●蔣姝婷

微柱凝膠技術(shù)應(yīng)用于ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗(yàn)價(jià)值評(píng)價(jià)

●蔣姝婷

目的：總結(jié)性探討分析微柱凝膠技術(shù)在ABO新生兒溶血病患兒輸血前的檢驗(yàn)價(jià)值。方法：采用228例疑似ABO新生兒溶血病患兒血標(biāo)本，分別采用傳統(tǒng)試管法和微柱凝膠技術(shù)進(jìn)行放散實(shí)驗(yàn)、間接抗人球蛋白試驗(yàn)以及直接抗人球蛋白試驗(yàn)，分析比較檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果：所有疑似ABO新生兒溶血病患兒中檢測(cè)出ABO新生兒溶血病患兒200例，微柱凝膠法的直接、間接抗人球蛋白試驗(yàn)以及放散試驗(yàn)陽(yáng)性檢出率分別為77%、91%、99%，傳統(tǒng)試管法的直接、間接抗人球蛋白試驗(yàn)以及放散試驗(yàn)陽(yáng)性檢出率分別為60%、67%、79%，三個(gè)方面的差異都較為明顯（P＜0.05）。結(jié)論：微柱凝膠技術(shù)相比于傳統(tǒng)試管法的檢測(cè)陽(yáng)性率高，值得在臨床工作中加大使用范圍。

微柱凝膠技術(shù)；ABO新生兒溶血病；傳統(tǒng)試管法；檢驗(yàn)價(jià)值

新生兒溶血病(HDN)是因?yàn)槟赣H體內(nèi)有IgG血型抗體能夠結(jié)合胎兒紅細(xì)胞從而導(dǎo)致的被動(dòng)免疫性疾病，如果不能對(duì)患者采取及時(shí)治療可導(dǎo)致并發(fā)癥的發(fā)生，嚴(yán)重的情況下導(dǎo)致患者的死亡[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年4月到2015年12月在我院診治的228例臨床表現(xiàn)為高膽紅素血癥且疑似新生兒溶血病患兒，男女比例為123：105，日齡是4h到10d.

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 傳統(tǒng)試管法

（1）放散試驗(yàn)：新生兒紅細(xì)胞洗滌三次后，加入抗A、抗B分型血清，之后混合均勻并離心，將上清液去除后洗滌3次，將約一半體積的生理鹽水加入，將其放置于37℃水浴中進(jìn)行充分分散，將分散液取出并和2%的抗人球蛋白混合均勻，之后離心觀察結(jié)果[2]。（2）間接抗人球蛋白試驗(yàn)：事先準(zhǔn)備3支干凈的試管，都放入2滴新生兒血清，再分別加入1滴配制好的5%的A,B,O型血液標(biāo)本所制成的紅細(xì)胞鹽水懸液，如果出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，可以說(shuō)明存在相應(yīng)抗體，如果沒(méi)有出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，則加入4滴抗IgG的抗人球蛋白血清，混合均勻后離心1分鐘，觀察有無(wú)凝集現(xiàn)象。（3）直接抗人球蛋白試驗(yàn)：新生兒的紅細(xì)胞采用生理鹽水洗滌3次，另外取出1支干凈試管，把抗人球蛋白血清和1滴配制好的濃度為5%的紅細(xì)胞鹽水懸液放入，混合均勻后離心1分鐘，觀察是否出現(xiàn)凝集反應(yīng)[3]。

1.2.2 微柱凝膠技術(shù)

放散試驗(yàn)：取500uL洗滌4次的壓積紅細(xì)胞置于試管中，并加入500uL的生理鹽水，將其56℃水浴中孵育l0分鐘，取出后離心5分鐘，離心轉(zhuǎn)速為2000r/min，取上清，將50uL標(biāo)準(zhǔn)A,B,0紅細(xì)胞分別加入微柱凝膠孔上，之后各加入50uL放散液，把此卡置孵育器37℃孵育15分鐘，取出離心3分鐘，離心轉(zhuǎn)速為1500r/min，結(jié)果判讀，以紅細(xì)胞聚集在凝膠中部或者凝膠帶上部為陽(yáng)性反應(yīng)[4]。（2）間接抗人球蛋白試驗(yàn)：將50uL標(biāo)準(zhǔn)A,B,0紅細(xì)胞分別加入微柱凝膠卡在相應(yīng)位置，之后將50uL患兒血清加入，把此卡置孵育器37℃孵育15分鐘，取出離心10分鐘，結(jié)果判讀同上；（3）直接抗球蛋白試驗(yàn)：取新生兒靜脈血，離心，取壓積紅細(xì)胞，用生理鹽水洗滌3次后配制成約0.5%到1%的紅細(xì)胞懸液，在微柱凝膠孔加入50uL紅細(xì)胞懸液，離心5分鐘，結(jié)果判讀同上[5]。

1.3 HDN檢驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)

3 項(xiàng)試驗(yàn)同時(shí)陽(yáng)性則患者為HDN；間接抗人球蛋白試驗(yàn)和/或直接抗球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性，然而放散實(shí)驗(yàn)陰性，則要結(jié)合臨床癥狀具體分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次臨床研究的所有計(jì)量資料、計(jì)數(shù)資料分別使用t檢驗(yàn)、卡方檢驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13.0，以P＜O.O5為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比兩種檢測(cè)方法抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率

兩種檢測(cè)方法抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率的差異較為明顯（P＜0.05）；詳見(jiàn)表1；

表1.對(duì)比兩組患者抗體放散試驗(yàn)陽(yáng)性率

3 討論

紅細(xì)胞表面上很多免疫系統(tǒng)都能導(dǎo)致新生兒溶血病，ABO血型系統(tǒng)是最為常見(jiàn)的，其主要原因?yàn)樘汉湍赣H的血型不合。臨床工作中檢測(cè)疑似新生兒溶血病時(shí)常采用放散試驗(yàn)、間接、直接抗人球蛋白試驗(yàn)，其中檢測(cè)紅細(xì)胞上抗原的類型時(shí)采用放散試驗(yàn)，血清中抗體具體類型以及是否存在抗體則采用間接抗人球蛋白試驗(yàn)，檢測(cè)紅細(xì)胞是否受到不完全致敏則采用直接抗人球蛋白試驗(yàn)[6]。傳統(tǒng)的試管法檢測(cè)時(shí)操作過(guò)程復(fù)雜，步驟繁多，干擾因素多，使最終檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差的可能性大。微柱凝膠法是一種新型的血清檢測(cè)方法，且其在新生兒溶血病的檢測(cè)中的使用越來(lái)越廣泛。檢測(cè)血清時(shí)，游離的紅細(xì)胞能夠自由穿過(guò)凝膠柱，然而抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)凝集的紅細(xì)胞因?yàn)轶w積過(guò)大，所以不能夠自由穿過(guò)凝膠柱的分子篩，凝集的紅細(xì)胞會(huì)在凝膠柱上懸浮，區(qū)分凝集紅細(xì)胞和游離紅細(xì)胞[7]。

本次臨床研究將傳統(tǒng)試管法和微柱凝膠技術(shù)同時(shí)運(yùn)用于ABO新生兒溶血病患兒輸血前的檢驗(yàn)中，結(jié)合本次臨床研究的結(jié)果，微柱凝膠法的直接、間接抗人球蛋白試驗(yàn)以及放散試驗(yàn)陽(yáng)性檢出率分別為77%、91%、99%，傳統(tǒng)試管法的直接、間接抗人球蛋白試驗(yàn)以及放散試驗(yàn)陽(yáng)性檢出率分別為60%、67%、79%，微柱凝膠技術(shù)在三個(gè)方面的檢驗(yàn)陽(yáng)性率都比傳統(tǒng)試管法高。所以微柱凝膠技術(shù)在ABO新生兒溶血病患兒輸血前的檢驗(yàn)中有更高的價(jià)值。

國(guó)內(nèi)外其他學(xué)者的研究也顯示了類似的結(jié)果，如馬靖貞[8]等學(xué)者的臨床結(jié)果顯示微柱凝膠法的直接、間接抗人球蛋白試驗(yàn)以及放散試驗(yàn)陽(yáng)性檢出率分別為81.4%、86.0%、90.7%，試管法的直接、間接抗人球蛋白試驗(yàn)以及放散試驗(yàn)陽(yáng)性檢出率分別為65.1%、72.1%、76.7%，可知微柱凝膠法在三個(gè)方面的檢驗(yàn)陽(yáng)性率都高于試管法，與本次臨床研究的結(jié)果是類似的。

綜上所述，微柱凝膠技術(shù)相比于傳統(tǒng)試管法的檢測(cè)陽(yáng)性率高，在ABO新生兒溶血病患兒輸血前檢驗(yàn)中的價(jià)值高，易觀察結(jié)果，值得在臨床工作中推廣使用。

(作者單位：河南省人民醫(yī)院 輸血科)

2014年河南省重點(diǎn)科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目” 編號(hào)是“142102310126”項(xiàng)目名稱“保存期內(nèi)紅細(xì)胞功能計(jì)量單位研究” 負(fù)責(zé)人“燕備戰(zhàn)”

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[2]黎海瀾,焦偉.ABO新生兒溶血病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法及臨床應(yīng)用[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2013，10(02)：200-202

[3]常靜秋.兩種微柱凝膠卡和試管法在臨床血型鑒定中的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育,2015,07(25)：27-29

[4]蔣峻峰.微柱凝膠免疫檢測(cè)法在新生兒溶血病中的應(yīng)用研究[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2014,11(17)：2362-2363

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[8]馬靖貞,郝愛(ài)兵.微柱凝膠法與試管法檢測(cè)新生兒溶血病免疫性抗體的比較[J].基層醫(yī)學(xué)論壇,2014,18(23)：3118-3119

Objective To summarize the discussion of microcolumn gel technique in ABO hemolytic disease of newborn children with blood transfusion before the test value. Methods the 228 cases of suspected ABO hemolytic disease of newborn children with blood samples, respectively, using the traditional tube method and micro column gel technology diffusion experiment, indirect anti human globulin test and direct anti human globulin protein test and analysis results were compared. Results all suspected ABO hemolytic disease of newborn children detect ABO hemolytic disease of newborn children with 200 cases, micro column gel method of direct and indirect anti people globulin test and elution test positive rate was 77%, 91%, 99% , traditional tube method of direct and indirect anti people globulin test and elution test positive detection rate were 60% and 67%, 79%, three aspects of the differences are more obvious (P ＜ 0.05). Conclusion the microcolumn gel technique compared to conventional tube test positive detection rate, it is worth in the clinical work increase the scope of use.

micro column gel technique; ABO hemolytic disease of newborn; traditional test tube method; test value