楊增艷

廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)藥研究院，廣西　南寧　530000

?

中藥單體抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)研究概況

楊增艷

廣西壯族自治區(qū)民族醫(yī)藥研究院，廣西南寧530000

【摘要】肝纖維化是指肝細(xì)胞發(fā)生壞死或炎癥刺激時，由于肝臟中細(xì)胞外基質(zhì)的增生與降解失去平衡，導(dǎo)致肝臟內(nèi)纖維結(jié)締組織異常沉積的病理過程。對于肝纖維化的治療，中醫(yī)藥臨床療效較好。隨著相關(guān)研究的不斷深入，應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)，針對肝纖維化作用機(jī)理的研究也不斷增加。筆者從細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)研究、細(xì)胞外基質(zhì)研究、細(xì)胞因子、生化指標(biāo)方面對中藥單體抗肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展予以綜述。

【關(guān)鍵詞】肝纖維化；中藥；單體；實(shí)驗(yàn)研究

肝纖維化(hepatic fibrosis)是因乙肝、丙肝等肝炎病毒的持續(xù)感染或其他化學(xué)物質(zhì)、血吸蟲等因素引起的肝臟纖維組織彌漫性增生，是慢性肝炎向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段。隨著對肝纖維化研究的不斷深入，國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為，肝纖維化的形成與肝臟的實(shí)質(zhì)細(xì)胞、非實(shí)質(zhì)細(xì)胞及炎癥細(xì)胞等密切相關(guān)。由于多種致病因子的作用激活了肝星狀細(xì)胞(HSC)使之轉(zhuǎn)化成肌成纖維細(xì)胞，同時大量合成膠原等細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)，從而造成ECM過度沉積，最終導(dǎo)致肝纖維化的發(fā)生。

中醫(yī)藥治療肝纖維化在臨床取得了確切的療效，引起國內(nèi)外學(xué)者越來越多的關(guān)注。文獻(xiàn)資料表明，抗肝纖維化研究較多的單味中藥有三七[1]、丹參、丹皮、赤芍、當(dāng)歸、土鱉、桃仁、葉下珠、溪黃草、黃芪、排錢草、黃根等；中藥復(fù)方有復(fù)肝寧、甲乙煎、揉肝抑纖飲、肝心寧等。上述研究，部分已在藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上，對其抗肝纖維化活性部位成份及其作用機(jī)制進(jìn)行研究，但對中藥單體或從中藥中提取出的有效成分的研究不多。近年來，應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)來研究抗肝纖維化的作用機(jī)制較多，集中在細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)研究、細(xì)胞外基質(zhì)研究、細(xì)胞因子研究三個方面[2]，而對與肝纖維化相關(guān)的血液生化指標(biāo)及肝組織病理變化的觀測也是研究的熱點(diǎn)。本文擬圍繞以上四個方面的研究，就中藥單體抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)研究作一綜述。

1細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)的研究

肝星狀細(xì)胞在肝纖維化發(fā)展變化過程中發(fā)揮著重要的作用，活化后的肝星狀細(xì)胞不僅合成膠原能力增強(qiáng)，而且也是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和組織抑制因子(TMPs)的主要來源。TMPs是抑制MMPs的一組多功能因子。在肝纖維化動物模型中，TMP-1表達(dá)水平增加而MMP表達(dá)會相應(yīng)減少，當(dāng)兩者平衡失調(diào)，纖維型膠原將發(fā)生沉積，導(dǎo)致肝纖維化程度加重。

趙東強(qiáng)等[3]在體外培養(yǎng)HSC的基礎(chǔ)上，采用MTT法、透射電鏡、流式細(xì)胞術(shù)及Tunel技術(shù)進(jìn)行觀測，發(fā)現(xiàn)丹參單體IH764-3具有抑制HSC增殖與促進(jìn)HSC凋亡的作用。

熊果酸是一種廣泛存在于多種藥用植物的中藥單體，申氏等[4]通過體外誘導(dǎo)活化型HSC-T6細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)熊果酸抑制HSC-T6增殖，其誘導(dǎo)HSC-T6細(xì)胞凋亡可能與降低Bcl2/Bax比值，激活caspase3蛋白有關(guān)。

蘭天等[5]采用轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)刺激人肝星狀細(xì)胞株(LX-2)誘導(dǎo)肝纖維化細(xì)胞模型，通過虎杖苷進(jìn)行干預(yù)，利用Western blot法檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)虎杖苷能顯著抑制TGF-β1誘導(dǎo)的LX-2細(xì)胞α-SMA的表達(dá)。

劉麗等[6]應(yīng)用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，觀察丹參單體H764-3對鼠肝星狀細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制因子表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)丹參單體H764-3干預(yù)MMP-13mRNA的表達(dá)強(qiáng)度明顯上調(diào)，同時TMP-1mRNA表達(dá)受到抑制。

川芎嗪是從傘形科植物川芎的根莖提取出來的有效成分，別名四甲基吡嗪。川芎嗪抑制HSC的增殖，減少Collagen-I 的合成從而具有抗肝纖維化作用[7]。

2細(xì)胞外基質(zhì)的研究

在正常狀態(tài)下，肝內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)的各成分按一定的比例合成和分解，處于動態(tài)平衡的過程。肝纖維化發(fā)生后，這種平衡被打破，細(xì)胞外基質(zhì)的合成大于降解，便會在肝內(nèi)大量沉積?？梢哉f細(xì)胞外基質(zhì)來源于其產(chǎn)生細(xì)胞，而大量沉積又對細(xì)胞產(chǎn)生重要的影響，其作用的過程既復(fù)雜又相互影響。

武氏[8]等通過CCL4復(fù)制大鼠肝纖維化模型，發(fā)現(xiàn)三七皂苷單體Rg1、Rb1除可減少狄氏間隙內(nèi)的膠原纖維及貯脂細(xì)胞增生外，還能明顯抑制血清ALT活性及HA、PCⅢ水平，具有抗肝纖維化的作用。

段氏等[9]四氯化碳造模的同時給予三七總皂苷單體Rbl，檢測肝功能、血清Ⅲ型前膠原、透明質(zhì)酸、層粘蛋白等指標(biāo)的變化，并觀察肝纖維病理變化。發(fā)現(xiàn)三七總皂苷能改善肝纖維化大鼠的肝功能，降低血清 PCⅢ、 HA、 LN含量，明顯減輕肝組織膠原的沉積，改善肝纖維化程度；而人參皂苷 Rbl不能改善肝纖維化程度。

3細(xì)胞因子的研究

轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)具有促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞分化和增殖，增加細(xì)胞外間質(zhì)的沉積、抑制其降解的作用，被認(rèn)為是肝纖維化形成過程中的一個重要的調(diào)控因子。肝臟在正常狀況下TGF-β1的表達(dá)較少，而損傷后其表達(dá)會顯著增加。

丹酚酸B是從丹參中提取出的水溶性活性成分，丹酚酸可抑制由轉(zhuǎn)化生長因子刺激誘導(dǎo)HSC的增殖和活化[10]，此外，丹酚酸還可下調(diào)TNF-α水平，減輕肝組織炎癥程度，保護(hù)肝臟細(xì)胞不受破壞[11]。

姜黃素是一種黃色的酸性酚類物質(zhì)，可從姜科姜黃屬植物姜黃中提取。姜黃素能夠作用于瘦素，從而抑制血小板衍化生長因子(PDGF)、血管生長因子(VEGF)等因子的表達(dá)，并對活化的HSC具有抑制作用[12]。其可通過抑制NF-κB依賴性TNF-α、單核細(xì)胞趨化蛋白-1、COX-2 等基因表達(dá)，阻止炎癥因子誘導(dǎo)的肝臟炎癥性損傷，從而阻止肝纖維化的發(fā)生與發(fā)展[13]。

芍藥苷是主要從毛莨科植物芍藥中提取出的活性成分，具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。從芍藥苷的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析，因其分子中含多個酚羥基，可清除自由基活性，抗氧化作用使其可促進(jìn)肝細(xì)胞再生從而實(shí)現(xiàn)抗肝纖維化作用[14]。聞氏[15]采用放免法、RT-PCR法、Western-blotting法和免疫組化法分別觀測血清及肝組織中TNF-α轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)芍藥苷可顯著降低血清及mRNA水平的TNF-α表達(dá)；而在Western-blotting法和免疫組化法中，僅在Ⅰ組和Ⅲ組，芍藥苷明顯降低TNF-α的含量。

4其他生化指標(biāo)研究

慢性肝病發(fā)生病變后，血清ALT、AST、HA、LN及肝組織中MDA、SOD等指標(biāo)與肝病的嚴(yán)重程度呈現(xiàn)相關(guān)性。隨著病情的加重，此類肝纖維化指標(biāo)亦隨著發(fā)生變化。通過觀測這些指標(biāo)的改變情況，可以了解受試物的抗肝纖維化作用。杜仲多糖能抑制血清HA、LN水平的升高，降低肝纖維織中MDA水平和SOD、GSH-Px活性，提示杜仲多糖能提高肝組織的抗氧化酶活性，抑制自由基產(chǎn)生，緩解肝臟損傷，從而達(dá)到抗肝纖維化作用[16]。

同為多糖類成分，朱氏[17]通過觀察狗肝菜多糖對二甲基亞硝胺誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化作用，發(fā)現(xiàn)狗肝菜多糖也可以降低血清中ALT、AST、TBIL等水平，其抗肝纖維化作用可能與保肝降酶有關(guān)。

苦參堿是從中藥苦豆子或苦參中提取出來的一種生物堿，楊文卓等[18]通過半乳糖胺誘導(dǎo)方式復(fù)制肝纖維化模型，觀察氧化苦參堿干預(yù)前后肝指數(shù)、血及肝組織生化、羥脯氨酸含量、TGβmRNA表達(dá)水平、電鏡及病理組織學(xué)改變，結(jié)果提示，氧化苦參堿可降低大鼠ALT、AST、TGFβ1水平，降低肝組織羥脯氨酸含量；提高肝組織內(nèi)SOD、GST-PX水平，給藥各組desmin及α-SMA水平的明顯低于模型組。而宋健等[19]采用CCL4制備肝纖維化模型，發(fā)現(xiàn)苦參素可顯著改善肝功能，降低PC-Ⅲ、LN、HA水平，組織學(xué)檢查也顯示具有抗肝纖維化作用。

無論在肝星狀細(xì)胞激活、凋亡或者細(xì)胞外基質(zhì)大量合成與沉積過程中，均與黏附分子密切相關(guān)。而E-鈣粘附素作為黏附分子中的重要一員，在不同階段肝纖維化大鼠肝組織均有表達(dá)，且隨著纖維化程度的加重而表達(dá)增強(qiáng)，在肝纖維化發(fā)展變化中的作用越來越受到關(guān)注。萬榮等[20]通過研究E-鈣粘附素在不同肝纖維化階段的表達(dá)情況以及在抗肝纖維化中藥單體白黎蘆醇干預(yù)下表達(dá)的變化發(fā)現(xiàn)，白黎蘆醇可以明顯改善大鼠肝纖維化程度，并減少E-鈣粘附素 mRNA水平。

?；撬崾菑闹兴幣｜S中提取出來的有效成分，對細(xì)胞具有保護(hù)作用。?；撬釤o論是對由牛血清白蛋白靜脈注射復(fù)制的大鼠肝纖維化模型[21]，還是對由CCL4誘導(dǎo)的肝纖維化模型[22]，均可改善大鼠肝組織中的病理變化，提示其具有抗肝纖維化作用。

5結(jié)語

中藥防治肝纖維化具有獨(dú)特優(yōu)勢，針對肝纖維化發(fā)生的多個環(huán)節(jié)進(jìn)行抗肝纖維化研究取得很大的進(jìn)展，中藥單體在抗肝纖維化作用機(jī)制研究方面也呈現(xiàn)出多方向、多層次展開的局面。就目前研究現(xiàn)狀來看，多集中在細(xì)胞學(xué)、細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)胞因子的研究，而對肝的再生及調(diào)節(jié)方面研究較少。肝細(xì)胞是高度分化而較少分裂的一類細(xì)胞，但仍保留著增殖的功能[2]。當(dāng)發(fā)生肝纖維化時，占絕對多數(shù)的肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞并不能健康有序地增殖，而是被非實(shí)質(zhì)細(xì)胞代償性增生所替代。所以，找到科學(xué)有效的措施和手段讓肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞能健康有序地增殖應(yīng)該成為中藥單體抗肝纖維化實(shí)驗(yàn)研究的重點(diǎn)之一，也應(yīng)得到更多的關(guān)注和重視。

目前，對于肝纖維化的機(jī)制研究已經(jīng)從原來的病理組織學(xué)研究發(fā)展到細(xì)胞學(xué)、細(xì)胞因子及其分子水平的研究，研究對象也從中藥提取物、有效部位發(fā)展到有效成分甚至單體。研究不斷深入的同時，不能忽視中醫(yī)整體辨證論治理論的指導(dǎo)，否則，中藥單體抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究就將成為中藥的去中藥化研究。

參考文獻(xiàn)

[1]張榮華,周子成.三七蟲草菌絲對實(shí)驗(yàn)性肝纖維化預(yù)防作用的研究[J].中成藥,2003,25(3):222.

[2]程明亮,楊長青.肝纖維化基礎(chǔ)研究及臨床[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2002:20.

[3]趙東強(qiáng),姜慧卿,修賀明,等.丹參單體IH764-3對肝星狀細(xì)胞增殖或凋亡的影響[J].中華肝臟病雜志，2002,10(4):265.

[4]申月明,朱萱,張昆和,等.熊果酸對肝星狀細(xì)胞增殖與凋亡的影響[J].中華肝臟病雜志，2008,16：298.

[5]蘭天,勾紅菊,吳騰,等.虎杖苷抑制肝星狀細(xì)胞活性研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013,9(8):39.

[6]劉麗,姜慧卿,張曉嵐,等.丹參單體H764-3促進(jìn)H2O2刺激的鼠肝星狀細(xì)胞膠原降解[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2006,26(7):724.

[7]Tang Y, Zheng S, Chen A. Curcumin eliminates leptin’seffects on hepatic stellate cell activation via interruptingleptin signaling [J]. Endocrinology, 2009, 150(7):3011.

[8]武凡,張樹三,康格非,等.三七皂苷對肝纖維化大鼠分泌型磷酯酶A2和腫瘤壞死因子表達(dá)的影響[J].中華肝臟病雜志，2003,11(1):51.

[9]段麗平,馬嵐青,李樹安,等.人參皂苷Rbl抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2007,17(3):156.

[10]王海南,胡義楊,紅嘉禾,等.丹參酚酸-B對肝星狀細(xì)胞增殖與 TGF-beta1 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響[J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2002, 82(18): 1267.

[11]Lin Y L, Wu C H. In vitro protective effects of salvianolicacid B on primary hepatocytes and hepatic stellate cells[J]. Ethnopharmacology, 2006, 105(1/2): 215.

[12]Tang Y, Chen A. Curcumin protects hepatic stellate cellsagainst leptin-induced activation in vitro by accumulatingintracellular lipids [J]. Endocrinology, 2010, 151(9):4168.

[13]Nanji A A, Jokelainen K, Tipoe G L, et al. Curcuminprevents alcohol-induced liver disease in rats by inhibitingthe expression of NF-kappa B dependent genes [J]. Am JPhysiol Gastrointest Liver Physiol, 2003, 284: 321.

[14]Qu H D，Yah H C，Zhu X H，at a1． Antidepressant effects ofpaeoniflorin in behavioral models of depression (abstract) [J]． Neumscienee Bulletin，2007，(123supl)1: 314．

[15]聞慧琴,羅慶禮.芍藥苷對血吸蟲肝纖維化小鼠腫瘤壞死因子α基因及蛋白水平的影響[J].中國藥業(yè)，2013,22(22):36.

[16]周程艷,艾凌艷,王美,等.杜仲多糖抗肝纖維化作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中草藥，2011,42(2):324.

[17]朱華,陳力鋒,張可鋒.狗肝菜多糖的抗肝纖維化研究[J].華西藥學(xué)雜志,2012,27(6):634.

[18]楊文卓,曾民德,范竹萍,等.氧化苦參堿防治半乳糖誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華肝臟病雜志,2002,10(3):193.

[19]宋健,鐘惠閩,姚平.苦參素對實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化的防治作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2002,10(5):282.

[20]萬榮,伍建業(yè),劉珺,等.白黎蘆醇對肝纖維化大鼠肝組織E-鈣粘附素表達(dá)的干預(yù)作用[J].實(shí)用肝臟病雜志，2009,12(5)：335.

[21]李寶剛,李繼堯,梁惠云,等.牛磺酸對試驗(yàn)性大鼠肝纖維化的預(yù)防作用[J].北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1998，30(1)：333.

[22]陳岳祥，李石，張興榮，等.牛磺酸對四氯化碳誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的抑制作用[J].中華消化雜志，1999，19(3)：185-187.

作者簡介：楊增艷，男，壯族，廣西南寧市人，副主任藥師，碩士研究生。研究方向：中藥、民族藥的研究與開發(fā)工作。

【中圖分類號】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)11-0026-02

(收稿日期：2016.04.12)