王　穩(wěn)　于善萍　劉曉虹

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尖銳濕疣患者宮頸HPV分型檢測(cè)

王穩(wěn)于善萍劉曉虹

尖銳濕疣(Condyloma acuminate, CA)是由人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirys, HPV)所引起的一種性傳播疾病，其發(fā)病率逐年上升，近年來(lái)受到廣泛關(guān)注。而宮頸癌是我國(guó)最為常見的惡性腫瘤之一，是我國(guó)女性第二大癌癥。HPV可分為高危型和低危型兩種，長(zhǎng)期持續(xù)感染高危型HPV可以導(dǎo)致宮頸癌，低危型HPV可導(dǎo)致生殖器CA。而且，有一定比例的低危型感染還伴有高危型混合感染。因此，對(duì)臨床的CA患者進(jìn)行宮頸HPV分型檢測(cè)，對(duì)于HPV感染的治療以及預(yù)測(cè)宮頸癌的發(fā)生具有重要意義。我們采用凱普導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)，采集CA患者的宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行HPV分型檢測(cè)，以探討此類患者宮頸HPV的感染狀況和基因型別。

1　材料與方法

1.1病例選擇218例患者來(lái)自2012年7月至2013年3月在我院女性科門診就診的患者，均因外陰贅生物，經(jīng)5%醋酸白試驗(yàn)陽(yáng)性臨床診斷為CA。年齡16～61歲，平均年齡28.5歲。其中29例患者宮頸有CA，121例患者伴有不同程度的宮頸糜爛。

1.2標(biāo)本采集按照凱普HPV DNA檢測(cè)法的要求，用無(wú)菌棉拭子擦凈宮頸口分泌物，將專用宮頸刷伸入宮頸口(鱗柱細(xì)胞交界)處，輕輕旋轉(zhuǎn)宮頸刷3至5圈取得脫落細(xì)胞，再將宮頸刷放入裝有細(xì)胞保存液和注明編號(hào)的樣本管中待檢。

1.3檢測(cè)方法采用凱普醫(yī)用核酸分子快速雜交基因分型試劑盒作HPV DNA檢測(cè)及分型。實(shí)驗(yàn)操作與結(jié)果判讀按試劑盒要求進(jìn)行：樣本HPV DNA提取-PCR擴(kuò)增-核酸分子快速導(dǎo)流雜交--顯色HPV基因分型。此檢測(cè)包括高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，和低危型HPV6、11、42、43、44、CP8304，共21個(gè)基因型。

2　結(jié)果

218例CA患者以21～30歲年齡段最多，HPV DNA檢出率最高年齡21～25歲，為74.63%，高危型檢出率最高年齡41～50歲，為50%。218例CA患者中有138例宮頸HPV DNA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，占63.30%。所檢測(cè)的21種HPV基因型中有20種被檢出，未發(fā)現(xiàn)HPV43型。檢出率最高是HPV11(24.31%，53/218)和HPV6(23.85%，52/218)，最低是HPV42、HPV44和HPV52(均為0.92%,2/218)，見表1。

3　討論

HPV是一種小分子雙鏈DNA病毒，主要感染人的皮膚或黏膜上皮細(xì)胞，引起感染部位的良惡性病變。根據(jù)不同基因型與癌發(fā)生的危險(xiǎn)性高低可分為：低危型HPV，常引起外生殖器濕疣、宮頸上皮內(nèi)低度病變(CIN1)等良性病變；高危型HPV，與宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)高度病變(CIN2/3)的發(fā)生相關(guān)。HPV基因芯片分型是目前最先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)，它采用PCR技術(shù)和基因芯片技術(shù)，利用PCR技術(shù)的高靈敏性、基因芯片的高通量和高特異性快速診斷HPV的感染。我們應(yīng)用該技術(shù)對(duì)CA患者的宮頸脫落細(xì)胞進(jìn)行HPV基因分型檢測(cè)，有以下發(fā)現(xiàn)：

1.外陰CA患者的宮頸HPV基因型以低危型為主，主要是HPV11(24.31%)和HPV6(23.85%)，但亦有一定比例的高危型感染(16.51%)和含有高危型感染的混合感染(18.35%)；宮頸有CA的患者宮頸HPV DNA的檢出結(jié)果均為陽(yáng)性，都有HPV6和/或HPV11,說明CA皮損中HPV基因型仍以低危型為主，另外高危型和混合感染均高于單純外陰CA患者。因此，對(duì)CA患者進(jìn)行HPV分型檢測(cè)非常必要。

2.35歲以后高危型HPV的持續(xù)感染是宮頸癌的直接原因，特別是同一型別高危型HPV的持續(xù)感染更易造成宮頸癌。本研究發(fā)現(xiàn)高危型檢出率高的年齡為40歲以上(50%)，與我國(guó)宮頸癌高發(fā)年齡在45～60歲相符。因此，對(duì)年長(zhǎng)的女性CA患者的宮頸進(jìn)行HPV基因型檢測(cè)尤為重要。

3.有學(xué)者認(rèn)為HPV多重感染者易出現(xiàn)持續(xù)感染，而高危型HPV持續(xù)感染可以導(dǎo)致宮頸癌。HPV感染主要通過性生活傳播，HPV多重感染可能與患者的性伴侶數(shù)或性伴侶的多性伴有關(guān)。本研究所選取的病例都是CA患者，所以多重感染率較高(37.68%)。

因此，在積極治療CA原發(fā)病灶的同時(shí)，還應(yīng)該檢測(cè)宮頸HPV的感染狀況及分型，以阻斷HPV的持續(xù)感染，預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。

[1] 陶萍萍,卞美璐.女性生殖道人乳頭瘤病毒基因型研究進(jìn)展[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志,2005,21(8):507-508.

[2] 施錚錚,楊孝軍,許張曄,等.外陰HPV感染患者中宮頸HPV分型檢測(cè)[J].溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,38(5):471-472.

[3] Ho GY, Burk RD, Klein S, et al. Persistent genital human papillomavirus infection as a risk factor for persistent cervical dysplasia[J]. J Natl Cancer Inst,1995,87(18):1365-1371.

(收稿：2013-07-01修回：2013-07-30)

大連市皮膚病醫(yī)院,116021

表1218例CA患者HPV基因型的分布情況

HPV基因型陽(yáng)性例數(shù)檢出率(%)HPV65223.85HPV115324.31HPV42/44/5120.92HPV81(CP8304)/45/6652.29HPV162210.09HPV1862.75HPV31/39/6873.21HPV3394.13HPV3531.38HPV52135.96HPV53/58125.50HPV56/5941.83

注：由于存在多重感染，1例患者可多次計(jì)數(shù)， 所有數(shù)據(jù)處理進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，P<0.05

138例HPV DNA陽(yáng)性樣本中，HPV單一型別感染86例(62.32%)，其中低危型60例(43.48%)，高危型26例(18.84%)，混合感染52例(37.68%)，有2例為低危型HPV6和HPV11的二重感染，50例為含有高危型的混合感染，包括二重感染26例(18.84%)，三重感染13例(9.42%)，四重感染7例(5.07%)，五重感染2例(1.45%)，六重感染2例(1.45%)。

29例宮頸CA患者的HPV DNA檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性，其中低危型(HPV6或/和HPV11)為20例(68.97%)，混合感染(HPV6或/和HPV11合并高危型)為9例(31.03%)。

121例合并宮頸糜爛的患者中有74例宮頸HPV DNA檢測(cè)為陽(yáng)性，占61.16%，含有高危型混合感染的有20例，占16.53%。