張立民，蘇寶鋒，常玉梅，孫博，閆浩，梁利群

（中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070）

四種常用漁藥對雅羅魚雜交幼魚的急性毒性

張立民，蘇寶鋒，常玉梅，孫博，閆浩，梁利群

（中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所，黑龍江 哈爾濱 150070）

在水溫25℃下，采用常溫靜水生物測試法研究硫酸銅及硫酸亞鐵合劑、敵百蟲、復合季銨碘和阿維菌素對平均體質(zhì)量（1.47±0.2）g的雅羅魚雜交（瓦氏雅羅魚Leuciscus waleckii Dybowski×高體雅羅魚Leuciscus idus）幼魚的急性毒性。結果表明：敵百蟲、硫酸銅及亞鐵合劑、阿維菌素和復合季胺碘的24h、48h和96h半致死濃度（LC50）分別為1.3863mg·L-1、0.8194mg·L-1和0.3564mg·L-1；38.7298mg·L-1、26.509mg·L-1和26.509mg· L-1；3.30mg·L-1、2.40mg·L-1和2.30mg·L-1；16.10mg·L-1、16.10mg·L-1和16.10mg·L-1；安全濃度分別為0.0859mg· L-1、3.7257mg·L-1、0.4mg·L-1和4.80mg·L-1。這4種藥物對雅羅魚幼魚的毒性由強至弱依次為：敵百蟲＞阿維菌素＞硫酸銅及硫酸亞鐵合劑＞復合季銨碘。

漁藥；急性毒性；安全濃度；致死濃度；幼魚；雅羅魚

雅羅魚肉質(zhì)細嫩，味道鮮美，經(jīng)濟價值高,是北方地區(qū)的淡水名貴魚類，為三花五羅之一，深受市場歡迎。瓦氏雅羅魚Leuciscus waleckii Dybowski，亦稱東北雅羅魚，俗名華子魚、滑魚、白魚，隸屬鯉形目Cypriniformes，鯉科Cyprinidae，雅羅魚亞科Leuciscinae的雅羅魚屬Leuciscus，主要分布于黑龍江流域各個水系,黃河下游、灤河、岱海、內(nèi)蒙古達里湖等亦產(chǎn)此魚。目前有關瓦氏雅羅魚的耐鹽堿特性[1]、

鹽堿池塘養(yǎng)殖[2]、生理生化[3,4]、群體遺傳[5,6]、轉錄組學[7-9]、氨基酸代謝組學[10]等進行了一些研究，然而關于病害防治方面的研究較少。雅羅魚屬的高體雅羅魚Leuciscus idus（又名圓腹雅羅魚、中白條）分布于歐洲北部和俄羅斯西伯利亞的河流中，中國僅見于新疆額爾齊斯河水系，已被列入新疆二級保護魚類[11,12]。目前，對高體雅羅魚的研究還只停留在種群親緣關系[13,14]、人工繁殖和繁育[15]及生長模型[16]等方面。池塘養(yǎng)殖生產(chǎn)證實：高體雅羅魚和瓦氏雅羅魚正反交雜交品種（雅龍魚）比親本更有生長優(yōu)勢，深受廣大養(yǎng)殖漁戶的喜愛（待發(fā)表）。

雖然目前雅羅魚池塘養(yǎng)殖的病害較少，但在苗種培育過程中常因池塘環(huán)境而發(fā)生一些病害，如細菌性爛鰓病、赤皮病，車輪蟲、指環(huán)蟲、錨頭藻等寄生蟲病等。雅羅魚比其他魚類如鯉和鯽等對某些藥物更為敏感，且病害防治研究較少。本文通過研究水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的幾種藥物對雅羅魚雜交幼魚的急性毒性，旨在為雅羅魚疾病防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗魚取自中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所呼蘭試驗站，平均體長（4.58±0.3）cm，平均體質(zhì)量（1.47±0.2）g，體質(zhì)健壯、外觀健康。試驗前試驗魚在水族箱中暫養(yǎng)15d，正常投喂、換水，無死亡現(xiàn)象即開始試驗。試驗開始前停食24 h。

試驗用漁藥成分及含量見表1。

試驗前先將試驗藥物配制成母液，再按比例稀釋成所需濃度，藥液現(xiàn)配現(xiàn)用。母液濃度如下：硫酸銅與硫酸亞鐵母液為2 000mg·L-1，復合季胺碘母液為500mg·L-1，敵百蟲母液為3 000mg·L-1，阿維菌素母液為200 mg·L-1。

1.2 方法

試驗水抽取自呼蘭試驗站地下水，曝氣一周，水溫25℃左右，pH（7.8±0.1），溶解氧為（8.0±0.5）mg·L-1。試驗在體積為7L（29cm×8cm×20cm）的PVC水槽中進行，試驗水體5L。試驗前先對每種藥物進行預試驗，每個水槽放入10尾魚，確定24h魚的致死濃度下限值和96h無死亡的濃度上限值，根據(jù)預試驗結果確定出各試驗藥物濃度區(qū)間。按等對數(shù)間距設置6個濃度組和1個空白對照組，配制試驗藥液，開展毒性評估試驗。

采用靜水試驗法[17]，每個水槽隨機放入10尾魚，每個藥物濃度梯度設2個試驗組，一個空白對照組。水溫控制在25℃左右，停食，每24h更換1/2試驗液，不增氧，試驗時間為96h。試驗中觀察、記錄試驗魚的行為變化、中毒癥狀，記錄死亡時間。用玻璃棒觸碰無任何反應即為死亡。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

采用寇氏法（Karder）[18,19]計算試驗魚對各漁藥的半數(shù)致死質(zhì)量濃度（LC50）：

LogLC50=Xm-d（∑p-0.5）

式中：Xm為死亡組最大劑量的對數(shù)，d為相鄰兩組濃度對數(shù)差，p為各組的死亡率，∑p為各組死亡率的總和。

表1 四種試驗漁藥的成分、含量和廠家Tab.1 The content,concentration and manufacturers of the four aquaculture drugs used in the experiment

2 結果與分析

試驗開始后，各種漁藥的低濃度組雅羅魚活動與對照組類似，游動正常，而高濃度組雅羅魚在水體中上層或沿著水槽壁不停地快速游動，呼吸加快。一段時間后，低濃度組試驗魚活動情況變化不大，而高濃度組雅羅魚活動開始減弱，游動變慢；隨著時間延長，不同藥物中高濃度組試驗魚開始死亡，對照組無死亡現(xiàn)象。

2.1 雅羅魚在4種漁藥急性毒性試驗中的死亡率

四種藥物對雅羅魚幼魚的累計死亡率如表2所示。隨著試驗濃度的增加以及時間的延長，4種漁藥對雅羅魚的急性毒性效應明顯增強，死亡率明顯上升。各種藥物最低濃度組在24h、48h、96h的死亡率均為0，最高濃度組在24h死亡率為100%。

復合季胺碘組：濃度達500mg·L-1，雅羅魚進入藥液幾分鐘就急速游動、翻滾、上下亂竄、極度不安、鰓絲出血，而后慢慢安靜下來，陸續(xù)死亡；濃度為60mg·L-1時，20min內(nèi)開始死亡，1h后全部死亡；濃度為33mg·L-1時，1h后開始死亡，24h可100%死亡；濃度為18.1mg·L-1時，2.5h后開始死亡，24h內(nèi)達到死亡高峰，死亡率為60%；而濃度為3.0 mg·L-1和5.5mg·L-1時，96h無死亡現(xiàn)象。

表2 雅羅魚雜交幼魚在4種漁藥急性毒性試驗中的死亡率Tab.2 The cumulative mortality of hybrid dace juveniles exposed to the four aquaculture drugs during the test

硫酸銅及硫酸亞鐵合劑：濃度為150mg·L-1時，2.5h開始出現(xiàn)死亡，24h死亡率 100%;濃度為87.27mg·L-1時，6.5h開始出現(xiàn)死亡，24h死亡率100%；濃度為50.78mg·L-1時，6.5h開始出現(xiàn)死亡，24h死亡率75%，48h死亡率為100%；濃度為29.54mg·L-1時，18h后開始出現(xiàn)死亡，24h死亡率25%，96h死亡率60%；濃度為17.19mg·L-1時，43h開始死亡，96h死亡率為10%；濃度為10mg·L-1時，96h內(nèi)無死亡現(xiàn)象。

阿維菌素組：雅羅魚進入藥液后，高濃度組反應劇烈，在水中狂游；2.5h后，有個別魚開始在水槽底翻白，呼吸微弱；6h后，6mg·L-1濃度組全部死亡；24h內(nèi)，3.3mg·L-1濃度組有50%死亡，48h全部死亡；1.8mg·L-1濃度組前48h無死亡，96h死亡率僅為10%；0.3～1.0mg·L-1濃度組96h內(nèi)無死亡。

敵百蟲組：8.0mg·L-1濃度組幼魚入藥液后1h，呼吸急促，個別魚腹部向上，或在池中亂竄，2.5h后全部死亡；3.33mg·L-1濃度組，2.5h死亡率為30%，而17h死亡率為100%；當濃度為1.386mg·L-1時，17h開始死亡，24h內(nèi)死亡率為50%，48h內(nèi)死亡率為100%；濃度為0.577mg·L-1時，24h內(nèi)無死亡現(xiàn)象，48h累積死亡率從10%達到96h的80%。中毒魚死亡前身體側彎。

2.2 四種漁藥的半致死濃度和安全質(zhì)量濃度

4種漁藥對雅羅魚幼魚的半致死濃度和安全濃度見表3。如表3所示，除季胺碘外，其他漁藥對雅羅魚幼魚的LC50隨時間的延長而減小，表明這3種漁藥的毒性隨時間的延長而增加。根據(jù)安全質(zhì)量濃度可知，這4種漁藥對雅羅魚雜交幼魚的毒性由強至弱依次為：敵百蟲＞阿維菌素＞硫酸銅及硫酸亞鐵合劑＞復合季銨碘。

表3 4種漁藥對雅羅魚雜交幼魚的半致死濃度和安全濃度（mg·L-1）Tab.3 LC50and safe concentrations of the four drugs in hybrid dace juveniles

3 討論

根據(jù)化學物對魚類毒性等級評價標準，按96h LC50將藥物劃分為劇毒 （＜0.1mg·L-1）、高毒（0.1～1mg·L-1）、中毒（1～10.0mg·L-1）和低毒（＞10.0mg· L-1）4個等級[21]。據(jù)此標準，敵百蟲對雅羅魚雜交幼魚為高毒藥物，阿維菌素為中毒藥物，復合季胺碘和硫酸銅及硫酸亞鐵合劑為低毒藥物。

敵百蟲為有機磷類殺蟲劑，通過抑制蟲體的膽堿酯酶活性，使其失去水解已酰膽堿能力而在蟲體內(nèi)積聚，繼而導致神經(jīng)肌肉傳導功能異常，出現(xiàn)痙攣，麻癖，直至死亡。本試驗中敵百蟲對雅羅魚雜交幼魚的安全濃度為0.0859mg·L-1,低于正常使用量0.45mg·L-1；濃度為0.24mg·L-1時，96h就可死亡，而濃度為0.577mg·L-1時，前48h內(nèi)基本無死亡現(xiàn)象，而48～96h內(nèi)死亡率達70%～80%，死魚體側彎，說明敵百蟲的后續(xù)毒性較強，在幼魚階段需謹慎使用，必要時應盡量避免使用。

混特殺的主要成分為阿維菌素，是一種抗生素類殺蟲劑，屬昆蟲神經(jīng)毒劑，主要干擾害蟲神經(jīng)生理活動，刺激釋放r-氨基丁酸，作用于神經(jīng)與肌肉接觸點，增加氯離子的釋放，抑制神經(jīng)接觸點的信息傳遞，使害蟲麻癖中毒死亡。阿維菌素主要用于治療雅羅魚錨頭蚤、車輪蟲、指環(huán)蟲等寄生蟲病。阿維菌素對草魚[22]、河鱸幼魚[23]和虹鱒幼魚[20]的安全濃度分別為0.010mg·L-1、0.114μg·L-1和0.679μg· L-1。本試驗中阿維菌素的安全濃度為0.40mg·L-1,生產(chǎn)中的使用量為0.05mg·L-1，結合在本實驗中毒性測試，當藥液濃度為1.80mg·L-1，遠遠高于生產(chǎn)中常用濃度的36倍，96h僅僅出現(xiàn)10%的死亡率，說明雅羅魚雜交幼魚對阿維菌素毒性不敏感，正常使用比較安全。

硫酸銅及硫酸亞鐵合劑屬重金屬鹽類殺蟲劑，游離的Cu2+可與蛋白質(zhì)結合形成絡合物，使蛋白質(zhì)變性、沉淀，破壞氧化還原酶系統(tǒng)的活性而使寄生蟲體內(nèi)酶失去活性，起到殺死寄生蟲的效果，尤其對原生動物，比如指環(huán)蟲、纖毛蟲和一些低等藻具有較強殺傷力。硫酸亞鐵具有收斂作用，起輔助殺蟲作用，主要用于殺滅雅羅魚的車輪蟲，斜管蟲等。本試驗中，雅羅魚對硫酸銅及硫酸亞鐵合劑的安全濃度為 3.7257mg·L-1,高于 正常使用 濃 度0.6～0.7mg·L-1；當使用濃度為10mg·L-1，為正常使用濃度的14.2～20.0倍，幼魚沒有出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，因此正常使用對雅羅魚幼魚安全。

復合季胺碘，屬消毒防腐劑，用于治療各種水產(chǎn)動物的細菌、病毒、衣原體等引起的疾病，如對雅羅魚的細菌性爛鰓、赤皮病、豎鱗病等有較好療效。本試驗中復合季胺碘的安全濃度為4.80mg·L-1,高于生產(chǎn)上的正常使用量0.30mg·L-1。本試驗中，該藥液濃度在9.90mg·L-1時，才使雅羅魚在96h內(nèi)有10%的死亡率，而在5.50mg·L-1時，高于生產(chǎn)中常用濃度的18.3倍時，96h無死亡現(xiàn)象，說明在生產(chǎn)正常使用時較安全。

綜上所述，在雅羅魚苗種培育階段，不同藥物對幼魚的毒性不同；復合季胺碘，硫酸銅硫酸亞鐵合劑和阿維菌素可以安全使用，敵百蟲應慎用。在養(yǎng)殖生產(chǎn)中，還應考慮水溫、pH、水中懸浮物和水溶氧量等因素的影響，應先進行預試驗，以達到預防中毒并能夠有效治療的目的。

［1］安曉萍,孟和平,杜昭宏,等.達里湖東北雅羅魚的生長、死亡和生活史類型的研究［J］.淡水漁業(yè),2008,38（6）:3-7.

［2］賈麗，張鳳琴，孫彩霞,等.鹽堿池塘養(yǎng)殖達里湖瓦氏雅羅魚試驗初報［J］.華北農(nóng)學報,2006,21（專輯）:76-78.

［3］張建明,張玉,劉海濤.達里諾爾湖和崗更湖瓦氏雅羅魚同工酶的研究［J］.水生態(tài)學雜志,2010,3（6）:79-86.

［4］安曉萍,齊景偉,羅旭光,等.不同水體中瓦氏雅羅魚的氨氮排泄率以及血液和組織中氨氮含量研究［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2014（4）:244-245,247.

［5］池炳杰,常玉梅,閆學春,等.瓦氏雅羅魚達里湖群體和烏蘇里江群體的遺傳多樣性和遺傳結構分析［J］.中國水產(chǎn)科學,2010,17（2）:228-235.

［6］Chang Y M,Tang R,Sun X W,et al.Genetic analysis of population differentiation and adaptation in Leuciscus waleckii［J］.Genetica,2013,141（10）:417-429.

［7］Xu J,Li Q,Xu L M,et al.Gene expression changes leading extremealkalinetoleranceinAmuride（Leuciscus waleckii）inhabitingsoda lake［J］.BMCGenomics,2013,14:682.

［8］Xu J,Ji P F,Wang B S,et al.Transcriptome sequencing and analysis ofwild Amuride（Leuciscus waleckii）inhabiting an extreme alkaline-saline lake reveals insights into stress adaptation［J］.PLoSONE,2013,8（4）:e59703.

［9］Chang Y M,Tang R,Dou X J,et al.Transcriptome and expression profiling analysis of Leuciscus waleckii:an exploration of the alkali-adapted mechanisms of a freshwater teleost［J］.Mol Biosyst,2014,10:491-504.

［10］常玉梅,何強,孫言春,等.碳酸鹽堿度脅迫下瓦氏雅羅魚血漿游離氨基酸水平的變化［J］.中國水產(chǎn)科學, 2016,23（1）:117-124.

［11］任慕蓮,郭焱,張人銘,等.中國額爾齊斯河魚類資源及漁業(yè)［M］.烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社,2002．

［12］范喜順,全仁哲.新疆賽里木湖高體雅羅魚生物學研究［J］.兵團教育學院學報,2008,18（4）:51-52.

［13］胡文革,段子淵,王金富,等.新疆3種雅羅魚線粒體DNA控制區(qū)序列的差異和系統(tǒng)進化關系［J］.遺傳學報,2004（9）:970-975.

［14］竇新杰,常玉梅,唐然,等.幾種雅羅魚亞科魚類基于mtDNA序列的親緣關系［J］.江蘇農(nóng)業(yè)學報,2014（4）: 826-832.

［15］高攀,韓小麗,胡建勇,等.高體雅羅魚大規(guī)格魚種培育試驗［J］.黑龍江水產(chǎn),2015（4）:37-38．

［16］霍堂斌,馬波,唐富江,等.新疆3種雅羅魚生長模型的比較研究［J］.水產(chǎn)學雜志,2008（2）:8-14.

［17］陳萬光,劉飛,凡秀麗,等.4種漁藥對高體鳑鮍幼魚的急性毒性［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學,2012,40（1）:203-205.

［18］GB15193.3-2003急性毒性試驗國家標準［S］.中華人民共和國農(nóng)業(yè)部,2003.

［19］SC/T1087.1-2006魚藥毒性試驗方法第1部分外用魚藥急性毒性試驗［S］.中華人民共和國農(nóng)業(yè)部,2006.

［20］湯施展,陳中祥,白淑艷,等.5種水產(chǎn)藥物對虹鱒幼魚的急性毒性［J］.水產(chǎn)學雜志,2015,28（6）:33-37.

［21］孟紫強.生態(tài)毒理學原理與方法［M］.北京:科學出版社,2006:149-155．

［22］李常健,駱鷹,楊錦兀,等.阿維菌素毒死蜱對草魚的毒性效應研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學,2011（6）:3365-3367.

［23］宋洋,秦莉,張斐，等.三種常用漁藥對河鱸幼魚急性毒性試驗［J］.新疆農(nóng)業(yè)科學,2014（11）:2127-2131.

Acute Toxicity of Four Aquaculture Drugs on Hybrid Dace（Leuciscus waleckii Dybowski× Leuciscus idus）Juveniles

ZHANG Li-min,SU Bao-feng,CHANG Yu-mei,SUN Bo,YAN Hao,LIANG Li-qun
（Heilongjiang River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Harbin 150070,China）

The acute toxicity of four aquaculture drugs,including cupric sulfate and ferrous sulfate powder，purified trichlorphon powder,ammonium iodine，and avermectin to hybrid dace（Leuciscus waleckii Dybowski×Leuciscus idus）juveniles were studied under water temperature of 25℃,pH of 7.8,and dissolved oxygen level（DO）of 8.0 mg·L-1by a hydrostatic test method.The median-lethal concentration（LC50）values at 24 h,48 h,and 96 h were found to be 1.3863 mg·L-1,0.8194 mg·L-1and 0.3564 mg·L-1in purified trichlorphon powder；38.7298 mg·L-1,26.509 mg·L-1and 26.509 mg·L-1in cupric sulfate and ferrous sulfate powder;3.30 mg·L-1,2.40 mg·L-1and 2.30 mg·L-1in avermectin；and 16.10 mg·L-1,16.10 mg·L-1and 16.10 mg·L-1in ammonium iodine,with safe concentrations of 0.0859 mg·L-1,3.7257 mg·L-1,0.4 mg·L-1and 4.80 mg·L-1,respectively.The order of toxicity of the four aquaculture drugs to the dace hybrid juveniles was expressed as follows：purified trichlorphon powder＞avermectin＞cupric sulfate and ferrous sulfate powder＞ammonium iodine．

aquaculture drug；acute toxicity；safe concentration；lethal concentration;juvenile；Leuciscus sp.

S948

A

1005-3832（2016）06-0047-05

2016-08-08

國家自然科學基金項目（31461163004）；黑龍江省攻關項目（GC12B307）.

張立民（1965-），男，助理研究員，從事水產(chǎn)養(yǎng)殖與育種研究.E-mail:zhanglimin@hrri.ac.cn

梁利群（1963-），女，研究員，從事水產(chǎn)動物基因工程育種研究.E-mail:liangliqun@hrfri.ac.cn