石斛多糖對腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞抗腫瘤作用的影響

薛達冰

（廣西醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院 廣西南寧 530021）

石斛多糖對腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞抗腫瘤作用的影響

薛達冰

（廣西醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院 廣西南寧 530021）

目的：探討石斛多糖對腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞抗腫瘤作用的影響。方法：利用石斛多糖和腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞（CTL）共同作用荷瘤小鼠，測量小鼠的腫瘤重量和觀察小鼠的生存期。結果：石斛多糖和腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞（CTL）共同作用能明顯抑制小鼠的腫瘤生長和延長小鼠的生存期。結論：石斛多糖能加強腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞（CTL）的抗腫瘤作用。

細胞毒性T淋巴細胞 石斛多糖 抗腫瘤

隨著腫瘤生物治療技術的發(fā)展，科學研究發(fā)現(xiàn)，在體外誘導出腫瘤特異性的細胞毒性T淋巴細胞（CTL）能產生明顯的抗腫瘤效應［1］，現(xiàn)在這種技術已經成為腫瘤生物治療領域的新方法［2］?，F(xiàn)在對于腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞的抗腫瘤研究主要集中在如何加強其殺傷腫瘤的功能。趙永靈等研究表明，石斛多糖能夠提高T淋巴細胞活性以及數(shù)量［3］。本文將探討石斛多糖對細胞毒性T淋巴細胞（CTL）抗腫瘤作用的影響，以期能發(fā)現(xiàn)一種提高細胞毒性T淋巴細胞抗腫瘤的新藥物。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和細胞

磷酸緩沖液、RPMI-1640細胞培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素、鏈霉素、小鼠粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（mGM-CSF）、小鼠白細胞介素-4（mIL-4）、石斛多糖、小鼠肝癌細胞系H22。

1.2 實驗方法

處死小鼠后，取出股骨，沖洗出骨髓中的細胞，收集細胞，裂解紅細胞后，在六孔板中加入10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基和50 ng/ml重組小鼠GM-CSF、5ng/ml重組小鼠IL-4，第八天加入利用液氮反復凍融法制備的小鼠肝癌細胞抗原，然后在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)培養(yǎng)18h，收集細胞用于后續(xù)的實驗。

無菌條件下處死小鼠后，取出小鼠的脾臟，制備單個脾細胞懸液，采用密度梯度離心法獲得單個核細胞。使用無菌的尼龍棉純化T淋巴細胞。將使用含IL-2的RPMI-1640完全培養(yǎng)基將T淋巴細胞重懸成2×106個/ml，于六孔板中進行培養(yǎng)，并加入2×105個/孔的負載肝癌細胞抗原的樹突狀細胞刺激T細胞增殖分化，37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6天，收集T淋巴細胞作為腫瘤特異細胞毒性T淋巴細胞用于后續(xù)實驗。

小鼠皮下接種小鼠肝癌細胞，待腫瘤長到5 mm直徑時將小鼠隨機分為4組，每組10只，分別設腫瘤特異CTL及灌胃石斛多糖組，另設注射PBS對照組，石斛多糖對照組，腫瘤特異CTL組。治療方法為腫瘤特異CTL每周腹腔注射2×106個/只，共治療三次，石斛多糖每天灌胃0.3g·kg-1，灌胃兩周。四周后觀察治療效果，用電子天平測量腫瘤的重量。記錄小鼠生存期。

1.3 統(tǒng)計學處理

統(tǒng)計學處理 采用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學數(shù)據(jù)分析，計量數(shù)據(jù)使用（±s）表示，組與組之間用方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 小鼠腫瘤重量及生存期

由表1結果可知，細胞毒性T淋巴細胞聯(lián)合石斛多糖治療組小鼠的腫瘤重量明顯比空白對照組、單用石斛多糖組、單用細胞毒性T淋巴細胞組輕，并且細胞毒性T淋巴細胞聯(lián)合石斛多糖治療組小鼠的生存期明顯比空白對照組、單用石斛多糖組、單用細胞毒性T淋巴細胞組要長。

表1 不同的治療方案的荷瘤小鼠的腫瘤重量及生存期（±s）

表1 不同的治療方案的荷瘤小鼠的腫瘤重量及生存期（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與石斛多糖組比較，▲P＜0.05；與CTL組比較，△P＜0.05

組別 　n 　　重量 （g） 　　生存期（d a y s）對照組 　1 0 　4 . 6 6 ± 0 . 1 1 　8 5 . 8 0 ± 1 . 1 7石斛多糖組 　1 0 　4 . 3 1 ± 0 . 1 0 * 　9 1 . 3 0 ± 1 . 0 7 * C T L組 　1 0 　3 . 9 1 ± 0 . 1 2 *▲ 　9 6 . 2 0 ± 0 . 8 4 *▲石斛多糖和C T L組 　1 0 　3 . 5 0 ± 0 . 0 8 *▲△ 　1 0 2 . 8 0 ± 1 . 4 9 *▲△

3 討論

腫瘤細胞能夠在體內不斷的惡性增殖，主要的原因在于它能夠逃避免疫系統(tǒng)的識別，使得體內不能產生特異殺傷腫瘤的細胞毒性T淋巴細胞。在體外利用腫瘤抗原沖擊樹突狀細胞，能夠誘導出腫瘤特異性的細胞毒性T淋巴細胞。體外獲得的細胞毒性T淋巴細胞回輸?shù)襟w內后，能夠提高體內的抗腫瘤免疫反應。有學者研究發(fā)現(xiàn)石斛多糖具有抑制腫瘤的細胞生長［4］以及提高機體免疫力［5］的作用。本文利用石斛多糖與腫瘤特異性的細胞毒性T淋巴細胞共同作用于荷瘤小鼠，發(fā)現(xiàn)荷瘤小鼠的腫瘤重量比其它對照組明顯輕，小鼠的生存時間比其它對照組明顯長。以上結果說明利用石斛多糖可以提高腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞抗腫瘤的效果，這也為臨床使用腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞為基礎的腫瘤免疫治療提供一個新的方向。

［1］Steinman R M， Banchereau J. Taking dendritic cells into medicine ［J］.Nature 2007， 449（7161），419-426.

［2］Banchereau J， Palucka AK. Dendritic cells as therapeutic vaccines against cancer［J］.Nat Rev Immunol 2005，5（4），296-306.

［3］Zhao YL ，Wang SL ，Li XY .Studies on the polysaccharides of Dendrobium aphyllum［J］.ActaBotYunnan 1994，16，392-396.

［4］馬國祥，徐國鈞.鼓槌石斛及其化學成分的抗腫瘤活性作用［J］.中國藥科大學學報，1994，25（3），188-189.

［5］宋寧，陸瑛，邱明華.球花石斛多糖免疫調節(jié)作用的研究［J］.天然產物研究與開發(fā)，2006，18，445-448.

R73

A

1674-2060（2016）02-0192-01

薛達冰（1989-），男，廣西北海人，在讀碩士，研究方向：腫瘤生物治療。