楚杜武，任軍偉，叢玉隆

（1.北京世紀(jì)壇醫(yī)院檢驗科，北京100038；2.兵器工業(yè)北京北方醫(yī)院檢驗科，北京100089；3.解放軍總醫(yī)院西院檢驗科，北京100853）

兩種血小板聚集分析儀檢測結(jié)果的分析比較

楚杜武1，任軍偉2，叢玉隆3

（1.北京世紀(jì)壇醫(yī)院檢驗科，北京100038；2.兵器工業(yè)北京北方醫(yī)院檢驗科，北京100089；3.解放軍總醫(yī)院西院檢驗科，北京100853）

目的 通過PL-11血小板分析儀（結(jié)果用最大聚集率，maximum aggregation rate，PL-MAR%表示）與光比濁法血小板聚集儀（light transmittance aggregometry，LTA，結(jié)果用血小板最大聚集率，LTA-MAR%表示）檢測結(jié)果的比較分析，探討兩種方法的優(yōu)略。方法 利用二磷酸腺苷（adenosine phosphate，ADP）誘導(dǎo)LTA的血小板聚集實驗，ADP誘導(dǎo)PL-11血小板分析儀的血小板聚集實驗。結(jié)果 ①對照組與患者組對比，LTA-MAR%，PL-MAR%參數(shù)有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.01）；②PL-MAR%與LTA-MAR%呈正相關(guān)（r=0.889）。結(jié)論 ①氯吡格雷有抗血小板聚集的藥物效果。②PL-11作為一種新型的血小板分析儀，檢測結(jié)果與LTA檢測結(jié)果相關(guān)性好，精密度高，可作為血小板聚集功能檢測的新途徑。

血小板聚集； PL-11； 光比濁血小板聚集儀； ADP

目前我國心血管疾病患者已超過2.7億，按全國人口14億計算，近5個中國人中就有1人患心血管疾病。隨著心血管病患者抗血小板藥物的廣泛使用，如何更有效、更準(zhǔn)確地掌握個體患者的服藥效果，科學(xué)地進(jìn)行個體化治療，就需要有更好的臨床檢驗監(jiān)測手段。目前，光比濁法血小板聚集儀（light transmittance aggregometry，LTA）在臨床上的使用率超過95%，是公認(rèn)的血小板聚集檢測的金標(biāo)準(zhǔn)［1］。當(dāng)前，市場上新推出了一種以電阻抗法連續(xù)監(jiān)測血小板數(shù)量判斷聚集情況的新型儀器PL-11。本文通過PL-11與LTA在血小板聚集功能方面的平行檢測、分析與探討，達(dá)到對PL-11檢測性能和方法學(xué)的深入了解，為臨床醫(yī)生提供一個抗血小板藥物藥效監(jiān)測及血小板功能檢測的新途徑。

材料和方法

1 儀器及試劑

CHRONO-LOG MODEL700血小板聚集分析儀及其配套試劑（美國CHRONO-LOG公司）；PL-11血小板分析儀及配套試劑（南京神州英諾華醫(yī)療科技有限公司）；Thermo IEC CL40離心機(jī)（美國Thermo公司）；SYSMEX XE-2100血細(xì)胞分析儀及其配套試劑（日本 Sysmex公司）；枸櫞酸鈉抗凝管（美國 BD公司）。

2 觀察對象及標(biāo)本采集

①隨機(jī)選取37例健康志愿者作為對照組，男性25例，女性12例；使用簡單隨機(jī)化（隨機(jī)數(shù)字表法）選取單服用氯吡格雷（75mg/d）10天以上的心腦血管病患者32例作為患者組，男性23例，女性9例（同時未服用其他抗血小板聚集類藥物）。②用3支3.8%枸櫞酸鈉抗凝真空采血管采集靜脈血，分別采集3mL。2支3mL樣本進(jìn)行LTA實驗；1支3mL樣本進(jìn)行英諾華PL-11血小板分析儀實驗。

3 方法

3.1比濁法血小板聚集儀實驗［2］（light transmmitance aggregometry） 使用10μmol/L二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）作為誘導(dǎo)劑，用血細(xì)胞分析儀測定富血小板血漿（platelet rich plasma，PRP）的血小板濃度，用貧血小板血漿（platelet poor plasma，PPP）調(diào)整PRP血小板濃度為（200～300）× 109/L［3］，檢測ADP誘導(dǎo)血小板聚集率。

3.2PL-11血小板分析儀實驗 將樣本置于儀器的待測試位置，按“檢測”鍵，等待測試完畢，打印結(jié)果。

4 主要觀察指標(biāo)

ADP誘導(dǎo)LTA測得血小板最大聚集率（LTAMAR%）；PL-11測 得 最 大聚 集率（maximum aggregation rate，PL-MAR%）。

5 統(tǒng)計學(xué)處理

用EXCEL2007整理數(shù)據(jù)，用SPSS13.0軟件包進(jìn)行對照組與患者組的配對t檢驗以及所有觀察對象2種測試方法測得參數(shù)的雙變量相關(guān)性分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1 對照組與患者組觀察指標(biāo)（參數(shù)）

LTA 測得的LTA-MAR%；PL-11測得的MAR%。請參見表1。

表1　LTA，PL-11測得對照組與患者組組參數(shù)對比（±s）

表1　LTA，PL-11測得對照組與患者組組參數(shù)對比（±s）

注：*代表非正態(tài)分布，用中位數(shù)表示，并用 Mann-Whitney兩獨立樣本秩和檢驗法；其余參數(shù)值均服從正態(tài)分布，用配對t檢驗

項目對照組患者組P 值結(jié)果LTA-MAR%71.4±13.844.5±14.2＜0.01有統(tǒng)計學(xué)差異PL-MAR%70.1±9.051（P50）*＜0.01有統(tǒng)計學(xué)差異

2 PL-MAR%，LTA-MAR%參數(shù)雙變量相關(guān)性分析

所有觀察對象的參數(shù)首先通過單變量方差分析進(jìn)行斜率差異性檢驗，結(jié)果均為P＞0.05，即直線斜率、截距無差異；然后進(jìn)行PL-MAR%，LTA-MAR%兩個參數(shù)雙變量相關(guān)性分析，得到r=0.889，即兩個參數(shù)相關(guān)性良好。

討論

血小板是血栓形成的重要因素，檢測血小板聚集功能對于早期血栓形成的風(fēng)險評估，闡明相關(guān)疾病的病理機(jī)制及臨床選擇正確的治療方案等有重要意義。

光學(xué)比濁血小板聚集功能檢測是將PRP置于比色杯中，加入誘導(dǎo)劑后，用涂硅小磁粒進(jìn)行攪拌，血小板逐漸聚集。光探測器接收這一血小板聚集反應(yīng)體系中連續(xù)變化的光信號，經(jīng)過轉(zhuǎn)換，最終將透射光的強(qiáng)度變化通過光強(qiáng)度-時間變化曲線描繪出來，就可直接通過圖表觀察到血小板聚集的全過程，以此反映出血小板聚集的速度、程度、血小板解聚等方面的參數(shù)和信息［4］。PL-11血小板分析儀是通過在抗凝全血中加入誘聚劑使血小板發(fā)生聚集，儀器均勻選取若干測試點測定非聚全血中的血小板數(shù)量，通過與ADP誘聚前最開始測得的兩次血小板數(shù)量平均值對比得出血小板聚集率，以此反映血小板聚集功能，所測參數(shù)有血小板最大聚集率（MAR%）、血小板最大聚集點（MAP%）、血小板平均聚集率（AAR%）、血小板數(shù)量、平均血小板體積（MPV）、紅細(xì)胞數(shù)量、平均紅細(xì)胞體積（MCV）7個參數(shù)。

本實驗中，首先，從表1結(jié)果可以看出健康對照組與患者組相比：LTA-MAR%、PL-MAR%參數(shù)在2組之間都有顯著性差異；這說明：①氯吡格雷具有一定的抗血小板聚集功能，只是藥效不是很強(qiáng)［5］。造成這種情況的原因很多，如遺傳變異性、患者依從性差、氯吡格雷劑量不足以及CYP3A4相關(guān)的藥物間相互作用等；②PL-11作為新型血小板分析儀，測得患者PL-MAR%結(jié)果的中位數(shù)是51（P50），與對照組MAR%結(jié)果70.1±9.0相比，約減低27%，同時LTA測得的LTA-MAR%約減低38%，兩者結(jié)果有可比性。分析可能的原因：①LTA使用的是離心血漿，它的檢測狀態(tài)與體內(nèi)全血的凝集狀態(tài)有一定差異，因為它去除了紅細(xì)胞參與聚集所產(chǎn)生的效果，而紅細(xì)胞對于體內(nèi)血栓的形成是十分重要的。

PL-11測得的PL-MAR%與LTA測得的LTAMAR%相關(guān)性良好（r=0.889），與關(guān)杰等［6］的結(jié)果一致。而目前國際上仍公認(rèn)LTA是血小板聚集功能檢測的金標(biāo)準(zhǔn)［1］。所以，兩種儀器檢測結(jié)果各參數(shù)之間的良好相關(guān)性證明了PL-11檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

綜上所述，PL-11作為新型的血小板聚集分析儀，通過對與LTA平行測定結(jié)果的研究分析，發(fā)現(xiàn)其有一定特點：①采用“自動連續(xù)檢測”的方法，直接對血樣中誘聚劑加入后血小板數(shù)量、體積的變化進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測，測得聚集前、后血小板數(shù)量的變化，計算得出血小板聚集功能水平，與LTA依靠光濁度變化間接信息推斷相比，檢測信號更加直接，干擾因素少，不受溶血、脂血、黃疸等標(biāo)本濁度的影響；②采用抗凝全血作為測試樣本，基本保持與體內(nèi)血液組成狀態(tài)一致，白細(xì)胞、紅細(xì)胞參與檢測過程，更符合體內(nèi)真實的血小板聚集狀況；③PL-11儀與LTA相比，準(zhǔn)確性較好，精密度更高；④儀器同時還能提供血小板平均體積（MPV）、紅細(xì)胞數(shù)量、平均紅細(xì)胞體積（MCV）等參數(shù)，一次測定，便可對樣本多個方面分析評價，更加全面。⑤儀器操作簡便、快速、檢測費用低廉。以上幾點，說明PL-11可以作為臨床醫(yī)生進(jìn)行抗血小板藥物藥效監(jiān)測，血小板聚集功能檢測的新途徑。

［1］任軍偉，張艷萍，叢玉隆，等.血栓彈力圖與光電比濁法檢測氯吡格雷抗血小板功能.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2014，29（6）：48-51.

［2］吳濤，劉景漢，李卉，等.亞硝基谷胱甘肽對冰凍血小板聚集及一氧化氮.中國實驗血液學(xué)雜志，2012，20（2）：386-389.

［3］譚大偉，朱平，李小鷹.氯吡格雷抑制血小板功能的兩種檢測方法比較：血小板聚集實驗與血小板膜糖蛋白檢測.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2007，11（11）：2021-2024.

［4］鄒雄，叢玉隆，陳瑜，等.臨床檢驗儀器.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，110-116.

［5］蔣娟娟，田蕾，韓璐璐，等.CYP2C9和CYP2C19基因多態(tài)性對健康中國人口服氯吡格雷后藥效動力學(xué)的影響.中國新藥學(xué)雜志，2011，20（13）：1217-1221.

［6］關(guān)杰，李莉，朱遠(yuǎn)，等.PL-11兩種誘導(dǎo)劑監(jiān)測健康人服用氯吡格雷后的血小板功能變化.解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2014，35（3）：238-241.

（潘子昂編輯）

Evaluation and Comparison of a Newly Developed Platelet Function Analyzer with Light Transmission Aggregometry

CHU Du-wu1，REN Jun-wei2，CONG Yu-long3
（1.Department of Clinical Laboratory，Beijing Shijitan Hospital，Beijing 100038，China；2.Department of Clinical Laboratory，Beijing North Hospital of China North Industries Group Corporation（CNGC），Beijing 100089，China；3.Department of Clinical Laboratory，West Building of Chinese PLA General Hospital，Beijing 100853，China）

Objective To evaluate the performance of PL-11 platelet function analyzer and compare it with LTA（light transmittance aggregometry）.Methods Use LTA（results shown as LTA-MAR%）and PL-11（results expressed as PL-MAR%）to test the platelet aggregation function in control group and clopidogrel patient group（patient group）at the same time.In the test，ADP were used as the agonist for PL-11<A system.Results①the results between control group and patients group were statistically different with both analyzers（P＜0.01）；② all the results of PL-MAR%and LTA-MAR%were positively correlated（r= 0.889）.Conclusion①Clopidogrel is effective drug in anti-platelet therapy.②The PL-11 platelet analyzer is a new platelet function analyzer，the results have a high correlation with the results of LTA.

Platelet aggregation； PL-11； Light transmittance aggregometry； ADP

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.09.031

2016-04-22；

2016-06-11

楚杜武、任軍偉為并列第一作者。楚杜武（1976—），男，主管技師，專業(yè)：醫(yī)學(xué)檢驗。E-mail：1575265282@qq.com；任軍偉，男，碩士研究生，主管技師，專業(yè)：臨床檢驗診斷學(xué)，免疫學(xué)。Tel：13661149064；E-mail：renjw678@126.com

叢玉隆，主任醫(yī)師，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究血液學(xué)、血栓與止血學(xué)。E-mail：yulongc@263.net