黃志寅，張瓊英，王玉芳，馮 哲，趙旭東2，呂龍寶2，陳文雄2，唐川君，龔 慧，胡 兵，唐承薇，譚慶華

（1.四川大學華西醫(yī)院消化內(nèi)科，成都 610041；2.中國科學院昆明動物研究所實驗動物中心，昆明 650223）

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獼猴全結腸內(nèi)鏡檢查方法與觀察

黃志寅1，張瓊英1，王玉芳1，馮 哲1，趙旭東2，呂龍寶2，陳文雄2，唐川君1，龔 慧1，胡 兵1，唐承薇1，譚慶華1

（1.四川大學華西醫(yī)院消化內(nèi)科，成都 610041；2.中國科學院昆明動物研究所實驗動物中心，昆明 650223）

【摘要】腹瀉是獼猴常見腸道癥狀，相關腸道病變資料多源于獼猴尸檢，尚無成功腸鏡檢查報告。本文旨在建立獼猴全結腸內(nèi)鏡檢查方法及獲得獼猴全結腸內(nèi)鏡圖像。8只獼猴無＞2月的慢性腹瀉史，管喂芒硝后，結腸清潔度符合內(nèi)鏡觀察需求。采用電子消化內(nèi)鏡對獼猴全結腸進行觀察，操作時間約10～20 min/只。4只動物結腸無明顯異常病變，僅部分結構與人類有輕微差異。在4只＜1 d輕瀉的獼猴中，內(nèi)鏡觀察到結腸小片糜爛及潰瘍，其中1只存在明顯狹窄。術中及術后1周均無動物死亡。本文建立的獼猴全結腸內(nèi)鏡檢查安全有效，對及時診治獼猴結腸炎、評估藥物干預療效及提供優(yōu)質實驗動物具有重要意義。

【關鍵詞】獼猴；結腸內(nèi)鏡；結腸清潔度；內(nèi)鏡結腸圖像；腹瀉

結腸炎是獼猴的常見疾病，其腹瀉癥狀與腸道病變并不完全相符，部分有腹瀉獼猴的結腸黏膜不一定出現(xiàn)糜爛、潰瘍等病變，甚至正常，而無腹瀉癥狀獼猴的腸黏膜也不一定完全正常。結腸內(nèi)鏡檢查在診治各種人類結腸病變中發(fā)揮了非常重要的作用。

本研究旨在建立獼猴全結腸內(nèi)鏡檢查方法，并觀察獼猴結腸的內(nèi)鏡下形態(tài)，為獼猴消化道疾病診治及合格動物模型建立，提供先進可靠的方法。

1　材料和方法

1.1受試動物

成年獼猴8只，雄性5只，雌性3只，體重為4～5 kg，由中國科學院昆明動物研究所靈長類研究中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證：SCXK（顛）K2013-0005。所有動物檢疫均合格，無大于2月的慢性腹瀉史，其中4只動物輕瀉小于1 d，另4只無腹瀉癥狀。8只動物營養(yǎng)狀態(tài)均中等。實驗動物使用許可證：SYXK（顛）K2013-0012。

1.2內(nèi)鏡設備及相關藥物

胃鏡GIF-Q260J（日本，Olympus公司），圖像采集設備IMH-20（日本，Olympus公司），全自動內(nèi)鏡消毒機（日本，Olympus公司）。胃鏡及全自動內(nèi)鏡消毒機專用于動物檢查。復方氯胺酮（100 mg/支，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司），硫酸鈉（Na2SO4· 10H2O，芒硝，四川川眉芒硝有限責任公司），腸道準備前以0.2 g/mL濃度溶于飲用純凈水。腸鏡檢查在昆明動物研究所靈長類研究中心內(nèi)完成腸道準備。

獼猴禁食12 h，腸鏡檢查前3 h通過胃管注入芒硝溶液50 mL（0.2g/mL），此后每半小時管喂50 mL純凈水，管喂水總量150 mL（圖1）。待獼猴排泄糞便呈清水樣后，即可開始腸鏡檢查。將鏡下觀察腸道糞水情況分為3個等級：I級，全腸道無糞渣，只有少量清澈的液體；II級，腸腔內(nèi)有少量糞渣及或大量黃色糞水，經(jīng)吸引器能吸盡，不影響鏡下粘膜觀察及治療；III級，腸腔內(nèi)有大量糞渣或塊狀大便，經(jīng)吸引器不能吸盡，不能完成全結腸檢查［1］。I級和II級視為腸道準備清潔，III級視為不潔。

1.3結腸內(nèi)鏡操作方法

術前采用全自動消毒機對內(nèi)鏡及其附件常規(guī)消毒備用。對獼猴采用復方氯胺酮（6 mg/kg）肌內(nèi)注射麻醉，待獼猴肌肉松弛，睫毛反射消失后，將動物左側臥位置于檢查臺上。檢查者立于獼猴右側，單人操作［2］。內(nèi)鏡前端用石蠟油潤滑后，通過肛門進入獼猴腸道，依次通過直腸、乙狀結腸、降結腸、橫結腸、升結腸，回盲部，最終到達末段回腸。檢查全程錄像、采集圖片。腸道內(nèi)鏡檢查結束后，將動物放回籠內(nèi)，待其自然蘇醒。

2　結果

2.1獼猴腸道準備

8只獼猴管喂芒硝及純凈飲用水后，未發(fā)生嘔吐及誤嗆。管喂芒硝后獼猴首次排大便時間為（40 ±10）min；3 h時，大便均呈清水樣，無動物因嚴重脫水需要補液治療。內(nèi)鏡觀察，5只獼猴腸道殘余糞水量為I級，另3只則為II級。均能完成全結腸檢查。

2.2結腸內(nèi)鏡檢查

使用胃鏡（GIF-Q260J）單人操作，通過短縮腸管方法，完成獼猴的全結腸內(nèi)鏡檢查。操作方法基本與人體內(nèi)檢查相同，因獼猴乙狀結腸長度（平均16 cm）［3］明顯短于人類乙狀結腸，因此在乙狀結腸無需反復旋鏡短縮，找準腸腔走形保持腸鏡軸位，徐徐進鏡即可。在進鏡約60～70 cm即可到達回盲部，將鏡身前端調(diào)整至回盲瓣的前唇和后唇之間，輕輕上打螺旋，分開前后唇進入末段回腸。每只獼猴全程腸鏡操作時間約10～20 min；腸道殘余糞水量為II級者，體重較輕的獼猴，操作時間較長。

2.3獼猴內(nèi)鏡下的正常結腸形態(tài)

內(nèi)鏡觀察到4只動物的結腸無明顯異常病變，其中1只動物鏡檢前有小于1 d的輕瀉。當內(nèi)鏡到達回盲部時，內(nèi)鏡下測量全結腸長度約為60～70 cm。直腸呈細長管狀，腸壁光滑，未見與人類相似的亨氏瓣（圖1）。乙狀結腸長度在內(nèi)鏡下測量約10 cm，管腔狹窄彎曲，無半月皺襞（圖1）。

降結腸為全結腸中長度最長的一段腸管，內(nèi)鏡下測量約為30 cm，其半月皺襞細而矮（圖2）。橫結腸腔管徑較大，游離度較大，半月皺襞高而厚，以結腸帶附著部位為頂點呈三角形（圖2）。結腸肝曲及脾曲均可見到藍紫色肝臟及脾臟透見像。升結腸管腔由遠端向近端逐漸變寬，高而厚的皺襞呈正三角形（圖2）。

盲腸是獼猴全結腸管腔最粗大部分，其管腔直徑（4 cm）約乙狀結腸及直腸的3倍，呈類圓錐形。與人類不同的是，盲腸尖端未見闌尾孔?；孛ぐ晡挥诿つc側壁上，與人類略有差異的是，扁圓形的開口由前后唇圍成（圖3）。內(nèi)鏡通過回盲瓣開口進入末段回腸，在窄帶光譜成像技術（narrow band imaging，NBI）下，可見小腸絨毛樣上皮結構，未見Peyer淋巴結（圖3）。

2.4獼猴結腸炎的內(nèi)鏡下表現(xiàn)

在4只輕瀉小于1 d的獼猴中，內(nèi)鏡檢查發(fā)現(xiàn)直腸至橫結腸有散在分布的糜爛病灶，長徑約0.3 cm～0.6 cm/個，觸之易出血（圖4）。其中1只動物除上述病變外，腸道殘余糞水量為II級，因節(jié)段黏膜水腫，進鏡困難，升結腸存在明顯狹窄，鏡身不能通過，未能抵達回盲部。

2.5獼猴全結腸內(nèi)鏡檢查安全性

8只獼猴在腸鏡檢查期間處于良好的麻醉狀態(tài)，未追加復方氯胺酮劑量。心肺功能正常，氣道無阻塞。進鏡及退鏡過程中可有少許黏膜擦傷及出血，無穿孔及大量出血。內(nèi)鏡檢查結束至動物蘇醒平均約（14±4）min。術后1 h，動物開始進食。術后1周內(nèi)，動物進食、大便及活動無明顯異常。

圖1　內(nèi)鏡下觀察的獼猴直腸與乙狀結腸Fig.1 Endoscopic appearance of the rectum and sigmoid colon of a macaque

圖2　內(nèi)鏡下觀察的獼猴降結腸、橫結腸與升結腸Fig.2 Endoscopic appearance of the descending，transverse and ascending colon of a macaque

圖3　內(nèi)鏡下觀察的獼猴回盲部與末段回腸Fig.3 Endoscopic appearance of the ileocecum，distal segment of ileum and narrow-band imaging of the distal segment of ileum of a macaque

3　討論

獼猴作為非人靈長類動物，遺傳物質與人類非常接近，而且數(shù)量較多，分布較廣。作為人類的實驗替代品是最理想的實驗動物。近年來國內(nèi)外應用獼猴建立了如AIDS等各種動物模型［4］，進行神經(jīng)生理學、疫苗制備、轉基因研究、血液學、病毒學、免疫學、腫瘤學等生物醫(yī)學研究，優(yōu)質的實驗動物需求日益增加［5］。然而，不明原因慢性腹瀉在大型靈長類研究基地的年發(fā)病率高達5%，占腹瀉獼猴的25%［6］，對非人靈長類動物模型建立及藥物代謝研究都極為不利。迄今為止，多數(shù)文獻的數(shù)據(jù)來自獼猴死后尸檢［7］，難以適應該病的及時診治、前瞻性科學研究等需求。腸鏡對于人類結直腸疾病診治發(fā)揮了重大作用，雖有文獻探討過獼猴腸鏡檢查的方法及效果，但因沒有成功洗腸，觀察困難，實驗動物均在腸鏡后死亡［8］，建立獼猴腸鏡檢查方法因此具有重要意義。

圖4　內(nèi)鏡下觀察的獼猴結腸病變Fig.4 Colon alterations of macaques observed by colonoscopy

清潔腸道是進行內(nèi)鏡檢查前的一項重要工作。獼猴與人不同，難以主動飲入洗腸液，這是以往文獻中腸鏡前洗腸困難的原因。本研究采用管喂洗腸液，插管操作簡便易行，所有動物未出現(xiàn)嘔吐、反流誤吸、窒息、以及上消化道出血等癥狀。芒硝作為我國傳統(tǒng)中藥，主要成分是NaSO4·aSO2O?？诜笃淞蛩岣灰诪槟c道吸收，在腸腔形成高滲狀態(tài)，使腸腔水分增加造成機械性刺激，促進腸蠕動而起導瀉作用［9］。本研究表明，給獼猴管喂芒硝，腸道清潔程度基本達到I～II級，效果好、無明顯不良反應。

與以往獼猴腸鏡檢查不同的是，本研究采用GIF-Q260J胃鏡而非腸鏡，鏡身硬度適宜于小個體型的操作。當遇到腸腔狹窄時，GIF-Q260J胃鏡不能通過，提示今后應準備鼻胃鏡，以應對類似情況。由于獼猴個體較小，也許對用鼻胃鏡檢查結腸更為恰當，但尚需進一步嘗試與總結操作經(jīng)驗。

獼猴與人同屬靈長類，內(nèi)鏡下的結腸結構存在一些差異。人類的結腸帶在乙狀結腸與直腸移行部消失，結腸帶使結腸壁形成袋狀，腔內(nèi)可見半月皺襞及亨氏瓣。直腸的3個亨氏瓣對于在直腸內(nèi)判斷腹膜翻轉部位及與乙狀結腸交界部位具有重要作用。獼猴直腸未見亨氏瓣、乙狀結腸無半月皺襞，提示獼猴的結腸帶可能在降結腸遠端消失。

闌尾一直被認為是人類進化過程中退化的一個器官。但近年的研究表明，闌尾與機體的系列免疫功能有關，在維持腸道健康方面具有重要作用。闌尾被認為是腸道共生菌的貯存地，當腸內(nèi)共生菌群失衡時，貯存于闌尾的共生菌將迅速予以補充，促進腸道正常菌群恢復。闌尾切除術后患者中，潰瘍性結腸炎發(fā)生率明顯降低［10］。我們在獼猴腸鏡檢查中未發(fā)現(xiàn)獼猴有闌尾。以往獼猴大體解剖時，也未發(fā)現(xiàn)獼猴有闌尾［3］。這是否與獼猴雖可反復發(fā)生結腸炎，但卻難以進展為炎癥性腸病有關？如果缺少闌尾對炎癥性腸病的發(fā)生是保護性因素，獼猴的腸黏膜免疫值得深入研究。通過腸鏡在末段回腸進行檢查并活檢，可能是重要的研究手段。本文所建立的獼猴腸鏡檢查方法因此更顯必要。

總之，腸鏡檢查對于了解獼猴腸道病變是一種行之有效而安全的方法。能夠在不處死實驗動物的情況下，完成全結腸及部分末段回腸的觀察，取得活體組織標本。也可在治療后反復進行結腸鏡檢查，觀察治療效果。

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〔修回日期〕2015-12-12

Performance and colonoscopic observation in macaques

HUANG Zhi-yin1，ZHANG Qiong-ying1，WANG Yu-fang1，F(xiàn)ENG Zhe1，ZHAO Xu-dong2，LV Long-bao2，CHEN Wen-xiong2，TANG Chuan-jun1，GONG Hui1，HU Bing1，TANG Chen-wei1，TAN Qing-hua1
（Department of Gastroenterology，West China Hospital，Sichuan University，Chengdu 610041，China. 2.China Academy of Sciences Kunming Institute of Zoology，Kunming 650223）

【Abstract】Diarrhea is a common intestinal symptom in macaque.The corresponding intestinal lesions of macaque are mainly described at autopsy but less observed by colonoscopy.The aim of this study was to develop a colonoscopic technique and to obtain endoscopic images of the entire colon in macaques.Eight healthy adult macaques（5 males and 3 females）without diarrhea for 2 months，were fed Glauber's salt through nasogastric tubes.The colon cleanliness was well matched to the endoscopic observation of macaque colon.The procedure took 10-20 min for each animal.There was no obvious abnormality in the colon of four animals except some slight differences of mucosal structure from that of human beings.Small pieces of erosion and ulcer in the colons were observed in four macaques which presented mild diarrhea for less than 1 day，while a severe stenosis was observed in one of those four macaques.No animal died during and one week after the endoscopic procedure.Colonoscopy may safely performed in macaques.The images taken by colonoscopy may be important to establish diagnosis and treatment of colitis in macaques in time and to evaluate the efficacy of drug intervention as well.This technique is also helpful to provide qualified macaques for scientific researches.

【Key words】Macaque；Colonoscopy；Colon cleanliness；Endoscopic image，colon；Diarrhea

【中圖分類號】R-33

【文獻標識碼】A

【文章編號】1671-7856（2016）04-0068-04

doi：10.3969.j.issn.1671-7856.2016.04.012

［基金項目］國家自然科學基金國家（地區(qū)）合作與交流項目GZ1065。

［作者簡介］黃志寅，男，醫(yī)師，本科，研究方向：消化系統(tǒng)疾病。

［通訊作者］譚慶華，男，教授，博士，研究方向：消化系統(tǒng)疾病。