李　琳，何　超，張　磊，李　偉，李燕平

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)中心，甘肅蘭州 730000)

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·經(jīng)驗(yàn)交流·

不同方法檢測(cè)血小板的準(zhǔn)確性探討

李琳，何超，張磊，李偉，李燕平

(蘭州大學(xué)第一醫(yī)院檢驗(yàn)中心，甘肅蘭州 730000)

摘要:目的探討電阻抗法及光學(xué)法檢測(cè)血小板的準(zhǔn)確性，總結(jié)出提高血小板計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性的方法。方法收集300例住院患者乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血標(biāo)本，采用電阻抗法、光學(xué)法及手工法檢測(cè)血小板計(jì)數(shù)；觀察電阻抗法血小板計(jì)數(shù)的直方圖，同時(shí)推制血片染色，人工鏡檢觀察血小板形態(tài)；以手工法血小板計(jì)數(shù)為金標(biāo)準(zhǔn)，比較電阻抗法和光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。結(jié)果300例患者血液標(biāo)本中，檢出血小板形態(tài)異常86例(28.67%)，主要為大血小板共檢出81例，占94.19%；血小板異常形態(tài)標(biāo)本中，與手工法測(cè)定血小板計(jì)數(shù)比較，電阻抗法血小板計(jì)數(shù)較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.379，P=0.000 0)；光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)也較低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.578，P=0.563 8)。檢出血小板形態(tài)正常214例，占71.33%；血小板正常形態(tài)標(biāo)本中，與手工法測(cè)定血小板計(jì)數(shù)比較，電阻抗法與光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)均較低，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.566，P=0.571 5；t=1.379，P=0.163 0)。結(jié)論血小板形態(tài)正常時(shí)，電阻抗法和光學(xué)法計(jì)數(shù)血小板與手工法結(jié)果基本一致，當(dāng)血小板形態(tài)異常時(shí)，電阻抗法計(jì)數(shù)結(jié)果較手工法低，而光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果與手工法無明顯差異，因此，當(dāng)電阻抗法計(jì)數(shù)血小板直方圖提示異常時(shí)，應(yīng)采用光學(xué)法或手工法進(jìn)行復(fù)查。

關(guān)鍵詞:血小板計(jì)數(shù)；電阻抗法；光學(xué)法；手工法；血小板形態(tài)異常

血小板計(jì)數(shù)是臨床常用的檢驗(yàn)項(xiàng)目之一，其結(jié)果的準(zhǔn)確性對(duì)于出血性疾病和血栓性疾病的診斷和治療起著決定性作用，與疾病的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有著密切關(guān)系，也是臨床醫(yī)生決定是否對(duì)血小板減少患者輸注血小板的一個(gè)重要指標(biāo)?，F(xiàn)如今，隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，多種全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀已經(jīng)普遍應(yīng)用于各臨床實(shí)驗(yàn)室，血小板計(jì)數(shù)檢測(cè)以經(jīng)典的電阻抗法應(yīng)用最為廣泛，但由于其影響因素較多，存在大血小板、血小板聚集、巨大血小板等因素的干擾，導(dǎo)致其計(jì)數(shù)結(jié)果不穩(wěn)定。因此，準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血小板在臨床診療工作中顯得十分重要。本研究旨在探討電阻抗法和光學(xué)法計(jì)數(shù)血小板的準(zhǔn)確性，以彌補(bǔ)電阻抗法計(jì)數(shù)血小板的不足之處，為臨床提供準(zhǔn)確的血小板計(jì)數(shù)結(jié)果。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源選取本院2015年1月6日至2015年1月21日住院患者300例，采集患者乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝靜脈血2 mL，所有檢驗(yàn)在標(biāo)本采集后2 h內(nèi)完成。

1.2儀器與試劑日本Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及原裝配套試劑，日本Sysmex XS1000i全自動(dòng)推片染片儀及配套試劑，日本Olympus雙目顯微鏡，牛鮑改良血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，靜脈血EDTA-K2真空抗凝管、20 μL微量采血管，血小板稀釋液按《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)的要求配制[1]。

1.3方法

1.3.1電阻抗法和光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)使用Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，質(zhì)控與標(biāo)本檢驗(yàn)過程嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程的要求進(jìn)行，以保證計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。其中電阻抗法采用儀器第3模式(CBC+DIFF)進(jìn)行檢測(cè)，此方法可計(jì)數(shù)體積2～40 fL的血小板；光學(xué)法采用儀器第4模式(CBC+DIFF+RET)進(jìn)行檢測(cè)，此方法可計(jì)數(shù)所有體積的血小板。

1.3.2手工法血小板計(jì)數(shù)取一清潔試管，加入0.38 mL血小板稀釋液，同時(shí)用微量吸管吸取儀器檢測(cè)法的同一待測(cè)標(biāo)本20 μL，將其與稀釋液混勻，靜置3～5 min，待紅細(xì)胞完全溶解后再搖勻；然后取10 mL混懸液充池，室溫靜置10～15 min待血小板完全下沉后，由兩名資深檢驗(yàn)人員采用雙盲法進(jìn)行計(jì)數(shù)，每份標(biāo)本平行計(jì)數(shù)4次，取平均值，記錄結(jié)果。

1.3.3血小板形態(tài)判斷采用血片染色人工鏡檢觀察血小板形態(tài)，以《臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)(第4版)》中血小板形態(tài)檢測(cè)為判斷標(biāo)準(zhǔn)[2]。

2結(jié)果

2.1血小板形態(tài)異常結(jié)果檢出86例(28.67%)患者血小板形態(tài)異常，其中以大血小板為主，共81例，占94.19%；血小板聚集3例，占3.49%；巨大血小板2例，占2.32%。檢出血小板形態(tài)正常214例(71.33%)。

2.2不同檢測(cè)方法測(cè)定血小板形態(tài)異常標(biāo)本的血小板計(jì)數(shù)比較86例血小板形態(tài)異常患者標(biāo)本手工法血小板計(jì)數(shù)為(113±35)×109/L，電阻抗法血小板計(jì)數(shù)為(87±31)×109/L，光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)為(110±33)×109/L。與手工法比較，電阻抗法血小板計(jì)數(shù)較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.379，P=0.000 0)；光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)也較低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.578，P=0.563 8)。

2.3不同檢測(cè)方法測(cè)定血小板形態(tài)正常標(biāo)本的血小板計(jì)數(shù)比較214例血小板形態(tài)正常患者標(biāo)本手工法血小板計(jì)數(shù)為(127±38)×109/L，電阻抗法血小板計(jì)數(shù)為(125±35)×109/L，光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)為(122±36)×109/L。與手工法比較，電阻抗法與光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)均較低，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.566，P=0.571 5；t=1.379，P=0.163 0)。

3討論

目前，血小板計(jì)數(shù)的方法主要有電阻抗法、光學(xué)法、手工法和流式細(xì)胞術(shù)法等[2]。其中電阻抗法和光學(xué)法是Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的常用血小板檢測(cè)方法。電阻抗法運(yùn)用RBC/PLT通道，采用液路聚焦鞘流/DC檢測(cè)法，在同一通道內(nèi)通過顆粒大小對(duì)血小板和紅細(xì)胞加以區(qū)分。但血小板由于體積小，特別容易發(fā)生黏附聚集和變性破壞[3]，在計(jì)數(shù)時(shí)會(huì)被誤認(rèn)為紅細(xì)胞，導(dǎo)致結(jié)果偏低。而光學(xué)法專用RET/PLT-O通道，利用聚次甲基和噁嗪兩種熒光染料，透過細(xì)胞膜，對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA、RNA染色。在激光流式通道內(nèi)，663 nm波長的激光照射在細(xì)胞上，產(chǎn)生前向散射光、側(cè)向散射光，側(cè)向熒光進(jìn)行鑒別計(jì)數(shù)[4]。該方法對(duì)血小板的形態(tài)鑒別能力強(qiáng)，可避免如紅細(xì)胞碎片、小紅細(xì)胞和大血小板等因素的干擾[5-6]。手工法是世界衛(wèi)生組織推薦的參考方法[7]，應(yīng)用于我國臨床，采用10 g/L草酸銨液作溶血稀釋劑，在相差顯微鏡下計(jì)數(shù)血小板。該方法簡單，但也存在不足之處，如充池是否均勻，不可避免的人為誤差及計(jì)數(shù)血小板量少等。當(dāng)前，國際上使用流式細(xì)胞術(shù)作為血小板計(jì)數(shù)參考方法[8]，采用此方法測(cè)定經(jīng)單克隆抗體(CD41/61)標(biāo)記的全血血小板和紅細(xì)胞比值，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)法測(cè)量得出的紅細(xì)胞數(shù)來計(jì)算血小板參考值，但由于其操作繁瑣、儀器及試劑價(jià)格昂貴至今無法廣泛應(yīng)用于臨床。

本研究顯示，當(dāng)血小板形態(tài)出現(xiàn)異常時(shí)，電阻抗法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果較手工法和光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果低，且與手工法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而當(dāng)血小板形態(tài)及紅細(xì)胞形態(tài)正常時(shí)，電阻抗法和光學(xué)法血小板計(jì)數(shù)雖然較手工法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果低，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這表明在血小板形態(tài)出現(xiàn)異常時(shí)，采用電阻抗法檢測(cè)血小板的結(jié)果較真實(shí)結(jié)果低，不能很好地反映人體血小板狀態(tài)，易導(dǎo)致誤診。國內(nèi)相關(guān)研究也證實(shí)了這一點(diǎn)，李筱梅等[9]報(bào)道采用光學(xué)法的血細(xì)胞分析儀檢測(cè)低值血小板標(biāo)本，其結(jié)果與手工法一致性良好，且抗干擾能力強(qiáng)，偏差明顯低于電阻抗法。

當(dāng)前普遍使用的儀器檢測(cè)法為電阻抗法，此方法試劑成本低廉，可應(yīng)用于大批量標(biāo)本，但在計(jì)數(shù)血小板時(shí)易受血小板形態(tài)的干擾，尤其是對(duì)血小板明顯減少和(或)形態(tài)異常者，使結(jié)果誤差較大[10]。而光學(xué)法正好彌補(bǔ)了這一缺陷，對(duì)細(xì)胞碎片、小紅細(xì)胞、大血小板和乳糜微粒等抗干擾能力強(qiáng)。因此，為了保證血小板計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性，采用電阻抗法的血細(xì)胞分析儀出現(xiàn)血小板直方圖異?；騼x器報(bào)警及結(jié)果異常時(shí)，應(yīng)采用光學(xué)法或手工法進(jìn)行復(fù)查。

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(收稿日期：2015-12-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.057

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1673-4130(2016)05-0697-02