李美芳 蔣正強(qiáng)

角蛋白17在角化棘皮瘤及皮膚鱗癌中的表達(dá)差異研究

李美芳 蔣正強(qiáng)

角化棘皮瘤（KA）是一種伴有明顯角化的上皮良性增生性病變，可自愈。在臨床及組織病理學(xué)上易與皮膚鱗癌（SCC）相混淆。筆者通過(guò)組織病理學(xué)檢查方法研究角蛋白17（K17）在KA及SCC細(xì)胞中的表達(dá)情況，探討兩者的異同，以期為臨床診治KA及SCC提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取本院皮膚科2005年1月至2015年12月經(jīng)病理學(xué)檢查確診為KA或SCC患者共57例。KA患者18例（生長(zhǎng)期12例，靜止期6例），男10例，女8例，年齡47～89（64.23±5.24）歲；病程1～16（6.62± 7.31）個(gè)月；均表現(xiàn)為獨(dú)立的結(jié)節(jié)，直徑約1～3cm，皮損部位：頭面部15例、手背部3例。SCC患者39例，男24例，女15例，年齡46～89（66.18±10.17）歲；病程2～84（19.35±24.68）個(gè)月；均為高分化鱗癌，表現(xiàn)為結(jié)節(jié)、潰瘍，直徑約2～4.5cm，皮損部位：頭面部24例、頸部4例、手背部5例、小腿3例、足部3例；其中角化棘皮瘤樣鱗癌（SCC-KA）4例。兩組患者性別、年齡比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 鼠抗人K17及生物素標(biāo)記的羊抗鼠二抗均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；DAB試劑盒購(gòu)于美國(guó)賽默飛世爾科技公司。分別取各例患者皮損組織標(biāo)本石蠟切片（厚4～5μm），常規(guī)脫蠟至水，3%過(guò)氧化氫滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，胰酶消化15min修復(fù)抗原，10%羊血清室溫孵育10min，滴加稀釋的一抗（1∶100）4℃過(guò)夜，PBS沖冼后滴加稀釋的生物素標(biāo)記二抗（1∶200，1%BSA-PBS稀釋），室溫孵育30min，PBS沖洗后滴加適當(dāng)比例（1∶100）稀釋的ABC kit（Vector）孵育30min，抗辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的DAB顯色。蘇木素復(fù)染、封片后顯微鏡下觀察并掃描，圖像分析、拍照。同時(shí)取10例外傷手術(shù)患者的正常皮膚作為陰性對(duì)照，取10例尋常型銀屑病皮損作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 參照許良中等[1]方法，綜合考慮切片中腫瘤組織陽(yáng)性細(xì)胞著色（細(xì)胞質(zhì)內(nèi)染色）強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞占所觀察同類細(xì)胞的百分比這兩項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)，半定量判定結(jié)果。（1）根據(jù)細(xì)胞著色程度判定陽(yáng)性強(qiáng)度，分為4級(jí)：無(wú)著色為陰性，計(jì)0分；淡黃色為弱陽(yáng)性，計(jì)1分；棕黃色為中度陽(yáng)性，計(jì)2分；棕褐色為強(qiáng)陽(yáng)性，計(jì)3分。（2）根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占所觀察的同類細(xì)胞的百分比，分為4級(jí)：陽(yáng)性細(xì)胞≤2%為個(gè)別，計(jì)0分；陽(yáng)性細(xì)胞3%～20%為少量，計(jì)1分；陽(yáng)性細(xì)胞21%～60%為中量，計(jì)2分；陽(yáng)性細(xì)胞＞60%為大量，計(jì)3分。綜合評(píng)價(jià)值以兩類計(jì)分分值的乘積表示，0～3分為陰性，4分為弱陽(yáng)性，6分為陽(yáng)性，9分為強(qiáng)陽(yáng)性。

2 結(jié)果

12例生長(zhǎng)期KA患者K17呈陽(yáng)性表達(dá)2例（16.67%），呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)10例（83.33%）；6例靜止期KA患者K17呈陰性表達(dá)4例（66.67%），呈弱陽(yáng)性表達(dá)2例（33.33%）。4例SCC-KA患者K17均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；其余35例SCC患者K17呈陽(yáng)性表達(dá)26例（74.29%），呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)9例（25.71%）。

3 討論

角蛋白是構(gòu)成細(xì)胞骨架的中間絲家族成員之一，是表皮及毛發(fā)角質(zhì)形成細(xì)胞的主要結(jié)構(gòu)蛋白，也是角質(zhì)形成細(xì)胞和其他上皮細(xì)胞的標(biāo)志性成份。K17屬于I型角蛋白，主要分布在汗腺的基底細(xì)胞和深部外毛根鞘等處，在正常表皮無(wú)表達(dá)，在表皮角質(zhì)形成細(xì)胞出現(xiàn)異常增殖、分化時(shí)可出現(xiàn)異常表達(dá)[2]。

KA一般被認(rèn)為起源于毛囊，可能是毛囊角化上皮呈假上皮腫瘤樣增生的表現(xiàn)，發(fā)展分三個(gè)階段∶生長(zhǎng)期、靜止期、自然消退期[3]。其開(kāi)始表現(xiàn)為紅色丘疹或半球形結(jié)節(jié)狀皮疹,生長(zhǎng)期及靜止期可呈火山口樣潰瘍，生長(zhǎng)期增長(zhǎng)迅速，經(jīng)46周左右逐漸消退，皮損表現(xiàn)為動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程。SCC系起源于表皮或附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞的一種惡性腫瘤，生長(zhǎng)相對(duì)較慢，不會(huì)消退，可發(fā)生破壞和轉(zhuǎn)移；SCC-KA是屬于高分化SCC的一種特殊亞型，組織病理類似于KA，但具有浸潤(rùn)侵襲性，可發(fā)生轉(zhuǎn)移。KA與高分化SCC尤其是SCC-KA在臨床上極為相似，有時(shí)甚至通過(guò)組織病理也很難鑒別。本研究發(fā)現(xiàn)，K17在生長(zhǎng)期KA及高分化SCC患者中全部呈陽(yáng)性表達(dá)，這可能說(shuō)明K17是角質(zhì)形成細(xì)胞增殖分化的標(biāo)志性分子，與皮膚過(guò)度增生有關(guān)。在生長(zhǎng)期KA及SCC-KA患者中K17以強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)為主，而其他高分化SCC患者中K17以陽(yáng)性表達(dá)為主，這可能與生長(zhǎng)期KA及SCC-KA的腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)速度較快有關(guān)。

Misago等[4]發(fā)現(xiàn)，K17在生長(zhǎng)期KA細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)，但在自然消退期或退行性皮損中不表達(dá)。筆者觀察發(fā)現(xiàn)，KA患者靜止期K17表達(dá)明顯減弱，大部分患者呈陰性表達(dá)，小部分呈弱陽(yáng)性表達(dá)，這說(shuō)明KA在靜止期細(xì)胞增殖停止，這一表達(dá)特點(diǎn)與高分化SCC包括SCC-KA持續(xù)表達(dá)不同。因此臨床對(duì)KA與SCC鑒別困難時(shí)，可持續(xù)監(jiān)測(cè)K17的表達(dá)，如K17表達(dá)強(qiáng)度減弱或不表達(dá)，可能更支持KA的診斷。

[1] 許良中,楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國(guó)癌癥雜志, 1996,6(4):229-231.

[2] Marble D J,Gordon K B,Nickoloff B J.Targeting TNFalpha rapidly reduces density of dendritic cells and macrophages in psofiatic plaques with restoration of epidermal keratinocyte differentiation [J].J DermatolSci,2007,48(2):87-101.

[3] 趙辨.中國(guó)臨床皮膚病學(xué)[M].江蘇:科學(xué)技術(shù)出版社,2010:1526-1527.

[4] Misago N,Takai T,Toda S J,et al.The changes in the expression levels of follicular markers in keratoacanthoma depend on the stage:keratoacanthoma is a follicular neoplasm exhibiting infundibular/isthmic differentiation without expression of CK15[J]. JournalofCutaneous Pathology,2014,41(5):437-446.

2016-01-12）

（本文編輯：李媚）

317016 臨海市第二人民醫(yī)院皮膚科

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