張仕林　(黔南州人民醫(yī)院胃腸外科，貴州　都勻　55800)

?

腹腔鏡膽囊切除術后患者外周血T細胞比例及功能變化

張仕林(黔南州人民醫(yī)院胃腸外科，貴州都勻55800)

〔摘要〕目的探討膽結石采用腹腔鏡膽囊切除術( LC)進行治療對患者全身免疫功能的影響。方法選取50例膽結石患者，隨機分為LC組和開腹腹腔鏡膽囊切除術( OC)組各25例。分別于手術前和手術后24 h收集患者外周血，采用密度梯度離心法分離獲取外周血單個核細胞( PBMC)。采用流式細胞術檢測PBMC中CD4 T淋巴細胞比例、CD8 T淋巴細胞比例，并計算CD4 T/CD8 T淋巴細胞比例比值。采用胞內染色方法分析外周血干擾素( IFN)－γ+CD4 T細胞比例和穿孔素陽性CD8 T細胞比例。結果與手術前外周血CD4 T細胞比例相比，手術后24 h LC組患者外周血CD4 T細胞比例未出現(xiàn)顯著變化( P＞0．05) ;而OC組患者術后24 h外周血CD4 T細胞比例與術前相比顯著降低( P＜0．05)。兩組患者術后24 h外周血CD8 T細胞比例與術前相比均未出現(xiàn)顯著變化( P＞0．05)。LC組患者外周血CD4/CD8 T細胞比例比值未出現(xiàn)顯著變化; OC組患者外周血CD4/CD8 T細胞比例比值顯著降低( P＜0．05)。與手術前外周血IFN－γ+CD4 T細胞比例相比，手術后24 h LC組患者外周血IFN－γ+CD4 T細胞比例和穿孔素陽性CD8 T細胞比例均未出現(xiàn)顯著變化( P＞0．05) ;而OC組患者術后24 h外周血IFN－γ+CD4 T細胞比例較術前顯著降低( P＜0．05)，術后24 h外周血穿孔素陽性CD8 T細胞比例較術前顯著升高( P＜0．05)。結論LC治療對患者全身免疫功能的影響要輕于OC，可在臨床廣泛推廣使用。

〔關鍵詞〕腹腔鏡膽囊切除術;開腹腹腔鏡膽囊切除術;外周血; T細胞;免疫

腹腔鏡膽囊切除術( LC)是膽道外科常用的手術，較傳統(tǒng)的開腹腹腔鏡膽囊切除術( OC)具有所需住院時間短、術中出血量少、術后恢復快、患者所承受的痛苦小、并發(fā)癥發(fā)生率低、對患者全身免疫功能影響小等特點〔1～5〕。CD4 T淋巴細胞比例、CD8 T淋巴細胞比例、CD4 T/CD8 T淋巴細胞比例比值可作為預測腹部手術患者預后結果的指標〔6〕。本研究擬對比LC 和OC兩種方法治療膽結石后對患者外周血CD4T淋巴細胞比例、CD8 T淋巴細胞比例、CD4 T/CD8 T淋巴細胞比例比值、CD4 T淋巴細胞和CD8 T淋巴細胞功能的影響。

1材料與方法

1. 1臨床資料選取2013年12月至2014年12月入院的50例膽結石患者，隨機分為LC組和OC組，每組25例。其中LC組男11例，女14例;年齡20～70〔平均( 37．53±11．94)〕歲; OC組男12例，女13例;年齡21～72〔平均( 38．28±12．41)〕歲。兩組患者年齡、性別、病程等比較均無統(tǒng)計學意義( P＜0．05)?；颊呔?jīng)腹部X線片及超聲檢查確診為膽結石患者。

1. 2外周血單個核細胞( PBMC)獲取采用Ficoll密度梯度離心法分離獲取PBMC，嚴格按照試劑說明書。

1. 3流式細胞術分析方法分離獲取PBMC以含1%胎牛血清( BSA)的磷酸鹽緩沖液( PBS)洗滌2次后，加入CD3、CD4、CD8熒光抗體，于4℃冰箱中孵育30 min;以含1%BSA的PBS洗滌2次后，重懸于PBS中進行流式細胞儀檢測。

1. 4胞內染色方法上述分離獲取的PBMC中加入Activation Cocktail(含有高爾基體阻斷劑)，于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育6 h;收集細胞，按上述方法進行表面分子CD4和CD8流式細胞染色，隨后加入0．5 ml細胞膜固定透化液，室溫避光孵育30 min;以透化液洗滌細胞2次后加入γ－干擾素( IFN－γ)和穿孔素抗體，室溫避光孵育30 min;以透化液洗滌細胞2次，細胞重懸于0．2 ml PBS中立即進行流式細胞儀檢測。

1. 5統(tǒng)計學方法采用GraphPad軟件進行t檢驗。

2結果

2. 1外周血CD4 T細胞比例變化與LC組手術前外周血CD4 T細胞比例( 31．82%±6．97%)相比，手術后24 h( 31．13%± 7．03%)未出現(xiàn)顯著變化( P＞0．05) ; OC組術前外周血CD4 T細胞比例為( 30．91%±7．11%)，術后24 h為( 21．28%± 4．93%)，與術前相比顯著降低( P＜0．05)。

2. 2外周血CD8 T細胞比例變化與LC組手術前外周血CD8 T細胞比例( 35．36%±6．95%)相比，手術后24 h( 35．18%±7．14%)無變化( P＞0．05) ; OC組術前外周血CD8 T細胞比例( 36．11%± 7．22%)與術后24 h( 36．33%±7．01%)相比無變化( P＞0．05)。

2. 3外周血CD4/CD8 T細胞比例比值變化LC組外周血CD4/CD8 T細胞比例比值未出現(xiàn)顯著變化(術前: 0．90±0．15，術后0．58±0．06) ; OC組外周血CD4/CD8 T細胞比例比值顯著降低(術前: 0．91±0．13，術后: 0．88±0．11) ( P＜0．05)。

2. 4外周血CD4 T細胞功能變化與LC組手術前外周血IFN－γ+CD4 T細胞比例( 36．33%±6．64%)相比，手術后24 h ( 35．82%±7．04%)未出現(xiàn)顯著變化( P＞0．05) ; OC組患者術前外周血IFN－γ+CD4 T細胞比例為( 37．02%±6．82%)，術后24 h 為( 25．23%±5．21%)，與術前相比顯著降低( P＜0．05)。

2. 5外周血CD8 T細胞功能變化與LC組手術前外周血穿孔素陽性CD8 T細胞比例( 18．83%±3．72%)相比，手術后24 h ( 17．93%±3．04%)未出現(xiàn)顯著變化( P＞0．05) ; OC組患者術前外周血穿孔素陽性CD8 T細胞比例為( 18．85%±3．42%)，術后24 h為( 23．01%±3．55%)，與術前相比顯著升高( P＜0．05)。

3討論

膽結石是膽道系統(tǒng)中最常見的非致命性疾病〔7～9〕。膽結石主要根據(jù)發(fā)生位置分為膽囊和膽道兩種類型:即膽固醇結石和色素結石〔10〕。膽結石在發(fā)達國家的患病率約為10%～15%〔11〕。右上腹膽結石所引起的疼痛以及相關的惡心、嘔吐、餐后腹脹、右上腹不適等癥狀均會嚴重影響患者的生活質量。盡管對膽結石的病因進行了廣泛的研究，然而膽結石的確切發(fā)病機制尚未完全研究清楚。目前膽結石主要的治療方法有LC 和OC。LC是膽道外科常用的手術，分為順行性(由膽囊管開始)切除和逆行性(由膽囊底部開始)切除兩種。自20世紀80年代后期推出LC后，LC已成為膽囊疾病治療的“金標準”，幾乎完全取代了OC。文獻報道，CD4 T淋巴細胞比例、CD8 T淋巴細胞比例、CD4 T/CD8 T淋巴細胞比例比值可作為預測腹部手術患者的預后結果的指標〔12〕。綜上所述，本研究從全身免疫功能影響方面證實LC治療對患者全身免疫功能的影響要輕于OC，為LC的臨床推廣提供了進一步的科學依據(jù)，證實LC可在臨床廣泛推廣使用治療膽結石。

4參考文獻

1 Kalaitzakis E，Weiber H，Toth E．Hepatic subcapsular biloma complicating laparoscopic cholecystectomy〔J〕．Endoscopy，2015; 47( 1) : E316－7．

2 Schwartz DA，Shah AA，Zogg CK，et al．Operative delay to laparoscopic cholecystectomy: racking up the cost of health care〔J〕．J Trauma Acute Care Surg，2015; 79( 1) : 15－21．

3 Paige JT，Yu Q，Hunt JP，et al．Thinking it through: mental rehearsal and performance on 2 types of laparoscopic cholecystectomy simulators〔J〕．J Surg Educ，2015; 72( 4) : 740－8．

4 Namikawa T，Tamura K，Morita M，et al．Laparoscopic cholecystectomy for a patient with left－sided gallbladder〔J〕．Surg Technol Int，2015;26:120－3．

5王福榮．腹腔鏡膽囊切除術對膽結石治療效果分析〔J〕．當代醫(yī)學，2013; 19( 3) : 3－4．

6 Torres K，Torres A，Chroscicki A，et al．Evaluation of lymphocytes CD4+ and CD8+ and expression of ZAP－70 kinase on CD3+ and CD19+ lymphocytes in obese patients undergoing laparoscopic cholecystectomy〔J〕．Surg Endosc，2013; 27( 3) : 872－9．

7 Tsai MC，Chen CH，Lee HC，et al．Increased risk of depressive disorder following cholecystectomy for gallstones〔J〕．PLoS One，2015; 10( 6) : e0129962．

8 Ha JH，Park YS，Seon CS，et al．Increased risk of asymptomatic gallstones in patients with ulcerative colitis〔J〕．Intest Res，2015; 13( 2) : 122－7．

9 Binagi S，Keune J，Awad M．Immediate postoperative pain: an atypical presentation of dropped gallstones after laparoscopic cholecystectomy〔J〕．Case Rep Surg，2015; 2015: 930450．

10 Trotman BW，Soloway RD．Pigment gallstone disease: Summary of the National Institutes of Health－international workshop〔J〕．Hepatology，1982; 2( 6) : 879－84．

11 Stinton LM，Shaffer EA．Epidemiology of gallbladder disease: cholelithiasis and cancer〔J〕．Gut Liver，2012; 6( 2) : 172－87．

12 Buunen M，Gholghesaei M，Veldkamp R，et al．Stress response to laparoscopic surgery: a review〔J〕．Surg Endosc，2004; 18( 7) : 1022－8．

〔2015－05－26修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

〔中圖分類號〕R575. 6

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202( 2016) 02-0399-02;

doi:10. 3969/j. issn. 1005-9202. 2016. 02. 069

第一作者:張仕林( 1964－)，男，副主任醫(yī)師，主要從事腹腔鏡膽囊切除術病發(fā)癥的防范與處理研究。