關(guān)蛋白質(zhì)水平的判斷價值

徐 麗1，侯向華1，朱 林1，2，王清馨2

（1.山東濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)寧 272029；2.山西省腫瘤醫(yī)院，山西 太原 030013）

目的探討慢性病患者焦慮情緒的發(fā)生情況，以及在焦慮狀態(tài)下，其血清焦慮蛋白質(zhì)指紋圖譜的變化規(guī)律。方法采用便利抽樣法，選取慢性病患者和正常人設(shè)為觀察、對照組各30例。應(yīng)用焦慮自評量表、表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜技術(shù)（surface-enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometer,SELDI-TOF-MS），對2組進(jìn)行評估和檢測；根據(jù)焦慮得分和SELDI檢測結(jié)果，篩選出焦慮情緒癥狀的樣本，對心理問題進(jìn)行4周心理干預(yù)后，再評估焦慮及檢測SELDI；應(yīng)用SPSS 16.0和Biomarker Wizard 3.1，對觀察組心理干預(yù)前后、2組干預(yù)后的焦慮評分結(jié)果、焦慮蛋白質(zhì)指紋圖譜進(jìn)行比較分析。結(jié)果觀察組、對照組的焦慮得分差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.43，P＜0.01）；通過SELDI檢測得知，觀察組焦慮蛋白陽性15例，對照組焦慮蛋白陽性4例，陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=9.32，P＜0.01）；經(jīng)心理干預(yù)后，觀察組焦慮評分比干預(yù)前顯著降低（t=7.71，P＜0.01）；且該組焦慮蛋白質(zhì)指紋圖譜無陽性病例出現(xiàn)，與心理干預(yù)前陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論慢性病患者焦慮情緒的發(fā)生率相對較高，在用SELDI技術(shù)獲取的蛋白質(zhì)指紋圖譜上也會有焦慮蛋白的存在,SELDI技術(shù)也可以作為篩查慢性病患者是否存在焦慮情緒的一項客觀篩查方法。

慢性??；焦慮；SAS；蛋白質(zhì)飛行時間質(zhì)譜技術(shù)；心理干預(yù)

隨著人類疾病譜的轉(zhuǎn)變，慢性病發(fā)病率呈上升趨勢。長時間患病、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)等容易使慢性病患者產(chǎn)生焦慮、悲觀、失望、抑郁等情緒，嚴(yán)重影響著其生活質(zhì)量[1]。目前焦慮的診斷通常應(yīng)用量表評估，在量表填寫中，被試難免產(chǎn)生一定的主觀性而影響診斷的準(zhǔn)確性。王清馨等[2]應(yīng)用表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜技術(shù)（surface-enhanced laser desorption/ionization timeof-flight mass spectrometer,SELDI-TOF-MS），檢測腫瘤患者血清時發(fā)現(xiàn)了焦慮相關(guān)蛋白質(zhì)指紋圖譜，即在質(zhì)荷比（M/Z）15000~16800+H出現(xiàn)一組單峰或雙峰質(zhì)譜峰簇（cluster），豐度≥5%認(rèn)定存在焦慮蛋白，SELDI陽性，反之認(rèn)為可能不存在焦慮，SELDI陰性?；诖?，本研究采用焦慮自評量表結(jié)合SELDI技術(shù)，探討慢性病患者血清焦慮蛋白的發(fā)生變化，報道如下。

1 對象

2009年12月—2010年5月,選擇山西省腫瘤醫(yī)院的慢性病患者和正常人各30例，分別設(shè)為觀察組、對照組。觀察組：男2例，女28例；糖尿病5例，冠心病3例，慢性支氣管炎2例，腦出血2例，高血壓8例，慢性胃炎2例，支氣管哮喘2例，白內(nèi)障3例，慢性咽炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腦梗死各1例；年齡50～90（62.07±9.67）歲。 對照組：男 4 例，女 26 例；年齡 48～82（63.08±8.27）歲；2 組患者在疾病類型、年齡、文化程度、職業(yè)方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

2 研究方法

2.1 評定及檢測方法 采用Zung’s焦慮自評量表（Self-RatingAnxiety Scale,SAS）評定和 SELDI檢測。入組后，對研究對象統(tǒng)一指導(dǎo)語，進(jìn)行問卷調(diào)查。于次日抽取空腹靜脈血，應(yīng)用SELDI-TOF-MS檢測,獲得指紋圖譜。觀察組實(shí)施心理干預(yù)4周末,再次測評該2項指標(biāo)。按SAS標(biāo)準(zhǔn)分≥50分,在蛋白質(zhì)指紋圖譜中質(zhì)荷比（M/Z）15000～16800+H出現(xiàn)一組單峰或雙峰質(zhì)譜峰簇（cluster）,其最大豐度≥20%，最小豐度≥5%認(rèn)為存在焦慮,SELDI陽性;反之,認(rèn)為可能不存在焦慮,SELDI陰性。比較心理干預(yù)前后焦慮評分及SELDI檢測焦慮的變化情況,分析觀察組焦慮蛋白質(zhì)指紋變化規(guī)律。

2.1.1 焦慮自評量表 含有20個項目的自評量表，采用調(diào)查量表方式收集數(shù)據(jù)，用于評定被試者焦慮的主觀感受。標(biāo)準(zhǔn)分分值越小越好，分界值為50分。標(biāo)準(zhǔn)分≥50分為有焦慮存在，＜50分表示無焦慮存在[3]。

2.1.2 SELDI技術(shù) 即表面加強(qiáng)激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)，與CM10芯片結(jié)合以指紋的形式描述檢測結(jié)果。具體檢測方法：抽取患者清晨空腹靜脈血，進(jìn)行離心分離提取血清，將血清與CM10芯片結(jié)合放于質(zhì)譜分析儀上進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果用Biomarker Wizard 3.1自動分析在質(zhì)譜分析儀上捕捉到的蛋白質(zhì)指紋圖譜。設(shè)定焦慮蛋白質(zhì)指紋圖譜質(zhì)荷比（M/Z）15000～16800+H出現(xiàn)一組單峰或雙峰質(zhì)譜峰簇（cluster），豐度≥5%可能存在焦慮蛋白，SELDI陽性；豐度＜5%認(rèn)為可能不存在焦慮狀態(tài)，SELDI陰性[2]。

2.2 心理干預(yù) 對觀察組心理問題進(jìn)行綜合心理干預(yù)。

2.2.1 健康教育講座 組織患者及家屬進(jìn)行健康教育講座，2次/周，為其提供疾病相關(guān)知識，澄清錯誤認(rèn)知，提高認(rèn)知水平；請家屬協(xié)助轉(zhuǎn)移患者注意力；發(fā)放慢性病的宣傳手冊，引導(dǎo)閱讀并答疑。

2.2.2 指導(dǎo)進(jìn)行集體放松訓(xùn)練 行為療法與音樂療法緊密配合,由1名專業(yè)護(hù)士統(tǒng)一指導(dǎo)患者，順次對各組肌群進(jìn)行放松訓(xùn)練,配合播放安靜優(yōu)雅的音樂，最后達(dá)到全身放松的目的。放松訓(xùn)練操加聆聽、欣賞樂曲20 min，放松內(nèi)心意象 20 min，整個過程 40 min，2 次/周。

2.2.3 心理行為干預(yù) 根據(jù)患者性格、文化、年齡的不同，與其建立有效溝通，了解焦慮產(chǎn)生原因，包括對疾病的錯誤認(rèn)知、由疾病治療帶來的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)、對就醫(yī)環(huán)境的陌生以及對醫(yī)護(hù)人員的不信任等等。針對此,給予干預(yù)措施。（1）組織患者及陪人聽健康教育講座，1次/周，發(fā)放病員手冊，引導(dǎo)其閱讀并答疑。（2）增加信任感，建立良好的護(hù)患關(guān)系,給予心理支持，消除患者的陌生感。（3）利用專業(yè)知識，根據(jù)患者不同的性格、文化背景、年齡層次，用通俗易懂的語言與患者溝通。（4）進(jìn)行集體放松訓(xùn)練，如行為療法、音樂療法。由1名專業(yè)護(hù)士統(tǒng)一指導(dǎo)患者，順次放松各組肌群，配合播放輕音樂，放松全身。做放松訓(xùn)練操加聆聽音樂20 min，放松內(nèi)心意象20 min，整個過程 40 min，2 次/周。

2.3 統(tǒng)計學(xué)處理 （1）應(yīng)用SPSS 16.0分析焦慮評分,采用配對t檢驗(yàn)，樣本率的比較用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。（2）比較2組血清蛋白質(zhì)指紋圖譜數(shù)據(jù)，采用Biomarker Wizard 3.1自動分析儀內(nèi)的檢驗(yàn)方法，如t檢驗(yàn)、Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)，分析計算不同組相同質(zhì)荷比的蛋白質(zhì)含量的P值，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

3 結(jié)果

3.1 2組焦慮評分結(jié)果比較 觀察組焦慮分為（47.30±5.54）分，對照組（37.00±6.80）分，經(jīng)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.43，P＜0.01）。

3.2 2組慢性病患者樣本SELDI檢測陽性率比較通過SELDI檢測捕獲到得焦慮陽性相關(guān)蛋白質(zhì)指紋圖譜得知，觀察組焦慮蛋白陽性15例（50%），對照焦慮蛋白陽性4例，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=9.32，P＜0.01）。

3.3 干預(yù)前后觀察組SAS評分及SELDI檢測結(jié)果比較 心理干預(yù)后，觀察組的焦慮均分比干預(yù)前顯著下降（P＜0.01）；通過 SELDI檢測捕獲到得焦慮陽性相關(guān)蛋白質(zhì)指紋圖譜得知，心理干預(yù)后蛋白質(zhì)指紋圖譜陽性率明顯比干預(yù)前減少（P＜0.01）。見表1。

表1 觀察組心理干預(yù)前后焦慮評分及SELDI檢測陽性率的比較

4 討論

4.1 SELDI技術(shù)簡介 SELDI技術(shù)的全稱是SELDITOF-MS,即表面增強(qiáng)激光解析離子飛行時間（time of flight）質(zhì)譜技術(shù)，其結(jié)果是用MS（質(zhì)譜計 mass spectrometer）在一焦平面上,按被檢物質(zhì)的質(zhì)荷比（M/Z）大小,順次記錄其含量的大?。ㄘS度）進(jìn)行描述。是賽弗吉（ciphergen）公司新近推出的一種集合系列型蛋白質(zhì)芯片（Proteinchip）和激光解析電離質(zhì)譜技術(shù)相結(jié)合的檢測體液技術(shù)的蛋白質(zhì)分析平臺——蛋白質(zhì)指紋儀，其最大特征是用一組稱為Proteinchip的蛋白質(zhì)芯片，在檢測前，根據(jù)不同的蛋白質(zhì)與芯片內(nèi)容結(jié)合方式的不同,就將被檢的蛋白質(zhì)大致分類,進(jìn)行初篩,最主要的特征是可以進(jìn)行定量蛋白質(zhì)的研究。該技術(shù)曾獲2002年諾貝爾化學(xué)獎，主要結(jié)合了質(zhì)譜、層析等技術(shù)原理對樣品進(jìn)行大規(guī)模檢測,其優(yōu)勢是簡便易行，樣本用量少并可同時進(jìn)行高通量分析,可直接對粗樣本血清、組織、細(xì)胞裂解液、尿液等進(jìn)行檢測,尤其是在篩選腫瘤標(biāo)志物中[4]。蛋白質(zhì)組學(xué)能夠識別鑒定細(xì)胞、組織或機(jī)體的全部蛋白質(zhì),提供了一組蛋白質(zhì)的功能及其模式的信息,能夠反映細(xì)胞內(nèi)部的遺傳特性和外界因素的影響的結(jié)果[5]。該方法可以快速地分析各種生物樣品中蛋白質(zhì)組的組成,在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究、臨床疾病診斷以及藥物研發(fā)方面顯示出廣闊的應(yīng)用前景及臨床意義。

4.2 國內(nèi)外對患者焦慮相關(guān)蛋白表達(dá)的研究 關(guān)于患者在發(fā)生精神情緒變化時蛋白表達(dá)出現(xiàn)特異性改變的研究國內(nèi)較多，研究結(jié)果提示：冠心病患者焦慮障礙程度重者血清ox2LDL濃度增高明顯[6]；冠心病患者的CRP與抑郁的軀體性障礙和心理性障礙顯著相關(guān)[7]。Davices等[8]應(yīng)用SELDI技術(shù)，成功地從患者的腦組織和腦脊液中檢測出1種微量的Aβ1-42。德國研究人員[9]通過動物模型發(fā)現(xiàn)，glyoxalase-I（乙二醛酶-I）、enolase phosphatase是焦慮癥的蛋白質(zhì)標(biāo)記物；南非的Uys等[10]討論了神經(jīng)蛋白學(xué)與焦慮癥的相關(guān)性。精神分裂癥的基因組學(xué)研究表明，精神分裂癥患者存在基因表達(dá)的異常[11]，而蛋白質(zhì)作為基因表達(dá)的最終產(chǎn)物也發(fā)生相應(yīng)改變，并具有特征性[12]。應(yīng)用臨床蛋白組學(xué)技術(shù)篩選精神分裂癥患者血清蛋白標(biāo)志物的研究[13]也有報道。以上研究均表明精神情緒的異常有可以測量的物質(zhì)基礎(chǔ)存在。

2005年，王清馨等應(yīng)用SELDI技術(shù)，檢測腫瘤患者血清時，發(fā)現(xiàn)焦慮相關(guān)蛋白質(zhì)指紋圖譜，即在質(zhì)荷比（M/Z）15000～16800+H出現(xiàn)一組單峰或雙峰質(zhì)譜峰簇（cluster），豐度≥5%認(rèn)定存在焦慮蛋白，SELDI陽性，反之認(rèn)為可能不存在焦慮蛋白，SELDI陰性[2]。以此研究工作為基礎(chǔ)，本研究通過SAS焦慮評估量表結(jié)合SELDI技術(shù)，探討慢性患者出現(xiàn)焦慮情緒時其血清中是否也存在這種焦慮相關(guān)蛋白質(zhì)指紋圖譜。

4.3 SAS評分與SELDI技術(shù)對慢性患者焦慮情緒評估的研究 本研究結(jié)果顯示：慢性病患者的SAS評分高于全國常模[14]，同時在SAS評分高的慢性病患者血清中通過SELDI技術(shù)檢測到焦慮蛋白質(zhì)指紋圖譜，針對慢性病焦慮患者分別在心理干預(yù)前、干預(yù)后給予SAS評分和SELDI檢測，結(jié)果表明：經(jīng)心理干預(yù)后，慢性病焦慮患者的SAS評分結(jié)果及SELDI檢測陽性較心理干預(yù)前顯著下降。

本研究在慢性病患者SAS評分結(jié)果顯示，有焦慮情緒時血清中捕獲到蛋白質(zhì)指紋圖譜，在質(zhì)荷比（M/Z）15000~16800+H出現(xiàn)一組單峰或雙峰質(zhì)譜峰簇（cluster），豐度≥5%，經(jīng)心理干預(yù)后，再次檢測此峰簇消失。SAS評分結(jié)果顯示，患者無焦慮情緒時，其在血清中未檢測到蛋白質(zhì)指紋圖譜，在質(zhì)荷比（M/Z）15000～16800+H 無任何峰簇出現(xiàn)， 豐度＜5%，符合王清馨等[2]報道的焦慮蛋白質(zhì)指紋圖譜的變化。而正常人無焦慮情緒時，血清中捕獲到得蛋白質(zhì)指紋圖譜無任何變化。由此可知，慢性病患者存在焦慮情緒時，血清中也會有焦慮蛋白質(zhì)指紋圖譜的存在，提示SELDI技術(shù)也可以作為篩查患者是否存在焦慮情緒的一項客觀的、輔助篩查方法。

5 小結(jié)

本研究應(yīng)用SAS評估及SELDI技術(shù)開展對30例慢性病患者焦慮情緒變化的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，慢性病患者焦慮情緒存在時，其血清中同樣出現(xiàn)焦慮相關(guān)蛋白質(zhì)指紋峰簇。因本研究需取得研究對象同意進(jìn)行抽血檢測，研究經(jīng)費(fèi)有限，故研究樣本少，為了這項技術(shù)對診斷焦慮癥更加客觀和準(zhǔn)確，將來還需要加大樣本進(jìn)一步研究探討。

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Judgment Value of SELDI on Related Anxiety Protein Level for Patients with Chronic Diseases

XU Li1,HOU Xiang-hua1,ZHU Lin1,2,WANG Qing-xin2
(1.Affiliated Hospital of Jining Medical College,Jining 272029,China；2.Shanxi Tumor Hospital,Taiyuan 030013,China)

ObjectiveTo explore the incidence of anxiety of patients with chronic disease and the variation of the serum proteins fingerprints spectrum when patients with anxiety.MethodsWith random sampling,30 cases of patients with chronic diseases and another 30 healthy persons were divided into observation group and control group.All the research object were assessed by self-rating anxiety scale(SAS)and their sera were detected utilizing SELDI-TOF-MS(surface-enhanced laser desorption/ionization time-offlight mass spectrometer).According to the results of SAS and SELDI test,we conducted psychological intervention for the existing mental health problems for four weeks, then tested SAS and SELDI for another time. The variation of SAS scores and SELDI fingerprints spectrum on F-B psychological intervention were observed and compared. 16.0 SPSS and Biomarker Wizard 3.1 were applied to analyze the result of SAS and protein fingerprints spectrum on two groups respectively.ResultsAnxiety scores in both groups indicated statistical significance(t=6.43，P＜0.01)and SELDI detection showed that there were 15 positive cases in observation group and 4 in control group,which was statistically significant by χ2test(P＜0.01).After the psychological intervention,the SAS graded down to 33.73±7.887 and no case with positive was found in observation group.The rate of patients with positive anxiety protein fingerprints spectrum before and after psychological intervention revealed statistical significance(P<0.01).ConclusionThere is relatively high incidence of anxiety among patients with chronic disease.We can find the related anxiety protein in the protein fingerprint acquisition using SELDI technology and the SELDI can also be used as a objective screening method for screening the existence of anxiety among patients with chronic diseases.

chronic disease;anxiety disorders;SAS;SELDI;psychological intervention

R395.6；R47

A

10.16460/j.issn1008-9969.2015.18.001

2015-04-29

濟(jì)寧市科技局課題（濟(jì)科字2011-57號）

徐 麗（1963-），女，山東濟(jì)寧人，本科學(xué)歷，主任護(hù)師。

朱 林（1986-），女，山東泰安人，碩士，護(hù)師。

陳伶俐]