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      HER-2在涎腺腫瘤中的蛋白表達(dá)、基因擴(kuò)增及臨床意義

      2016-03-04 07:07:38李峰孫曉菊
      關(guān)鍵詞:涎腺單克隆組織化學(xué)

      李峰 孫曉菊

      HER-2在涎腺腫瘤中的蛋白表達(dá)、基因擴(kuò)增及臨床意義

      李峰 孫曉菊

      目的探討涎腺良性腫瘤及惡性腫瘤中HER-2基因擴(kuò)增、蛋白表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組化檢測43例涎腺惡性腫瘤及10例良性腫瘤中HER-2蛋白表達(dá);采用免疫熒光原位雜交(FISH)檢測HER-2基因擴(kuò)增情況。結(jié)果HER-2蛋白表達(dá)于涎腺良性腫瘤及惡性腫瘤中的陽性表達(dá)率分別為72.09%、10.00%,惡性腫瘤明顯高于良性腫瘤(P<0.05);HER-2基因擴(kuò)增在涎腺良性腫瘤及惡性腫瘤中的陽性率分別為20.00%、76.74%,惡性腫瘤明顯高于良性腫瘤(P<0.05)。結(jié)論涎腺惡性腫瘤中HER-2基因擴(kuò)增及蛋白表達(dá)陽性率均高于涎腺良性腫瘤,可作為其分子靶向治療的靶點(diǎn)。

      涎腺腫瘤;HER-2基因;免疫組織化學(xué)

      隨著對(duì)涎腺腫瘤研究的不斷深入,遺傳學(xué)檢查對(duì)于涎腺腫瘤診斷和治療具有越來越不容忽視的重要意義。HER-2為Ⅰ型生長因子受體中的一種穿膜糖蛋白,也叫C-erbB-2或neu,此基因位于17號(hào)染色體的q11.2~q12上,在C-erbB-2和表皮生長因子受體(EGFR)之間存在交叉通訊。HER-2的生物學(xué)是復(fù)雜的,與細(xì)胞的分化和增生都有關(guān)系[1]。由于這種擴(kuò)增的基因可預(yù)示對(duì)人HER-2單克隆抗體反應(yīng)具有治療意義,因此評(píng)估腫瘤細(xì)胞中HER-2的狀態(tài)有十分重要的臨床意義。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料 收集本院2002年1月~2015年6月43例涎腺惡性腫瘤存檔蠟塊。其中女19例,男24例。年齡26~78歲,平均年齡56.3歲。黏液表皮樣癌11例、腺泡細(xì)胞癌11例、腺樣囊性癌11例、多形性低度惡性腺癌10例。腮腺14例、頜下腺10例、舌下腺7例,舌、腭部、唇等小涎腺12例。良性腫瘤10例,其中腺淋巴瘤3例、多形性腺瘤4例、基底細(xì)胞腺瘤3例。將收集蠟塊重新制作蘇木精-伊紅染色(HE)切片,并經(jīng)病理科醫(yī)師重新確診。

      1.2 試劑與方法

      1.2.1 免疫組織化學(xué)染色方法檢測 鼠抗人HER-2單克隆抗體、二抗和即用型二步法PV檢測試劑盒、DAB顯色劑,抗體稀釋倍數(shù)為1:100,按說明書步驟進(jìn)行操作。

      1.2.2 FISH方法 FISH樣本制備→探針制備→探針標(biāo)記→雜交→(染色體顯帶)→熒光顯微鏡檢測→結(jié)果分析。在Olympus BX51型熒光顯微鏡下觀察,以>75%的細(xì)胞核內(nèi)≥2個(gè)HER-2信號(hào)判斷雜交成功。

      1.2.3 判斷標(biāo)準(zhǔn) 免疫組織化學(xué)結(jié)果判讀:陽性細(xì)胞比例<10%為陰性,10%~30%為弱陽性,>30%為強(qiáng)陽性。

      熒光原位雜交結(jié)果判讀:Ratio<1.8為陰性結(jié)果,提示該樣本無HER-2基因擴(kuò)增;Ratio>2.2為陽性結(jié)果,提示樣本中HER-2基因發(fā)生擴(kuò)增;Ratio1.8~2.2時(shí),可以選擇增加計(jì)數(shù)細(xì)胞至100個(gè),或重做FISH實(shí)驗(yàn)來判斷最終結(jié)果。

      1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 HER-2/neu基因產(chǎn)物在涎腺腫瘤中的表達(dá)情況:HER-2/neu蛋白主要定位于細(xì)胞膜,主要呈圓環(huán)狀,棕黃色,部分區(qū)域可表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中。涎腺良性、惡性腫瘤HER-2蛋白陽性表達(dá)率分別為10.00%、72.09%。涎腺惡性腫瘤中HER-2蛋白表達(dá)明顯高于涎腺良性腫瘤(P<0.05)。見表1。

      2.2 HER-2/neu基因在涎腺腫瘤中的擴(kuò)增情況:HER-2基因擴(kuò)增,表現(xiàn)為數(shù)十個(gè)綠色信號(hào)點(diǎn),聚集成簇,不擴(kuò)增表現(xiàn)為正常兩個(gè)綠色信號(hào)點(diǎn)。涎腺良性、惡性腫瘤基因擴(kuò)增陽性率分別為20.00%、76.74%,涎腺惡性腫瘤中HER-2基因擴(kuò)增明顯高于涎腺良性腫瘤(P<0.05)。見表1。

      表1 HER-2在涎腺腫瘤中的蛋白表達(dá)、基因擴(kuò)增比較(n,%)

      3 討論

      腫瘤的發(fā)生是由于癌基因的激活或抑癌基因的丟失及失活導(dǎo)致其所編碼蛋白發(fā)生質(zhì)和量的改變,干擾細(xì)胞生長、分化及代謝等重要過程,使得正常細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)變的結(jié)果[2]。頭頸部惡性腫瘤中涎腺癌為較常見類型,目前臨床對(duì)涎腺癌治療仍以手術(shù)切除為主、放化療為輔的綜合治療,但術(shù)后常復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。因此尋找新型的治療方法,如分子靶向治療已成為涎腺癌治療的研究新熱點(diǎn)[3]。

      研究證實(shí),HER-2在多種惡性腫瘤中有基因擴(kuò)增及高表達(dá),與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及侵襲密切相關(guān)。臨床前期研究發(fā)現(xiàn)HER-2高表達(dá)及基因擴(kuò)增加可提高涎腺惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能,表現(xiàn)出較多的侵襲性臨床病理特征[4]。本組實(shí)驗(yàn)對(duì)10例涎腺良性腫瘤及43例涎腺惡性腫瘤進(jìn)行免疫組織化學(xué)及免疫熒光方法檢測HER-2蛋白表達(dá)及基因擴(kuò)增情況,結(jié)果顯示涎腺惡性腫瘤中HER-2蛋白表達(dá)及基因擴(kuò)增均明顯高于涎腺良性腫瘤,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。目前針對(duì)HER-2受體蛋白的單克隆抗體Herceptin與化療藥物聯(lián)合使用可以明顯增加患者治療的敏感性[5]。由此推測HER-2蛋白表達(dá)及基因擴(kuò)增可用于涎腺腫瘤常規(guī)的病理檢查,可作為涎腺惡性腫瘤術(shù)后治療方案的參考依據(jù)之一。

      [1]呂克文,金寶忠,趙爾楊.HER-2基因在涎腺惡性腫瘤中表達(dá)及臨床意義的研究.口腔醫(yī)學(xué)研究,2007,23(5):498-501.

      [2]王紅霞,陳昊,閆蓉,等.涎腺癌組織中EGFR和HER-2表達(dá)及臨床意義.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2014,30(8):900-904.

      [3]陳昊,王紅霞,閆蓉,等.3種惡性涎腺上皮性腫瘤EGFR和HER-2表達(dá)的差異及意義.廣東醫(yī)學(xué),2013,34(21):3255-3258.

      [4]鄭美云,沈國嬰,陳藝玲,等.不同基因片段的HER-2抗體在免疫組化上的應(yīng)用.診斷病理學(xué)雜志,2015,22(5):39.

      [5]劉紅芹,王冬梅,屈浩,等.特異性HER2單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用.細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2010,26(5):456-458.

      10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.01.080

      2015-10-09]

      110016 遼寧省沈陽市人民醫(yī)院口腔科

      孫曉菊

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