肥胖大鼠心外膜脂肪巨噬細(xì)胞數(shù)量和血清脂肪因子的研究

張彩坤 張豪英 邢冬杰

目的探討肥胖大鼠心外膜脂肪（EAT）巨噬細(xì)胞（M）數(shù)量和血清脂肪因子水平。方法18只SD大鼠隨機(jī)分為對照組9只和肥胖組9只，分別飼以基礎(chǔ)飼料和高脂飼料。80天后采血并取EAT。脂肪標(biāo)本行CD68抗體標(biāo)記的免疫組化檢測。檢測瘦素、脂聯(lián)素和內(nèi)臟脂肪素。結(jié)果肥胖組M數(shù)量高于對照組。與對照組相比，肥胖組脂聯(lián)素顯著降低，而內(nèi)臟脂肪素、瘦素顯著升高。肥胖組M數(shù)與內(nèi)臟脂肪素、瘦素呈正相關(guān)，與脂聯(lián)素呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論肥胖大鼠EAT M數(shù)增多，并與全身慢性炎癥關(guān)系密切。

肥胖；心外膜脂肪；巨噬細(xì)胞

心外膜脂肪（epicardial adipose tissue，EAT）作為一種心臟和冠狀動脈周圍的內(nèi)臟脂肪，近年逐漸受到重視[1]。脂肪組織慢性炎性反應(yīng)的重要標(biāo)志是巨噬細(xì)胞（macrophage，M）大量浸潤，M在慢性低度炎癥性疾病如動脈粥樣硬化的致炎機(jī)制中發(fā)揮重要作用[2]。本研究擬探討肥胖大鼠EAT中M和血清脂肪因子水平改變，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

以18只成年雄性SD大鼠為研究對象，隨機(jī)分為對照組9只和肥胖組9只，分別飼以基礎(chǔ)飼料和高脂飼料。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 脂肪因子檢測 80天后斷頭處死大鼠，采用ELISA法檢測血清瘦素、脂聯(lián)素和內(nèi)臟脂肪素。

1.2.2 免疫組化染色及M觀察 取EAT，常規(guī)石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片。所用抗體為兔抗鼠一抗（CD68抗體）和生物素標(biāo)記山羊抗兔二抗，常規(guī)行免疫組化染色。光鏡400×視野下每張切片隨機(jī)選取4個視野，計數(shù)M。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計分析。兩獨(dú)立樣本間比較用t檢驗(yàn)。M與脂肪因子行相關(guān)分析。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組間EAT M數(shù)量比較

肥胖組M數(shù)量為（45.6±22.5）/mm2，高于對照組的（21.8± 11.7）/mm2，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.357，P=0.000）。

2.2 兩組間血清脂肪因子比較

與對照組相比，肥胖組脂聯(lián)素顯著降低[（6.21±2.96）μg/mlvs. （8.57±3.43） μg/ml，t=2.204，P=0.040]，而內(nèi)臟脂肪 素 [（4.66±2.10） ng/mlvs. （3.05±1.48） ng/ml，t=2.497，P=0.031]、瘦素[（9.43±4.47） ng/mlvs. （6.33±3.65） ng/ml，t=2.722，P=0.018]顯著升高。

2.3 肥胖組M數(shù)量與脂肪因子相關(guān)性分析

肥胖組M數(shù)與內(nèi)臟脂肪素（r=0.203，P=0.034）、瘦素（r=0.258，P=0.015）呈正相關(guān)，與脂聯(lián)素（r=-0.239，P=0.019）呈負(fù)相關(guān)。

3 討論

先前關(guān)于動脈粥樣硬化的研究多專注于血管壁病變，而探討冠脈周圍脂肪組織對動脈粥樣硬化影響的研究較少。本研究探討了胸腔內(nèi)重要的內(nèi)臟脂肪組織EAT M數(shù)量，發(fā)現(xiàn)肥胖組EAT的M數(shù)顯著升高。前面學(xué)者[3]探討小鼠附睪脂肪M特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)肥胖小鼠M浸潤程度更為明顯，與本研究結(jié)果相似。陳新忠等以冠心病患者為研究對象[4]，結(jié)果示冠脈外膜有大量M浸潤，在外膜與血管外脂肪交界處可見明顯M聚集帶。從本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果推測，這些M可能來自于EAT，意味著M導(dǎo)致的EAT慢性炎癥參與了冠脈粥樣硬化的發(fā)生。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，肥胖組脂聯(lián)素水平顯著降低，而內(nèi)臟脂肪素、瘦素顯著升高，與前面的研究相似[5]。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，EAT中M數(shù)顯著相關(guān)于脂肪因子水平，提示M參與了肥胖大鼠的慢性全身炎癥。內(nèi)脂素主要來源于白色脂肪組織中的M[6]。瘦素是一種促炎因子，而脂聯(lián)素為一種抗炎因子，所以M數(shù)量與瘦素水平呈正相關(guān)，而與脂聯(lián)素呈負(fù)相關(guān)。新近研究證實(shí)，炎癥在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用[7-8]?？梢酝茰y，由于EAT與冠狀動脈密切的解剖關(guān)系，EAT可通過旁分泌等方式作用于冠狀動脈管壁，參與冠脈粥樣硬化的形成。因此，改善EAT的慢性炎癥是防治冠脈粥樣硬化的一個潛在靶點(diǎn)。

綜上所述，本研究表明，肥胖大鼠EATM數(shù)量增多，并且與全身慢性炎癥關(guān)系密切。

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Study on Macrophage in Epicardial Adipose Tissue and Serum Fatty Cytokine Level in Obese Rats

ZHAGN Caikun ZHANG Haoying XING Dongjie Department of Western Medicine Education, Shandong College of Traditional Chinese Medicine, Yantai Shandong 264100, China

ObjectiveTo explore the characteristics of macrophage in fi ltration in epicardial adipose tissue(EAT) and serum fatty cytokine level in obese rats.Methods18 SD rats were selected and randomly divided into the control group and the obese group. After 80 days, the control group were fed with basal diet and the obese group were fed with high fat diet. EAT were detected by immunohistochemistry with CD68 antibody. Serum leptin, adiponectin and visfatin were detected.ResultsThe number of macrophage in the obese group were significantly higher than the control group. Thelevel of leptin and visfatin in the obese group were signi fi cantly higher and adiponectin was signi fi cantly lower than the control group. The number of macrophages was negatively correlated with adiponectin and was positively correlated with visfatin and leptin.ConclusionThe number of macrophage in EAT in obese rats are increased, and macrophage is closely associated with chronic systemic in fl ammatory.

obesity; epicardial adipose tissue; macrophage

R589．2

A

1674-9316（2017）09-0130-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．09．075

山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校西醫(yī)教學(xué)部，山東 煙臺 264100

張彩坤