徐文強 盧頔

摘 要 為分析槲皮素防治禽流感病毒感染試驗雞的作用，以78只60日齡試驗雞為研究對象，隨機分為6組，每組13只，1組、2組、3組試驗雞給予槲皮素，4組給予鹽酸金剛烷胺，5組與6組均不給藥，用藥24 h后，1～5組試驗雞攻毒，6組不攻毒，觀察14 d內(nèi)各組試驗雞禽流感發(fā)生情況及死亡情況，雞死亡后解剖尸體，觀察病理變化。結果顯示，1～5組試驗雞存活率低于6組試驗雞，且1～4組試驗雞存活率高于5組，差異具有統(tǒng)計學意義

（P<0.05）；1～4組試驗雞存活率相近，不具有統(tǒng)計學意義（P>0.05）。槲皮素具有一定的防治雞禽流感病毒感染的效果，可在養(yǎng)殖場中廣泛的應用。

關鍵詞 槲皮素；禽流感病毒；感染；防治

中圖分類號：S858.31 文獻標志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2016.29.039

禽流感屬于病毒性傳染病，可傳染多種家禽、野禽，引發(fā)原因為感染A型流感病毒。研究指出，禽流感病毒與人類流感病毒變異之間關系密切，同時，禽流感病毒表面抗原變異不斷進行，導致無法完全的交叉保護不同亞型的禽流感病毒，造成疫苗預防效果較差[1]。鹽酸金剛烷胺為預防流感的有效藥物，但在禽體內(nèi)殘留比較嚴重，而且可能會出現(xiàn)流感病毒耐藥毒株，因此在家禽中并不允許使用該藥物預防。槲皮素為黃酮類化合物，藥理活性包含多種，毒副作用不大，臨床應用價值非常高，有學者指出，槲皮素能夠防治雞禽流感病毒感染，本研究中探討了其防治作用。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗雞100只，購買自農(nóng)業(yè)科學院畜牧研究所種雞場，均為健康雞，3日齡，隔離喂養(yǎng)，至60日齡時試驗。

毒株：H5N1亞型禽流感病毒，來源于獸醫(yī)學院禽病教研室。

試驗藥物：鹽酸金剛烷胺、槲皮素Ⅰ溶液（單體純?nèi)芤海?、槲皮素Ⅱ溶液（單體純?nèi)芤海?、槲皮素復方溶液（槲皮素Ⅰ溶液的單體、槲皮素Ⅱ溶液的單體、其他助劑）。

1.2 方法

1.2.1 檢測試驗雞禽流感抗體

采集試驗雞心臟血，靜置，析出血清，試驗時采用HI方法及AGP方法，如H5禽流感抗體為陰性，則可使用。

1.2.2 預攻毒試驗

隨機抽取試驗雞5只，實施禽流感病毒攻毒，劑量為0.2×10-4 mL，肌注，注射后，如試驗雞發(fā)病，表明攻毒濃度恰當。

1.2.3 給藥方法

在可使用的試驗雞中隨機抽取78只，分為6組，每組13只。1組試驗雞給予槲皮素Ⅰ溶液，劑量為100 mg/kg雞體重，人工灌喂；2組試驗雞給予槲皮素Ⅱ溶液，劑量為100 mg/kg雞體重，人工灌喂；3組試驗雞給予槲皮素復方溶液，劑量為400 mg/kg雞體重，人工灌喂；4組試驗雞給予鹽酸金剛烷胺，在飲水中投放，劑量為50 mg/kg水，自由飲用；4組試驗雞均連續(xù)用藥5 d，5組與6組試驗雞均不給藥。

1.2.4 攻毒方法

用藥24 h后，1組、2組、3組、4組、5組試驗雞均給予攻毒，給予H5N1亞型禽流感病毒，每只劑量0.2×10-4 mL，肌肉注射；6組試驗雞不攻毒。

1.3 觀察指標

攻毒后14 d內(nèi)，對6組試驗雞的發(fā)病情況、死亡情況密切觀察，做好記錄。出現(xiàn)雞死亡后，對病死雞做出解剖，并進行病理檢查、病毒分離鑒定，觀察病理變化及分離結果。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS18.0統(tǒng)計分析，數(shù)（n）和率（%）表示計數(shù)資料，利用x2檢驗，P<0.05表明差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 試驗結果

經(jīng)觀察可知，1組、2組、3組、4組試驗雞死亡均出現(xiàn)在攻毒后5 d時，攻毒12 d后未出現(xiàn)雞死亡；5組試驗雞死亡出現(xiàn)在攻毒后3 d，攻毒后9 d后未再出現(xiàn)雞死亡；6組試驗雞未出現(xiàn)死亡。經(jīng)比較，1～5組試驗雞存活率低于6組試驗雞，且1～4組試驗雞存活率高于5組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；1～4組試驗雞存活率相近，不存在統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

注：與6組相比，*P<0.05；與5組相比，#P<0.05。

2.2 病死雞解剖檢查結果

解剖后發(fā)現(xiàn)，黏液大量存在于試驗雞氣管內(nèi)；出血部位包括腦膜、黏膜、脾胃乳頭、胰腺；灰白色壞死點可在胰腺上發(fā)現(xiàn)。經(jīng)病毒分離鑒定，病死雞的死亡原因均為禽流感感染。

3 討論

禽流感為雞禽常見病，可發(fā)生于春夏秋冬任何季節(jié)中，季節(jié)交替時發(fā)病率更高。禽流感多發(fā)于雞幼仔，尤其是20～35日齡，消化道、呼吸道、臟器組織為禽流感病毒主要的存在位置，通過呼吸等途徑，可傳染給健康雞，造成大范圍的爆發(fā)，影響雞的飼養(yǎng)[2]。

預防為主要的降低雞禽流感發(fā)生率的方法，除科學養(yǎng)殖、強化管理外，還應采取適當?shù)乃幬镱A防，保證雞的健康生長。鹽酸金剛烷胺預防雞禽流感病毒感染的效果已得到證實，但由于藥物會大量的殘留在雞體內(nèi)，因此，養(yǎng)殖雞并不允許采用該藥物預防[3]。近年來研究指出，槲皮素具有預防禽流感病毒感染的效果。槲皮素廣泛的分布在植物界中，含有槲皮素的植物種類大約在100種以上，多分布于花、葉及果實中。已有研究證實，槲皮素具有抗氧化、抗炎、抗有害微生物等生物作用，而且不會帶來較大的毒副作用，也不易發(fā)生耐藥性及有害殘留[4]。研究表明，雞生長過程中，給予其黃酮類化合物添加劑后，不僅生長性能可以得到提升，而且脂質代謝情況、消化吸收情況均可得到改善，促進雞的免疫能力提升，減少疾病的發(fā)生[5]。本研究試驗結果表示，對于H5N1亞型禽流感病毒感染，其發(fā)病時間、發(fā)病后的癥狀可在槲皮素作用下出現(xiàn)延緩及減輕，這說明，槲皮素具有一定的保護、治療禽流感感染雞的作用。

雞一旦感染禽流感病毒，極易造成大面積的傳染，嚴重影響雞的生長，甚至導致雞的大量死亡。預防雞禽流感過程中，可以采用槲皮素，經(jīng)人工灌喂或飲水中應用后，可發(fā)揮預防效果，降低雞禽流感發(fā)生率，同時，雞發(fā)生禽流感后，槲皮素能夠減輕癥狀的嚴重程度，減少病雞死亡，具有一定的防治雞禽流感的效果。

參考文獻

[1]馮香安，李垚，劉瑩，等.槲皮素作為飼料添加劑的急性毒性和致突變性評價[J].動物營養(yǎng)學報，2012，24（12）：2469-2475.

[2]李霞，張石蕊，劉耕，等.槲皮素的生理作用及其在雞生產(chǎn)中應用研究進展[J].飼料與畜牧，2015，9（4）：27-31.

[3]張寧，趙博偉，胡曉悅，等.槲皮素在畜禽生產(chǎn)中的應用[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊，2015，26（4）：68-70.

[4]高榮，閆濱.中藥抗病毒作用機制研究概況[J].山東中醫(yī)藥大學學報，2015，34（05）：480-483.

[5]邢世華，李曉波.清熱解毒類中藥抗病毒活性及作用機制研究進展[J].中國藥理學通報，2014，16（04）：464-468.

（責任編輯：趙中正）