鮑魚菇1號(hào)菌株耐硒特性研究

張柏松，宮志遠(yuǎn)，萬(wàn)魯長(zhǎng)，張海蘭，郭惠東，黃春燕

（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所，山東省植物營(yíng)養(yǎng)與肥料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南250100）

鮑魚菇1號(hào)菌株耐硒特性研究

張柏松，宮志遠(yuǎn)，萬(wàn)魯長(zhǎng)，張海蘭，郭惠東，黃春燕

（山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所，山東省植物營(yíng)養(yǎng)與肥料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東濟(jì)南250100）

鮑魚菇1號(hào)菌絲在不同培養(yǎng)基上對(duì)硒的耐受力不同，在PDA培養(yǎng)基上添加5ug/mlNa2SeO3·5H2O，對(duì)其菌絲生長(zhǎng)基本沒(méi)有影響，而添加10ug/mlNa2SeO3·5H2O，就可抑制其菌絲生長(zhǎng)；在液體培養(yǎng)基中添加1ug/ml Na2SeO3·5H2O，可以提高菌絲體產(chǎn)量，超過(guò)2 ug/ml即可抑制菌絲產(chǎn)量；而在棉籽殼固體培養(yǎng)基中添加200-600mg/kg Na2SeO3，菌絲生長(zhǎng)速度與對(duì)照相似，但現(xiàn)蕾時(shí)間提前2-3天，Na2SeO3濃度超過(guò)1200mg/ kg，則可顯著抑制菌絲生長(zhǎng)，延遲現(xiàn)蕾。

鮑魚菇1號(hào)；耐硒特性

硒是人體不可缺少的微量元素之一,耕作土壤缺硒是全世界廣泛存在的問(wèn)題，在我國(guó)有72%的國(guó)土為不同程度的缺硒區(qū)，形成食物鏈的普遍低硒狀態(tài)[1，2]。鮑魚菇作為一種食、藥兼用的珍稀食用菌，適合夏季栽培，高抗病蟲害，以鮑魚菇作為富硒載體，培養(yǎng)富硒鮑魚菇，即可避免夏季栽培普通食用菌易生病蟲害、產(chǎn)量低、品質(zhì)差、或被迫施藥造成農(nóng)藥殘留的缺點(diǎn)，又可提供富硒功能產(chǎn)品，成為餐桌新選擇。不同的鮑魚菇菌株對(duì)硒的耐受能力不同，本研究對(duì)前期研究篩選出的耐硒能力強(qiáng)，生物學(xué)效率較高的鮑魚菇1號(hào)菌株進(jìn)行了耐硒特性及馴化研究，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用該菌株提供科學(xué)的理論依據(jù)[3]。

1 材料和方法

1.1 供試菌種鮑魚菇1號(hào)，由本所選育。

1.2 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基:土豆200g，葡萄糖20g，瓊脂粉20g，蒸餾水1000mL。

液體培養(yǎng)基：土豆200g，葡萄糖20g，KH2PO41.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，蛋白胨3g，蒸餾水1000mL。

固體培養(yǎng)料：棉籽殼88g，麥麩10g,石灰1g,石膏1g,水130mL供試試劑 Na2SeO3·5H2O及其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 試驗(yàn)處理

1.3.1 平板培養(yǎng)：在PDA培養(yǎng)基中添加不同量的Na2SeO3·5H2O制成不同濃度的富硒培養(yǎng)基，用試管定量分裝20mL，滅菌后傾倒于直徑90mm的培養(yǎng)皿中，制成富硒培養(yǎng)基平板，備用。

取供試保藏菌種，挑取一小塊轉(zhuǎn)接至PDA平板培養(yǎng)基上，置于28℃下培養(yǎng)。當(dāng)菌落直徑長(zhǎng)至6～ 7cm時(shí)，在菌落邊緣打取直徑為5mm的菌圓片接種于各處理培養(yǎng)基平板上，置28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

1.3.2 液體培養(yǎng)：將系列濃度的Na2SeO3·5H2O溶液與定量液體培養(yǎng)基混勻,制成Na2SeO3·5H2O含量分別為：0、1、2、3、4、5、6、7、8、9ug/mL的培養(yǎng)基，分裝三角瓶，100 mL /250mL, 25℃，120rpm振蕩培養(yǎng)7天。

1.3.3 不同富硒固體培養(yǎng)料對(duì)鮑魚菇菌絲生長(zhǎng)的影響

將系列濃度的Na2SeO3溶液與定量固體培養(yǎng)料混勻，制成Na2SeO3含量分別為：0、200、400、600、800、1000、1200、1400、1600mg/Kg的培養(yǎng)基。分裝入22*200mm的大試管中，每支試管裝濕料20g。滅菌接種后置28℃恒溫箱培養(yǎng)，菌絲發(fā)滿試管后，置25-32℃下自然光照繼續(xù)培養(yǎng)，觀察各處理現(xiàn)蕾時(shí)間。

1.4 數(shù)據(jù)測(cè)定與統(tǒng)計(jì)

平板培養(yǎng)各處理于恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)至第3天時(shí)在菌落邊緣劃一條起始生長(zhǎng)線，繼續(xù)培養(yǎng)至菌落邊緣距培養(yǎng)皿邊緣約0.5-1cm時(shí)，在菌落邊緣再劃一條終止線，量取兩線之間的距離，計(jì)算菌絲日均生長(zhǎng)速度并觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)。

液體培養(yǎng)7天后，過(guò)濾收集菌絲體并烘干稱重、測(cè)定菌絲含硒量、計(jì)算硒回收率。

硒回收率=（富硒菌絲中含硒量-空白對(duì)照菌絲中含硒量）×富硒菌絲干重/（培養(yǎng)基中硒濃度*培養(yǎng)基體積）×100%

棉籽殼固體培養(yǎng)，當(dāng)菌絲封面并長(zhǎng)入料內(nèi)1-2cm時(shí)，沿著菌絲前端劃一條起始生長(zhǎng)線后，繼續(xù)培養(yǎng)，當(dāng)菌絲前段距培養(yǎng)料底部約1cm時(shí)，再劃一條終止線。測(cè)量起始線與終止線之間的距離，計(jì)算菌絲日均生長(zhǎng)速度。

2 結(jié)果與分析

2.1 鮑魚菇在不同濃度富硒平板培養(yǎng)基上的耐受力

由表1可以看出，在PDA培養(yǎng)基上添加5ug/ mlNa2SeO3·5H2O對(duì)鮑魚菇菌絲生長(zhǎng)基本沒(méi)有影響，添加10ug/mlNa2SeO3·5H2O即可抑制鮑魚菇菌絲生長(zhǎng)，隨著硒濃度的繼續(xù)增加，受抑制作用越大。

表1 不同濃度富硒平板培養(yǎng)基對(duì)鮑魚菇菌絲生長(zhǎng)的影響

2.2 不同濃度富硒液體培養(yǎng)基對(duì)鮑魚菇菌絲生長(zhǎng)的影響

由表2可知，培養(yǎng)液中添加1ug/mlNa2SeO3· 5H2O對(duì)鮑魚菇菌絲生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，當(dāng)Na2SeO3· 5H2O濃度高于2ug/ml時(shí)，即可抑制鮑魚菇菌絲生長(zhǎng)。鮑魚菇對(duì)硒具有較強(qiáng)的富集能力，隨培養(yǎng)液Na2SeO3·5H2O濃度的增加，菌絲含Se4+量增加，但同時(shí)菌絲產(chǎn)量降低，硒回收率亦降低。

表2 不同含硒量液體培養(yǎng)基對(duì)鮑魚菇菌絲生長(zhǎng)的影響

2.3 鮑魚菇在不同濃度富硒棉籽殼固體培養(yǎng)基上的耐受力

由表3可以看出當(dāng)Na2SeO3濃度為200mg/kg時(shí)對(duì)鮑魚菇菌絲生長(zhǎng)基本無(wú)影響，Na2SeO3濃度為400-1000mg/kg時(shí)，對(duì)菌絲生長(zhǎng)有輕微抑制作用，高于1200mg/kg時(shí)則有明顯抑制作用，Na2SeO3濃度為200-600 mg/kg時(shí)，可以促進(jìn)現(xiàn)蕾，超過(guò)1200 mg/kg則現(xiàn)蕾期延長(zhǎng)。

表3 鮑魚菇在富硒固體培養(yǎng)料上的生長(zhǎng)特性

3 結(jié)論與討論

本研究表明鮑魚菇菌絲在不同培養(yǎng)基中對(duì)硒的耐受力不同，在液體培養(yǎng)基中，鮑魚菇對(duì)硒的耐受力較低，在固體培養(yǎng)基中，對(duì)硒的耐受力較高。在PDA培養(yǎng)基上添加5ug/mlNa2SeO3·5H2O對(duì)鮑魚菇1號(hào)菌絲生長(zhǎng)基本沒(méi)有影響，添加10ug/mlNa2SeO3· 5H2O即可抑制鮑魚菇1號(hào)菌絲生長(zhǎng)；在液體培養(yǎng)基中添加1ug/ml Na2SeO3·5H2O可以提高菌絲體產(chǎn)量，超過(guò)2 ug/ml即可抑制菌絲產(chǎn)量；在棉籽殼固體培養(yǎng)基中添加200-600mg/kg Na2SeO3，菌絲生長(zhǎng)速度與對(duì)照相似，但現(xiàn)蕾時(shí)間提前2-3天，亞硒酸鈉濃度超過(guò)1200mg/kg，則可顯著抑制菌絲生長(zhǎng)，延遲現(xiàn)蕾。實(shí)際生產(chǎn)中可根據(jù)生產(chǎn)目的選用不同培養(yǎng)基配方進(jìn)行生產(chǎn)，以栽培獲得鮮食鮑魚菇子實(shí)體的栽培料中Na2SeO3添加量以10mg/kg為宜，此時(shí)子實(shí)體硒含量在0.25mg/kg左右，每人每日食用富硒鮑魚菇子實(shí)體200-1000g可滿足需求，每日食用不超過(guò)1600g可保證安全[3]。

經(jīng)硒馴化培養(yǎng)的菌種，能使其耐硒能力發(fā)生顯著的提高，因此若要提高鮑魚菇的富硒能力可先在低硒培養(yǎng)基上培養(yǎng)，再進(jìn)行富硒栽培[4，5]

[1]胡錦心.硒的生物學(xué)作用及臨床意義[J].藥學(xué)通報(bào),1988 （4): 203-206.

[2]譚見(jiàn)安.中國(guó)的醫(yī)學(xué)地理研究[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 1994，14-15.

[3]黃春燕，萬(wàn)魯長(zhǎng)，宮志遠(yuǎn)等.鮑魚菇富硒栽培適宜菌株篩選[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014,46（11）：54-56

[4]魏華，謝俊杰，傅金衡.靈芝富硒培養(yǎng)研究［J］.食用菌，1996,18（3）：7-8.

[5]凌宏通，曾振基，宋斌，等.蛹蟲草的富硒栽培技術(shù)初步研究［J］.中國(guó)食用菌，2006，25（4):52-53.

Exploration Selenite tolerance of Pleurotus abalones strain1

ZHANG Baisong，GONG zhiyuan，WAN Luzhang，ZHANG Hailan，GUO Huidong，HUANG Chunyan
（Institute of Agricultural Resources and Environment, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China Key Laboratory of Agro-Environment in Huang-Huai-Hai Plain, Ministry of Agriculture, Jinan Shandong 250100, China）

The Selenite tolerance of mycelium of Pleurotus ostreatus in different culture medium was investigated. The growth of mycelium in Potato-Dextrose-Agar solid medium with 5ug/ml Na2SeO3·5H2O was not influenced, while inhibited in solid medium with 10 ug/ml Na2SeO3·5H2O; the growth of mycelium in liquid medium with 1 ug/ml Na2SeO3·5H2O was promoted, while inhibited in medium with 2 ug/ml Na2SeO3·5H2O; The growth of mycelium in cotton seed hull solid medium with 200-600mg/kg Na2SeO3· 5H2O was similar as the control group, but the budding stage was delayed 2-3 days. However, the growth of mycelium in cotton seed hull solid medium with above 1200 mg/kg was inhibited obviously, and the budding stage was also delayed.

Pleurotus abalones strain 1;Selenite tolerance

Q-3

A

2095-7327（2016）-03-0026-03

張柏松（1962－），男，山東菏澤人，山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究員，從事食用菌栽培、病蟲害防治、農(nóng)業(yè)微生物等方面的研究。通訊作者：黃春燕。

山東省農(nóng)業(yè)良種工程項(xiàng)目“食用菌新品種選育”（2011LZ006-04)；山東省濟(jì)南市科技計(jì)劃專項(xiàng)“高溫富硒食用菌標(biāo)準(zhǔn)化高效栽培技術(shù)研究與開(kāi)發(fā)”（20100426）。

馮惟榘