伍曉紅，聶 婉，陳秋玲，周 柳，王琤韋華*（江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，南昌 330013）

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液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法對鹽酸克倫特羅殘留檢測的研究進(jìn)展

伍曉紅，聶 婉，陳秋玲，周 柳，王琤韋華*
（江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，南昌 330013）

摘 要：液相色譜系統(tǒng)與質(zhì)譜系統(tǒng)進(jìn)行聯(lián)用對鹽酸克倫特羅檢驗(yàn)的手段已經(jīng)逐漸普及，同時(shí)更先進(jìn)的串聯(lián)檢測系統(tǒng)正不斷發(fā)展。該文特對此現(xiàn)狀，就液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法對鹽酸克倫特羅殘留檢測的研究進(jìn)展作一概述。

關(guān)鍵詞：液相色譜；質(zhì)譜；鹽酸克倫特羅

鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CL）俗稱“瘦肉精”是β-興奮劑的一種，由于對支氣管平滑肌的擴(kuò)張作用顯著，在醫(yī)學(xué)上作為一種平喘藥被應(yīng)用。后人們發(fā)現(xiàn)將其添加于飼料、飲水中被豬攝入會(huì)顯著提高其胴體瘦肉率，而人進(jìn)食含CL的畜產(chǎn)品后會(huì)產(chǎn)生嘔吐、抽搐、發(fā)燒等中毒癥狀。由于誤食CL導(dǎo)致的食物中毒事件影響惡劣，我國明令禁止將CL飼喂于豬。在目前開發(fā)出的多種針對CL的檢測方法中，作為常規(guī)檢測手段的液相色譜法（LC）已十分成熟，并常與質(zhì)譜法（MS）聯(lián)用以進(jìn)行更精確的測定。本文總結(jié)了其他學(xué)者建立的鹽酸克倫特羅液質(zhì)聯(lián)用檢測方法，并對現(xiàn)有相關(guān)的檢測手段作一論述。

1 液相色譜法與質(zhì)譜法的基本原理

1.1 液相色譜法

LC根據(jù)色譜柱的原理，將待分離的混合物由流動(dòng)相（液體部分）帶入色譜柱，根據(jù)混合物中各組分對固定相（固定部分）和流動(dòng)相的親和力不同，使之在經(jīng)過色譜柱時(shí)呈現(xiàn)不同的移動(dòng)帶，從而實(shí)現(xiàn)各組分的分離。根據(jù)固定相的類型，可將LC分為柱色譜法、紙色譜法、薄層色譜法；根據(jù)吸附力不同，可分為離子交換色譜、吸附色譜、分配色譜、凝膠滲透色譜。傳統(tǒng)的LC不能分析熱不穩(wěn)定的物質(zhì)和金屬鹽類，而目前普遍采用的、通過加載高壓液流系統(tǒng)而建立的高效液相色譜法（HPLC）則可以克服這一缺點(diǎn)。

1.2 質(zhì)譜法（MS）

MS是在待測物中各組分進(jìn)行電離形成離子束后，使離子束經(jīng)過加速電場進(jìn)入質(zhì)量分析器，依據(jù)離子的荷質(zhì)比不同而導(dǎo)致不同的偏轉(zhuǎn)程度后發(fā)生聚焦，最后根據(jù)聚焦點(diǎn)得到的質(zhì)譜圖而推算待測物的質(zhì)量。MS能對純化后的物質(zhì)進(jìn)行高效的定性分析，但難以定量分析復(fù)雜的有機(jī)化合物，而色譜法雖難以對其進(jìn)行定性分析，但可以對混合物進(jìn)行分離和定量分析。因此MS常與LC進(jìn)行聯(lián)用，二者結(jié)合互補(bǔ)優(yōu)劣勢，以得到更精確的檢測結(jié)果。

2 液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用的檢測方法

2.1 液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）

LC-MS是將液相色譜儀與質(zhì)譜儀聯(lián)用而建立的檢測方法，兼?zhèn)湟合嗌V有效分離物質(zhì)和質(zhì)譜高效鑒定組分的優(yōu)點(diǎn)，可以得到具有較強(qiáng)特征性的離子碎片，但存在分離效率較低的缺點(diǎn)，因此目前在與質(zhì)譜儀聯(lián)用時(shí)，更多地將高效液相色譜儀代替液相色譜儀。

2.2 高效液相色譜-質(zhì)譜法（HPLC-MS）

HPLC-MS是將LC-MS中的色譜柱改進(jìn)為高壓色譜柱的檢測方法。利用高壓形成的高速流動(dòng)相能大幅提高分離效率，有效分離LC-MS無法分離的熱不穩(wěn)定物質(zhì)。夏雙梅采用HPLC-MS對豬肉、豬肝、豬尿樣本進(jìn)行檢測時(shí)，在重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)中相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）＜1.5%。陳海玲等對豬尿中的CL和萊克多巴胺同時(shí)進(jìn)行檢測時(shí)，向尿樣分別加入1.00 mL 濃度為5.0、10.0和50.0 μg·kg-1的CL和萊克多巴胺混合標(biāo)液，平均回收率分別達(dá)到76.2%和77.4%。吳慶潔等建立的固相萃取前處理方法提高了HPLC-MS的前處理效率，且可以同時(shí)檢測豬肉中土霉素、金霉素、四環(huán)素、氯霉素和CL。

2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LCMS/MS）

LC-MS/MS是在LC-MS的基礎(chǔ)上進(jìn)一步串聯(lián)MS系統(tǒng)的一種檢測方法，將在LC-MS系統(tǒng)中待測物裂解的離子碎片轉(zhuǎn)入MS系統(tǒng)進(jìn)一步裂解，使最終得到的質(zhì)譜結(jié)果更精確。葉培等對豬肉中包括CL在內(nèi)的28種β2-受體激動(dòng)劑進(jìn)行檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)，LC-MS/ MS在2.5～25 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，目標(biāo)檢測物出峰附近不存在干擾測定的雜質(zhì)峰，特異性較強(qiáng)[1]。劉佳等通過將前處理步驟中改用MCX固相萃取柱，并將使用的提取液改進(jìn)為正丁醇：甲基叔丁基醚（6∶4），將檢測時(shí)間縮短至15 min[2]。王旭峰等同時(shí)檢測包括CL在內(nèi)的23種違禁藥物時(shí)，日內(nèi)RSD為1.0%～8.6%，日間RSD＜4.7%～18%[3]。

2.4 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）

HPLC-MS/MS是由HPLC-MS系統(tǒng)串聯(lián)MS系統(tǒng)而建立的檢測方法，兼?zhèn)銱PLC的高效分離優(yōu)點(diǎn)和LCMS/MS的精確定性檢測的優(yōu)點(diǎn)。張罡等應(yīng)用HPLC-MS/MS對停止飼喂CL 32 d后的豬的毛發(fā)中CL殘留進(jìn)行檢查時(shí)，仍能檢出CL，殘留量為87 μg/kg，檢測時(shí)在0.1～1 000 ng/ mL的樣本濃度的線性方程內(nèi)相關(guān)系數(shù)均大于0.99[4]。周煒等對豬尿中23種受體激動(dòng)劑同時(shí)進(jìn)行檢測時(shí)，分離效果較好，峰形理想，加標(biāo)平均回收率為68%～115%，批間RSD為0.6%～14.1%[5]。

2.5 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）

UPLC-MS/MS是在HPLC-MS/ MS的基礎(chǔ)上將色譜柱中的固定相改進(jìn)為小顆粒、高性能的微粒，再配合使用超高壓輸液泵，將分離速度、靈敏度和分離效果分別提高9倍、3倍和1.7倍。李丹妮等在研究用UPLC-MS/ MS檢測16種受動(dòng)劑時(shí)，發(fā)現(xiàn)選擇乙腈∶0.1 % 甲酸（20∶80）作為流動(dòng)相時(shí)，甲酸濃度在0.1%以上時(shí)會(huì)產(chǎn)生離子抑制，導(dǎo)致檢測的靈敏度降低。李瑩瑩等同時(shí)測定豬肉中包含CL的7種受動(dòng)劑，采用2 mL甲酸甲醇洗脫時(shí)，運(yùn)行12 min后即獲得較滿意的結(jié)果。加標(biāo)1、2、10 μg/kg，CL的加標(biāo)回收率為72.3%～79.2%，RSD 為0.75%～2.43%。李丹等采用叔丁醇∶叔丁基甲醚（6∶4）作為萃取劑，提取豬尿樣本中的20種受動(dòng)劑并進(jìn)行UPLC-MS/MS檢測，CL的加標(biāo)回收率達(dá)到77.7%～106.1%[6]。朱英才等檢測豬尿中的CL時(shí)采用Oasis MCX固相萃取柱進(jìn)行凈化，相對于常用的SCX柱和HLB柱的回收率有大幅度提高到92.6%，其 RSD＜8.5%[7]。

3 小結(jié)

CL對人們的健康威脅依然存在，因此對CL的檢測要求仍在提高。液相色譜-質(zhì)譜檢測方法雖然已經(jīng)日趨成熟，但依然有很大的發(fā)展空間。液相色譜法和質(zhì)譜法與其他檢測系統(tǒng)具有較強(qiáng)的兼容性，因此在液質(zhì)聯(lián)用的基礎(chǔ)上開發(fā)新型聯(lián)用技術(shù)的前景十分廣闊。

參考文獻(xiàn)

[1] 葉培，岳振峰，肖陳貴，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬肉中28種β2- 受體激動(dòng)劑[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2013，4（3）：682-688.

[2] 劉佳，梁桂榮，謝云峰，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬尿中26種β2-受體激動(dòng)劑類藥物殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2014，5（9）：2757-2764.

[3] 王旭峰，趙麗，張高奎，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定豬尿中23種違禁藥物[J].分析化學(xué)，2013，41（8）：1254-1258.

[4] 張罡，王鳳美，湯志旭，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法研究克倫特羅在豬毛發(fā)中殘留及蓄積代謝規(guī)律[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào)，2014，5（12）：3778-3783.

[5] 周煒，朱聰英，應(yīng)永飛，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動(dòng)物尿液中23 種β-受體激動(dòng)劑[J].中國獸藥雜志，2013，47（9）：46-52.

[6] 李丹，孫雷，畢言鋒，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬尿中20種β-受體激動(dòng)劑殘留[J].中國獸藥雜志，2013，47（12）：50-56.

[7] 朱英才，彭強(qiáng).超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬尿中4種β-興奮劑藥物殘留[J].畜禽業(yè)，2015（3）：34-36.

收稿日期：（2015-12-09）

通訊作者，王琤韋華（1982-），男，副教授，博士，研究方向：動(dòng)物營養(yǎng)。E-mail：616051233@qq.com。

作者簡介：伍曉紅（1994-），女，本科，專業(yè)：生物科學(xué)。E-mail：sakura-1130@qq.com。

基金項(xiàng)目：江西科技師范大學(xué)第九屆本科生創(chuàng)新、創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目，2015江西省農(nóng)牧漁業(yè)科研項(xiàng)目。