陳唯　楊元　張芳　李煥娟　孔靜　申立峰　王亞利　譚立　趙博　劉璐　張?jiān)〗G艷　石任兵

100102　北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥經(jīng)典名方有效物質(zhì)發(fā)現(xiàn)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室[陳唯(碩士研究生)、楊元(碩士研究生)、張芳(碩士研究生)、李煥娟(碩士研究生)、孔靜(碩士研究生)、王亞利(碩士研究生)、譚立(碩士研究生)、趙博(碩士研究生)、劉璐(碩士研究生)、張?jiān)?碩士研究生)、姜艷艷、石任兵]；首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院[申立峰(碩士研究生)]；北京市教委中藥質(zhì)量控制技術(shù)工程中心(姜艷艷、石任兵)

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·論著·

基于酚類特征圖譜的人參質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析研究

陳唯楊元張芳李煥娟孔靜申立峰王亞利譚立趙博劉璐張?jiān)G艷石任兵

100102北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥經(jīng)典名方有效物質(zhì)發(fā)現(xiàn)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室[陳唯(碩士研究生)、楊元(碩士研究生)、張芳(碩士研究生)、李煥娟(碩士研究生)、孔靜(碩士研究生)、王亞利(碩士研究生)、譚立(碩士研究生)、趙博(碩士研究生)、劉璐(碩士研究生)、張?jiān)?碩士研究生)、姜艷艷、石任兵]；首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院[申立峰(碩士研究生)]；北京市教委中藥質(zhì)量控制技術(shù)工程中心(姜艷艷、石任兵)

【摘要】目的建立基于酚類特征圖譜的人參質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析方法與評(píng)價(jià)模式，為有效精準(zhǔn)地評(píng)價(jià)人參質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。方法運(yùn)用HPLC-PDA法表征人參酚類特征圖譜中13個(gè)特征峰及其所屬化學(xué)類型，對(duì)16批人參飲片進(jìn)行質(zhì)的表征；建立HPLC同時(shí)測(cè)定對(duì)羥基苯甲酸、阿魏酸、槲皮素、山奈酚、異鼠李素含量的方法，并表征酚類成分和指標(biāo)；建立可見(jiàn)分光光度法測(cè)定人參飲片中總酚的含量，基于酚類成分及其和指標(biāo)與總酚的含量對(duì)16批人參飲片進(jìn)行量的表征；對(duì)人參中各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量的關(guān)聯(lián)性、質(zhì)量表征規(guī)律進(jìn)行分析，并基于參比飲片(批號(hào)16)對(duì)16批人參質(zhì)與量的表征結(jié)果進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析。結(jié)果16批人參酚類特征圖譜中均含有13個(gè)特征峰，其中酚酸類10個(gè)，黃酮類3個(gè)；得出酚類有效指標(biāo)性成分與總酚含量的相關(guān)系數(shù)范圍及各成分含量分布規(guī)律，并得出各批次人參飲片中各成分含量與參比飲片比較的總體含量變化趨勢(shì)及關(guān)聯(lián)度。結(jié)論所建立的基于酚類特征圖譜的人參質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析模式，為關(guān)注人參質(zhì)量整體關(guān)聯(lián)性與應(yīng)用有效性及有效精準(zhǔn)地評(píng)價(jià)人參飲片質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】人參；特征圖譜；質(zhì)量評(píng)價(jià)；關(guān)聯(lián)分析；酚酸類指標(biāo)；黃酮類指標(biāo)；總酚

人參為五加科植物人參PanaxginsengC.A.Mey.的干燥根和根莖，具有大補(bǔ)元?dú)?，?fù)脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津養(yǎng)血，安神益智等功效，其化學(xué)成分包括皂苷、多糖、揮發(fā)油、有機(jī)酸及其酯、蛋白質(zhì)、甾醇及其苷、生物堿、黃酮、木質(zhì)素、無(wú)機(jī)元素以及維生素等[1-2]。銀荷方為課題組擬定的臨床經(jīng)驗(yàn)方，基于藥物體系導(dǎo)向，在對(duì)其藥學(xué)-藥效質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析研究中，筆者發(fā)現(xiàn)組方藥味人參中酚類成分(主要為酚酸類和黃酮類成分)為銀荷方活血止血藥物體系架構(gòu)組成之一。因此，本文對(duì)基于酚類特征圖譜的人參質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析研究進(jìn)行報(bào)道。

2015版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)以人參皂苷Rg1與人參皂苷Re的總含量以及人參皂苷Rb1的含量規(guī)定指標(biāo)作為人參的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3]。目前文獻(xiàn)報(bào)道中，已有對(duì)人參中山奈酚和總黃酮含量測(cè)定的研究[4-5]，但未見(jiàn)人參中酚酸類成分的報(bào)道，筆者在人參中發(fā)現(xiàn)對(duì)羥基苯甲酸和阿魏酸及酚酸類的存在，并通過(guò)酸水解后發(fā)現(xiàn)人參黃酮類成分的三個(gè)黃酮苷元槲皮素、山奈酚、異鼠李素，進(jìn)而建立HPLC同時(shí)測(cè)定人參中酚類對(duì)羥基苯甲酸、阿魏酸、槲皮素、山奈酚、異鼠李素含量的方法，并以阿魏酸為質(zhì)量表征標(biāo)尺，通過(guò)主要酚酸類成分峰面積和表征主要酚酸類成分的含量，以水解后槲皮素、山奈酚、異鼠李素含量和表征黃酮類成分含量；以酚酸類含量和與黃酮類含量和的加和表征酚類含量和；并且建立可見(jiàn)分光光度法測(cè)定人參中總酚的含量。誠(chéng)然對(duì)藥物質(zhì)量的控制不僅僅只考量指標(biāo)性成分，還應(yīng)表征特性有效指標(biāo)性成分及其有關(guān)類型總含量，更應(yīng)關(guān)注相對(duì)含量及其相對(duì)比值表征，同時(shí)結(jié)合特征圖譜關(guān)注質(zhì)量表征的完整性[6-7]。本研究以此為切入點(diǎn)，運(yùn)用課題組建立的基于藥物體系的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)模式[8-18]，對(duì)基于酚類特征圖譜的人參質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析研究，即基于酚類特征圖譜，關(guān)注特征峰化學(xué)類型及其關(guān)聯(lián)性，并對(duì)人參飲片中對(duì)羥基苯甲酸、阿魏酸、主要酚酸類含量和、槲皮素、山奈酚、異鼠李素、黃酮類含量和、酚類含量和、總酚的含量及其相對(duì)比值進(jìn)行質(zhì)量表征，且與經(jīng)過(guò)藥效驗(yàn)證的參比飲片(批號(hào)16)進(jìn)行關(guān)聯(lián)度分析比較，并對(duì)人參中各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量的關(guān)聯(lián)性、質(zhì)量表征規(guī)律進(jìn)行分析，以期為提高人參飲片質(zhì)量控制的精準(zhǔn)性奠定基礎(chǔ)[19-21]。

1材料

1.1儀器

Waters XbridgeTMC18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；Waters e2695高效液相色譜儀；Empower Pro軟件系統(tǒng)；2998PDA檢測(cè)器；METTLER-AE240型電子分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司)；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；TU-1810型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)。

1.2試劑與藥物

對(duì)羥基苯甲酸(批號(hào)：yy91251，純度≥98%)購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；阿魏酸(批號(hào)：121002，純度≥98%)購(gòu)自北京方程生物科技有限公司；槲皮素(批號(hào)：111672-200702，純度≥98%)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；山奈酚(批號(hào)：140708，純度≥98%)購(gòu)自成都普菲德生物技術(shù)有限公司；異鼠李素(批號(hào)：YY110860，純度≥98%)購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；聚酰胺樹(shù)脂(30～60目，柱層析用)購(gòu)自浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠；乙腈(色譜級(jí)，F(xiàn)isher Scientific公司)；甲醇(分析純，北京化工廠)； 鹽酸(分析純，北京化工廠)； 磷酸(分析純，北京化學(xué)試劑公司)；娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)；其余試劑均為分析純。

注：峰1對(duì)羥基苯甲酸；峰2阿魏酸；峰3槲皮素；峰4山奈酚；峰5異鼠李素；峰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ為未知酚酸類；峰a、b、c、d、e、i為未知成分；峰f、h為黃酮苷；峰g為阿魏酸和峰Ⅳ及黃酮類混合峰

圖1對(duì)照品及人參供試品水解前后的HPLC譜圖

16批人參飲片：購(gòu)自北京市、浙江杭州市、廣東省深圳市、湖北省武漢市各藥店。經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)劉春生教授鑒定，均為正品。飲片標(biāo)本現(xiàn)存于北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥化學(xué)系。

2方法與結(jié)果

2.1人參指標(biāo)性酚類成分含量測(cè)定方法

2.1.1色譜條件Waters C18色譜柱，流動(dòng)相乙腈(A)-0.2%磷酸水(B)，洗脫梯度(0～10分鐘，7%A；10～32分鐘，7%～19.5% A；32～60分鐘，19.5%～38% A)，流速1.0 mL/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：對(duì)羥基苯甲酸(254 nm)；阿魏酸(324 nm)；槲皮素、山奈酚、異鼠李素均為360 nm，進(jìn)樣量30 μL。

上述色譜條件下，對(duì)照品及人參樣品水解前后的HPLC譜圖見(jiàn)圖1，水解后對(duì)羥基苯甲酸(254 nm)、阿魏酸(324 nm)、槲皮素(360 nm)、山奈酚(360 nm)、異鼠李素(360 nm)及各酚酸類特征峰(324 nm)在各自檢測(cè)波長(zhǎng)下與其他色譜峰分離度良好。

2.1.2對(duì)照品溶液的制備方法分別取上述5種對(duì)照品適量，精密稱取，加入甲醇制成對(duì)羥基苯甲酸、阿魏酸、槲皮素、山奈酚、異鼠李素的濃度分別為0.01376 mg/mL、 0.0095 mg/mL、 0.01672 mg/mL、 0.051 mg/mL、 0.01688 mg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.1.3供試品溶液的制備方法取人參飲片粉碎，過(guò)四號(hào)篩，稱取約2 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入100 mL 70%甲醇，加熱回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，加水分散至50 mL，用已經(jīng)處理過(guò)的30～60目聚酰胺樹(shù)脂濕法裝柱，樹(shù)脂體積為25 mL，水洗0.5 BV，然后甲醇洗脫，收集甲醇洗脫液，蒸干溶劑，再加入甲醇-25%鹽酸溶液(4∶1)混合溶液5 mL，加熱回流40分鐘，放冷，加甲醇定容至5 mL容量瓶?jī)?nèi)，即得酸水解后供試品溶液。

2.1.4人參指標(biāo)性酚類成分含量測(cè)定方法學(xué)考察將“2.1.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液進(jìn)樣1 μL、2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL、30 μL，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)得出對(duì)羥基苯甲酸：Y=8833298.65X+6158.66(r=0.9999)，線性范圍0.01376～0.3440 μg；阿魏酸：Y=4157762.01X-12679.53(r=0.9999)，線性范圍0.0095～0.2850 μg；槲皮素：Y=3003601.61X-31893.96(r=0.9999)，線性范圍0.01672～0.5016 μg；山奈酚：Y=3925859.81X-118060.23(r=0.9999)，線性范圍0.05100～1.5300 μg；異鼠李素：Y=3021260.71X-28782.89(r=0.9999)，線性范圍0.01688～0.5064 μg。該方法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率均合格。

2.2人參總酚含量測(cè)定方法

2.2.1對(duì)照品溶液的制備方法精密稱取一定量的阿魏酸對(duì)照品，置于10 mL容量瓶?jī)?nèi)，用70%甲醇定容至10 mL，制得阿魏酸對(duì)照品的濃度為0.201 mg/mL。

2.2.2供試品溶液的制備方法取人參飲片粉碎，過(guò)四號(hào)篩，稱取約0.1 g，加70%甲醇25 mL，稱定重量，超聲(功率500 W，頻率40 KHz)提取1小時(shí)，再次稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足損失的重量，即得供試品溶液。

2.2.3顯色方法精密吸取供試品溶液適量，置于25 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇至5mL，隨行空白，再依次加入0.3%十二烷基硫酸鈉溶液2.0 mL，0.6%三氯化鐵-0.9%鐵氰化鉀(1∶1)混合溶液1.0 mL，暗處放置5分鐘，用 0.1 mol/L鹽酸定容至25 mL刻度線，搖勻后于暗處?kù)o置30分鐘，于768 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值[22]。

2.2.4人參總酚含量測(cè)定方法學(xué)考察精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的阿魏酸對(duì)照品0.03 mL、0.06 mL、0.09 mL、0.11 mL、0.14 mL、0.17 mL、0.20 mL、0.23 mL、0.26 mL、0.29 mL，按照“2.2.3”項(xiàng)下的方法進(jìn)行顯色。以對(duì)照品質(zhì)量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算回歸方程為：Y=17.98X-0.0324(r=0.9989)，線性范圍0.00603～0.00603 mg。且該方法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率均合格。

2.3人參質(zhì)的表征及其關(guān)聯(lián)性分析

2.3.1基于酚類特征成分的質(zhì)的表征取16批不同批號(hào)的人參飲片，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每批平行制備3份，進(jìn)樣，得到16批人參飲片酚類特征圖譜(254 nm)，見(jiàn)圖2。

2.3.2基于酚類特征成分的質(zhì)的表征關(guān)聯(lián)分析對(duì)酚類特征色譜圖中的各特征成分進(jìn)行相關(guān)性分析，選擇阿魏酸為基準(zhǔn)峰，計(jì)算其他酚類特征成分的相對(duì)保留時(shí)間，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4人參量的表征及其關(guān)聯(lián)性分析

2.4.1基于各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量的質(zhì)量表征取16批人參飲片，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每批平行制備 3 份，按照“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，分別測(cè)定酸水解后人參飲片中對(duì)羥基苯甲酸、阿魏酸、槲皮素、山奈酚、異鼠李素的含量；以阿魏酸為質(zhì)量表征標(biāo)尺，通過(guò)主要酚酸類成分峰面積和表征主要酚酸類成分的含量；以水解后槲皮素、山奈酚、異鼠李素含量和表征黃酮類成分含量；以酚酸類含量和與黃酮類含量和的加和表征酚類含量和；按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每批平行制備3份，按照“2.2.3”項(xiàng)下顯色方法，測(cè)定總酚的含量。對(duì)16批人參飲片的含量進(jìn)行質(zhì)量表征，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖2　16批人參飲片HPLC酚類特征圖譜

2.4.2基于各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量相對(duì)比值的質(zhì)量表征以阿魏酸的含量為參比，將16批人參飲片各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量相對(duì)于阿魏酸的比值予以表征，結(jié)果見(jiàn)表3；將各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量換算成同一數(shù)量級(jí)(即將對(duì)羥基苯甲酸、槲皮素、異鼠李素同時(shí)擴(kuò)大1000倍；將阿魏酸、山奈酚、黃酮類含量和同時(shí)擴(kuò)大100倍；將酚酸類含量和、酚類含量和同時(shí)擴(kuò)大10倍)，然后繪制各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量相對(duì)于阿魏酸的比值變化圖，見(jiàn)圖3。

2.5人參質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析

2.5.1各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量的關(guān)聯(lián)性分析基于“2.4.1”項(xiàng)下表2，將各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量換算成同一數(shù)量級(jí)，然后繪制各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚在不同批次間的含量變化趨勢(shì)圖，見(jiàn)圖4。

表2　16批人參飲片各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量質(zhì)量表征(%, n=3)

表3　16批人參飲片各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量相對(duì)于阿魏酸的比值

圖3　16批人參飲片各酚類成分及其和指標(biāo)

結(jié)合表2和圖4進(jìn)行分析，可知阿魏酸、酚酸類含量和、山奈酚、黃酮類含量和、酚類含量和與總酚含量變化趨勢(shì)一致，當(dāng)以阿魏酸為參比時(shí)，各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量相對(duì)于阿魏酸的比值范圍分別為0.18～0.72、38.96～53.49、0.064～0.25、1.37～2.06、0.075～0.27、1.54～2.49、40.75～55.94、165.22～332.57，即阿魏酸與總酚含量的相關(guān)系數(shù)范圍為165.22～332.57；結(jié)合表3和圖3進(jìn)行分析，其中60%批次對(duì)羥基苯甲酸與阿魏酸比值在0.43左右；60%批次酚酸類含量和與阿魏酸比值在36.14左右；60%批次槲皮素與阿魏酸比值在0.14左右；60%批次山奈酚與阿魏酸比值在1.61左右；60%批次異鼠李素與阿魏酸比值在0.15左右；60%批次黃酮類含量和與阿魏酸比值在1.84左右；60%批次酚類含量和與阿魏酸比值在45.23左右；60%批次總酚與阿魏酸比值在274.18左右。

圖4　16批人參飲片各酚類成分及其和

2.5.2各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚質(zhì)量表征分布規(guī)律分析基于“2.5.1”項(xiàng)下關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果，繪制16批人參飲片中阿魏酸、酚酸類含量和、山奈酚、黃酮類含量和、酚類含量和、總酚(均換算成同一數(shù)量級(jí))的含量分布規(guī)律圖，見(jiàn)圖5。

圖5　16批人參飲片各酚類成分及其和指標(biāo)

結(jié)合表2和圖5進(jìn)行分析，批號(hào)4、5、12、6、1為前30%的優(yōu)質(zhì)飲片，其酚酸類含量和不得低于0.09037%，酚類含量和不得低于0.09428%，總酚含量不得低于0.6308%；批號(hào)4、5、12、6、1、11、14、15、3、2為前60%的良好飲片，其酚酸類含量和不得低于0.07235%，酚類含量和不得低于0.07566%，總酚含量不得低于0.4563%；批號(hào)4、5、12、6、1、11、14、15、3、2、9、16、13、7、8為前90%的普通飲片，其酚酸類含量和不得低于0.05599%，酚類含量和不得低于0.05880%，總酚含量不得低于0.2005%，且由此可知經(jīng)過(guò)藥效驗(yàn)證的批號(hào)16為質(zhì)量普通的人參飲片。

2.5.3基于與參比飲片(批號(hào)16)各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量相對(duì)比值的質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析基于“2.4.1”項(xiàng)下表2，以批號(hào)16為參比，計(jì)算其它批號(hào)飲片中各酚類成分及其和指標(biāo)、總酚含量與參比飲片相應(yīng)成分含量的相對(duì)比值，進(jìn)行16批人參飲片質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析，見(jiàn)圖6。

結(jié)合表2和圖6進(jìn)行分析，可知在16批人參飲片中，各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量的差異較大，并計(jì)算最高比值與最低比值的比，以反映各飲片中酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量的差異。對(duì)羥基苯甲酸含量最大比值與最小比值之比為4.21，含量從高到低排序?yàn)椋?>14>12>1>13>9>4>5>15>11>3>16>8>10>6>7；阿魏酸最大比值與最小比值之比為2.77，含量從高到低排序?yàn)椋?>5>12>6>1>11>14>15>3>2>9>16>13>7>8>10；酚酸類含量和最大值與最小值之比為2.41，含量從高到低排序?yàn)椋?>5>12>6>1>11>14>15>3>2>9>16>13>7>8>10；槲皮素最大值與最小值之比為1.94，含量從高到低排序?yàn)椋?>12>14>3>11>7>15>10>5>6>2>16>4>13>8>9；山奈酚含量最大值與最小值之比為1.98，含量從高到低排序?yàn)椋?>5>12>6>1>11>14>15>3>2>9>16>13>7>8>10；異鼠李素含量最大值與最小值之比為2.06，含量從高到低排序?yàn)椋?>14>8>12>4>15>9>16>13>10>3>5>11>7>2>1；黃酮類含量和最大值與最小值之比為1.75，含量從高到低排序?yàn)?>5>12>6>1>11>14>15>3>2>9>16>13>7>8>10；酚類含量和最大值與最小值之比為2.38，含量從高到低排序?yàn)?>5>12>6>1>11>14>15>3>2>9>16>13>7>8>10；總酚含量最大值與最小值之比為4.52，含量從高到低排序?yàn)椋?>5>12>6>1>11>14>15>3>2>9>16>13>7>8>10。

圖6　16批人參飲片與參比飲片相應(yīng)成分含量的相對(duì)比值

綜合分析以上各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量的差異，得出總酚(4.52倍)>對(duì)羥基苯甲酸(4.21倍)>阿魏酸(2.77倍)>酚酸類含量和(2.41倍)>酚類含量和(2.38倍)>異鼠李素(2.06倍)>山奈酚(1.98倍)>槲皮素(1.94倍)>黃酮類含量和(1.75倍)。基于各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量進(jìn)行綜合考量，發(fā)現(xiàn)批號(hào)1、3、4、5、6、11、12、14、15中各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量總體高于參比飲片，批號(hào)2、9與參比飲片接近。

2.5.4基于與參比飲片(批號(hào)16)各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量相對(duì)比值的比值質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析基于“2.4.2”項(xiàng)下表3，以批號(hào)16為參比，將16批人參飲片中各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量相對(duì)比值與參比飲片對(duì)應(yīng)成分含量相對(duì)比值的比值進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，見(jiàn)表4、圖7。

圖7中不同顏色的矩形條代表各飲片中各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量相對(duì)比值與參比飲片對(duì)應(yīng)成分含量相對(duì)比值的比值，矩形條長(zhǎng)短與參比飲片相同顏色的矩形條長(zhǎng)短越相近，代表該飲片各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚含量比值與參比飲片越接近，即質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)密切。由圖6可看出，批號(hào)3、4、5、6、7、8、9、11、15與參比飲片的關(guān)聯(lián)度較高。與參比飲片質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)密切。以參比飲片為基準(zhǔn)，其他樣品與其相對(duì)比值的比值差值的絕對(duì)值之和，即為非關(guān)聯(lián)系數(shù)；非關(guān)聯(lián)系數(shù)與各酚類成分及其和指標(biāo)與總酚數(shù)目和的比值，即為非關(guān)聯(lián)度，進(jìn)而得到關(guān)聯(lián)度，以反映飲片質(zhì)量之間的關(guān)聯(lián)性，見(jiàn)表4。由表4可知，關(guān)聯(lián)度由高到低排序?yàn)?6(0/100%)>15(9.44/90.56%)>6(13.11/86.89%)>11(14.78/85.22%)>3(14.67%/85.33%)>5(16.22/83.78%)>7(17.67/82.33%)=9(17.67/82.33%)>8(19.78/80.22%)>4(20.44/79.56)>10(27.33%/72.67%)>12(28.22/71.78%)>13(37.33/62.67%)>1(41.56/58.44%)>14(45.22/54.78%)>2(58.89/41.11%)，即批號(hào)3、4、5、6、7、8、9、11、15與參比飲片的關(guān)聯(lián)度較高。

3討論

3.1樣品處理方式的選擇

本文報(bào)道旨在同一色譜條件下同時(shí)測(cè)定人參中酚酸類和黃酮類成分的含量，人參樣品在富集水解前可以檢測(cè)到對(duì)羥基苯甲酸、阿魏酸及其他酚酸類成分的存在，但是難以檢測(cè)到黃酮類成分，故通過(guò)聚酰胺樹(shù)脂進(jìn)行富集，富集后可以檢測(cè)到黃酮苷的存在，但是考慮到測(cè)定單個(gè)指標(biāo)性成分的含量難以全面對(duì)人參中黃酮類成分進(jìn)行質(zhì)量控制，故采用酸水解方式，將人參中黃酮苷類成分轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的苷元成分，即槲皮素、山奈酚、異鼠李素，以其含量和表征以槲皮素、山奈酚、異鼠李素為苷元的黃酮類成分的含量，更加準(zhǔn)確和全面。

3.2水解前后主要酚酸類及主要黃酮類成分的變化

由于254 nm處色譜圖較其他波長(zhǎng)處基線平穩(wěn)，分離度良好，且出峰多，故以此波長(zhǎng)處色譜圖為例討論人參飲片水解前后色譜峰變化。由圖1可知，未知峰中峰a、e、i水解后峰面積顯著減?。环錬、c、d、f、h水解后消失，其中峰f、h經(jīng)PDA分析推測(cè)為黃酮苷；峰g經(jīng)PDA以及結(jié)合水解后相應(yīng)保留時(shí)間處色譜峰分析推測(cè)，該峰為峰Ⅳ、峰2(阿魏酸)及黃酮苷的混合峰；峰Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ均為水解后產(chǎn)生，峰Ⅱ水解后峰面積有所增加，經(jīng)PDA分析推測(cè)峰Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ均為酚酸類成分。已知峰中峰1(對(duì)羥基苯甲酸)水解前后無(wú)明顯變化；峰3(槲皮素)、峰4(山奈酚)、峰5(異鼠李素)均為水解后產(chǎn)生，故推斷水解前人參中黃酮類成分主要以槲皮素、山奈酚、異鼠李素的苷類形式存在，而在水解后轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的苷元。

表4　16批人參飲片關(guān)聯(lián)度表征

圖7　16批人參飲片與參比飲片相應(yīng)

本文在自然藥學(xué)觀相關(guān)理論的指導(dǎo)下，基于藥物體系導(dǎo)向研究發(fā)現(xiàn)人參酚類(主要為酚酸類和黃酮類)及其特征指標(biāo)性成分(對(duì)羥基苯甲酸、阿魏酸、槲皮素、山奈酚、異鼠李素)，建立基于酚類特征圖譜的人參質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析方法，對(duì)16批人參的質(zhì)量進(jìn)行表征，得出酚類有效指標(biāo)性成分與總酚含量的相關(guān)系數(shù)范圍及各成分的含量分布規(guī)律，并基于參比飲片進(jìn)行質(zhì)量關(guān)聯(lián)度分析比較，得出各批次人參飲片中各成分含量與參比飲片比較的總體含量變化趨勢(shì)及關(guān)聯(lián)度。本文研究的基于酚類特征圖譜的人參質(zhì)量表征關(guān)聯(lián)分析方法綜合考量了人參應(yīng)用有效性及質(zhì)量關(guān)聯(lián)性，為有效精準(zhǔn)地評(píng)價(jià)人參質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。

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(本文編輯： 董歷華)

Quality characterization and correlation analysis based on phenolic characteristic spectrum of Panax ginseng

CHENWei，YANGYuan，ZHANGFang，etal.

KeyUnitofExploringEffectiveSubstancesofClassicalandFamousFormulasofStateAdministrationofTraditionalChineseMedicine，SchoolofChinesePharmacy，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China

【Abstract】ObjectiveBased on phenolic constituents to establish the quality characterization and correlation analysis method of Panax ginseng, and to lay the foundation for evaluating the quality of ginseng. MethodsHPLC-PDA method was used to characterize the 13 kinds of characteristic peaks and their chemical type of Panax ginseng, the quality of 16 batches of ginseng slices was characterized. The HPLC method was established to simultaneous detect the content of p-hydroxybenzoic acid, ferulic acid, quercetin, kaempferol and isorhamnetin, the content of the phenolics indicators were characterized, and visible spectrophotometry was established to detect the content of total phenols in Panax ginseng. The 16 batches of Panax ginseng’s content of phenolic components, relevant indicators and total phenolic was characterized. And analysis the regularity of the relevance and quality characterization of each phenolic components and its indicators of ginseng with the total phenolic content, then correlatively analysis the results of quantity and quality of 16 batches of Panax ginseng based on reference piece(No.16). Results In the 16 batch of phenolic compounds, 13 characteristic peaks were found, including 10 phenolic acids and 3 flavonoids; The correlation coefficient range and the distribution law of the content of the total phenolic content and the effective index of phenols were found, and the change trend and correlation degree of the total content and the reference compound in each batch of ginseng were found. ConclusionThe quality characterization and correlation analysis method of characteristic spectrum of Panax ginseng is based on phenolic constituents, it lays the foundation for the overall quality relevance and effective applicationand effective and accurate evaluation of the quality of ginseng pieces.

【Key words】Panax ginseng；Characteristic spectrum；Quality evaluation；Correlation analysis；Phenolic acids indicators；Flavonoids indicators；Total phenol

(收稿日期：2016-01-13)

Corresponding author：SHI Ren-bing， E-mail： shirb@126.com

【中圖分類號(hào)】R284

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1674-1749.2016.04.009

作者簡(jiǎn)介：陳唯(1990- )，女，2013級(jí)在讀碩士研究生。研究方向：中藥(復(fù)方)有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究與藥物創(chuàng)新。 E-mail：chenwei1507@126.com通訊作者： 石任兵(1957- )，博士，教授，博士生導(dǎo)師。研究方向：中藥(復(fù)方)有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究與藥物創(chuàng)新。E-mail：shirb@126.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家“十二五”科技支撐計(jì)劃(2012BAI29B06)；北京中醫(yī)藥大學(xué)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)資助項(xiàng)目(2011-CXTD-12)