張 闊，洪壽海，何芹芹，馬思宇，王凝露，李 強，王慎軍，趙 雪，郭 義

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)實驗針灸學(xué)研究中心，天津 300193;2.浙江省中醫(yī)院，浙江 310006; 3.湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，湖南 412012)

大鼠清醒狀態(tài)下尾靜脈注射的快速操作技巧與體會

張 闊，洪壽海2，何芹芹1，馬思宇1，王凝露1，李 強3，王慎軍1，趙 雪1，郭 義1

(1.天津中醫(yī)藥大學(xué)實驗針灸學(xué)研究中心，天津 300193;2.浙江省中醫(yī)院，浙江 310006; 3.湖南中醫(yī)藥高等專科學(xué)校，湖南 412012)

目的介紹大鼠清醒狀態(tài)下尾靜脈注射的快速操作技巧與體會，提高操作成功率。方法采用自制大鼠束縛衣結(jié)合操作者輕按的方法固定大鼠，一人輔助固定，一人穿刺，一人注藥，在注射過程中盡量減少對鼠尾的損傷和對大鼠產(chǎn)生的應(yīng)激，嚴格規(guī)定進針點和穿刺次數(shù)，限制一次性最大給藥劑量和注射速度，并采取將進針與注射藥液的部位分開等方法避免藥物污的染和浪費。結(jié)果本法操作快速、可靠、穩(wěn)定、重復(fù)性好、動物配合度高。結(jié)論本法避免了藥物的浪費和污染，對于藥物昂貴的尾靜脈注射實驗此做法尤為推薦。

清醒;大鼠;尾靜脈注射

大鼠作為常用的實驗動物，在生物醫(yī)學(xué)研究中占據(jù)著重要的地位。大鼠尾靜脈注射是大鼠藥理、毒理實驗中常用的操作技能，其順利與否對于實驗結(jié)果具有重要影響。但大鼠尾靜脈較細小，操作比較困難，有時藥物難以順利注入。作者在長期實驗過程中，總結(jié)出大鼠清醒狀態(tài)下尾靜脈注射的快速操作技巧與體會，現(xiàn)介紹如下。

1 材料和方法

1.1 動物

SPF級健康雄性 Wistar大鼠，體重180±20 g，6～7周齡，來源于中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所實驗動物中心【SCXK(軍) 2014-0001】，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所飼養(yǎng)【SYXK(津)2014-0002】。

1.2 材料

自制大鼠束縛衣，酒精消毒棉球，醫(yī)用棉球，一次性使用靜脈輸液針(天津哈娜好醫(yī)材有限公司，針翼顏色:橙色，產(chǎn)品規(guī)格標記:0.5*20 TW SB，針管規(guī)格:0.5(25G))，一次性注射器，需注射的藥液，無菌PBS溶液，無粉乳膠手套(圖1)。

1.3 方法

整個操作由3人配合完成，分為甲、乙、丙。

1.3.1 大鼠固定、尾靜脈消毒:采用自制大鼠束縛衣固定大鼠(圖2)，輔助者甲一手將大鼠側(cè)臥位輕按于實驗臺上，另一手采用拇食二指捏住大鼠尾根固定，注意避開血管，減少大鼠因進針疼痛引起尾巴擺動而影響尾靜脈注射。乙負責(zé)主要操作，選取大鼠尾巴側(cè)面血管(理由見下文)，用酒精棉球擦試注射部位，達到清潔、消毒、擴張血管的作用。輔助者丙，將需要注射的藥液、無菌PBS溶液在無菌條件下分別吸入兩個不同的一次性注射器，并將吸有無菌PBS的注射器與一次性使用靜脈輸液針連接(圖3)備用。

1.3.2 進針:進針點為大鼠尾尖至尾根部的中下1/3交界處(理由見下文)，操作者(乙)左手拇食二指捏住鼠尾穿刺點兩側(cè)，固定并拉直鼠尾，右手持一次性使用靜脈輸液針(尾端已與吸入無菌PBS注射器連接)，針尖斜面向上，進針角度小于15度，深度為1-2毫米，刺入靜脈后，再平行靜脈進針，此時操作者手下應(yīng)有滑順感(圖4)，平行進針約5毫米后，操作者(乙)左手拇食二指從固定鼠尾穿刺點兩側(cè)轉(zhuǎn)而固定上下側(cè)，拇指在上、食指在下，捏住輸液針，防止從靜脈脫出，右手稍回抽注射器，見回血后，證明穿刺尾靜脈成功(圖5)，輕推無阻力即可開始注射藥液;若回抽無回血或見回血后輕推有阻力，證明針未刺入尾靜脈，可將輸液針退回至皮下，進行再次進針，或退針止血重新選擇穿刺點消毒后再進針。

1.3.3 注射與止血:尾靜脈穿刺成功后，注射藥液者(丙)左手捏緊一次性使用靜脈輸液針軟管A點，防止液體回流，右手將吸入藥液的一次性注射器經(jīng)B點(圖6)刺入，注意勿將軟管刺破，刺入后針尖方向應(yīng)指向輸液針刺入方向，然后緩慢推注藥液(圖7)。推注完畢后，左手松開折疊的軟管，囑操作者(乙)將無菌 PBS推注2毫升，促進藥液吸收入血(圖8)。無菌PBS推注完畢后，操作者(乙)左手持醫(yī)用棉球按壓注射點，右手輕緩?fù)酸?，按壓止?0s后(圖9)，將大鼠放回飼養(yǎng)籠。

2 結(jié)果

我們在實驗中總結(jié)的大鼠清醒狀態(tài)下尾靜脈注射的快速操作技巧，采用自制大鼠束縛衣結(jié)合操作者輕按的方法固定大鼠，一人輔助固定，一人穿刺，一人注藥，在注射過程中盡量減少對鼠尾的損傷和對大鼠產(chǎn)生的應(yīng)激，嚴格規(guī)定進針點和穿刺次數(shù)，限制一次性最大給藥劑量和注射速度，并采取將進針與注射藥液的部位分開等方法避免藥物污的染和浪費。此法操作快速、可靠、穩(wěn)定、重復(fù)性好、動物配合度高，希望對實驗研究人員提供一定的指導(dǎo)與幫助。

3 討論

3.1 大鼠固定方法

大鼠在麻醉或應(yīng)激條件下體內(nèi)神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)及其相關(guān)物質(zhì)會產(chǎn)生變化，在一定程度上影響實驗結(jié)果。因此，在大鼠尾靜脈注射過程中，如何在清醒狀態(tài)下減少對動物產(chǎn)生的應(yīng)激是需要注意的重要問題之一［1］，對此，在目前的實驗研究中，研究者們采取了多種大鼠固定方法，主要包括使用簡易自制裝置固定(如改裝礦泉水瓶或輸液瓶［2-5］，用深色布和木板制作裝置等［6］)，使用市售固定裝置固定(如有機玻璃筒形大鼠固定器等)，也有僅使用毛巾、棉紗手套等蒙住大鼠頭部后輕按大鼠固定等方法［7］。然而，有研究顯示，對于清醒大鼠的固定，輔助者輕按比使用固定器對大鼠產(chǎn)生的應(yīng)激較小，且固定器大小若選取不當(dāng)，可能會對大鼠的四肢、背部、睪丸部位等產(chǎn)生損傷［8］，因此，不使用固定器而采取輕按大鼠固定應(yīng)是清醒大鼠尾靜脈注射固定的最佳方法。但是，我們在實驗操作中發(fā)現(xiàn)，僅用毛巾、棉紗手套等蒙住大鼠頭部后輕按大鼠往往難以取得很好的固定效果，影響尾靜脈穿刺，因此，本方法采用自制大鼠束縛衣結(jié)合操作者輕按的方法，在盡量減少對大鼠產(chǎn)生應(yīng)激的同時又對起到了很好的固定作用，僅需簡單練習(xí)，即可掌握給大鼠穿衣的操作方法，熟練后在1 min之內(nèi)即可完成穿衣操作，方便快捷。大鼠束縛衣制作時應(yīng)選用深色而柔軟的布料，增加動物的舒適感。另外，本方法為避免單人操作耗時、不穩(wěn)定的情況，專門設(shè)置一名輔助者輔助固定已穿束縛衣的大鼠，保證了操作的效率及穩(wěn)定性。

圖1 實驗用品Fig.1 Experimental items

圖2 自制大鼠束縛衣固定大鼠Fig.2 Fix the rat with the self-made binding clothes

圖3 大鼠固定、尾靜脈消毒Fig.3 Hold the rat，and sterilize the skin

圖4 進針Fig.4 Insert the needle

圖5 固定輸液針，回抽注射器見回血Fig.5 Fix the transfusion needle，aspirate，to see if blood appears.back pumping syringe see return blood

圖6 藥液注射定位Fig.6 Location of injection

圖7 注射藥液Fig.7 Inject drug

圖8 無菌PBS沖管Fig.8 Sterile PBS flushing

圖9 止血與退針Fig.9 Hemostasis and withdrawal

3.2 鼠尾表面除垢及擴張血管

在已往文獻中提及的尾靜脈注射方法中，常建議用(40～50)℃的溫水擦洗鼠尾，以達到清潔鼠尾、擴張血管、便于穿刺的作用［9-11］。然而，有人認為鼠尾加熱會提高大鼠代謝率，影響實驗數(shù)據(jù)，如監(jiān)測不當(dāng)還會燙傷鼠尾，導(dǎo)致?lián)p傷［8］，可見，溫水擦洗不僅操作繁瑣耗時，而且可能對鼠尾甚至大鼠的整個生理狀態(tài)產(chǎn)生一定的影響，不建議使用。而我們在實驗過程中發(fā)現(xiàn)，用酒精棉球擦拭2～3次就可以很好的去除鼠尾表面污垢并使血管充盈，簡單快捷，且不影響大鼠生理狀態(tài)，在此推薦采用。

3.3 穿刺點的選取

大鼠尾靜脈有3根，左右兩側(cè)及背側(cè)各有一根，均可選取進行尾靜脈注射［12］，實驗過程中，我們發(fā)現(xiàn)兩側(cè)靜脈較易固定和進針，因此，建議進針部位選取鼠尾兩側(cè)靜脈，進針點選取鼠尾尖至尾根部的下1/3［13］，因為這個部位動脈和靜脈最為突出，不可太接近尾尖部，以免導(dǎo)致血管產(chǎn)生血栓和炎癥，顯著減少大鼠血管末梢的血流量［14］。此外，為減少對鼠尾的損傷，注射點應(yīng)從尾尖部逐漸移動根部，并左右血管交替穿刺。還應(yīng)注意，在同一進針點進針時應(yīng)注意給予足夠的時間使注射點鼠尾自身恢復(fù)。另外，盡量減少操作失誤，大鼠在一個注射時間點內(nèi)穿刺失誤次數(shù)不能超過3次。

3.4 注射劑量與速度

大鼠靜脈注射一次最大給藥劑量在4 mL左右，且注射速度應(yīng)不超過3 mL/min［13］，如注射劑量過多，注射液體的溫度應(yīng)被加熱至體溫，注射劑量太大或過快會導(dǎo)致心力衰竭、肺水腫。此外，為防止穿刺失敗浪費藥物，我們采用一次性輸液針尾端連接無菌PBS溶液進行回血測試，且1人穿刺，另1人在輸液針針尾1 cm處注射藥液，這樣的話，即使出現(xiàn)進針失敗或在注射過程中針頭脫出血管的情況，均可隨時停止注射，重新進針，避免了藥物的浪費和污染，對于藥物昂貴的尾靜脈注射實驗此做法尤為推薦。另外，在注射藥液完畢后，我們建議向靜脈中繼續(xù)推注2 mL無菌PBS，以促進藥液更快更充分的吸收入血。

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A quick operating technique and experience of tail vein injection in conscious rats

ZHANG Kuo1，HONG Shou-hai2，HE Qin-qin1，MA Si-yu1，Wang Ning-lu1，LI Qiang3，WANG Shen-jun1，ZHAO Xue1，GUO Yi1
(1.Research Center of Acupuncture and Moxibustion，Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China;2.Zhejiang Provincial Hospital of TCM，Zhejiang 310006;3.Hunan Traditional Chinese Medical College，Hunan 412002)

ObjectiveTo introduce the operation skills of tail vein injection in conscious rats，and improve the success rate of ingection.MethodsThe rat was fixed by the operator with a self-made binding clothes，one person assists to fix the rat tail，one person performs puncture，and one person performs injection.During the injection process，we should minimize the injury to the rat tail and the stress caused by operation，strictly limit the needle point，the number of puncture，the maximum dose and injection speed，and to make the needle position away from the injection site to avoid contamination and waste of the drug solution.ResultsThe operation method was successfully established and it was fast，stable，with good repeatability and high degree of coordination.Conclusion This operation is rapid，reliable and stable，worthy of recommendation，especially for the intravenous injection of expensive drugs.

Conscious rat;Tail vein injection

R-33

A

1671-7856(2016)12-0081-04

10.3969.j.issn.1671-7856.2016.12.016

2016-07-29

國家自然科學(xué)基金重點項目資助(編號:81330088);國家自然科學(xué)基金資助項目資助(81303025)。

張闊 (1988-)，博士，研究方向:經(jīng)穴的科學(xué)基礎(chǔ)，Email:zhangkuo1006@qq.com。

郭義 (1965-)，教授，研究員，博士生導(dǎo)師。Email:guoyi_168@163.com。