徐立峰

(山東協(xié)和學(xué)院醫(yī)學(xué)院 濟(jì)南 250000)

ABO血型鑒定實(shí)驗(yàn)受到了師生的歡迎，盡管不是中學(xué)規(guī)定的實(shí)驗(yàn)，但有些教師會(huì)把它作為自選實(shí)驗(yàn)。ABO血型鑒定的方法有多種，學(xué)生實(shí)驗(yàn)一般會(huì)采用玻片法、試管法，這兩種方法便于觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。其中，玻片法操作簡(jiǎn)單、無(wú)需離心設(shè)備，在學(xué)生實(shí)驗(yàn)中更為常用，該方法可采用人ABO血型單克隆抗體代替人血清ABO血型抗體。

實(shí)驗(yàn)操作并不復(fù)雜，耗時(shí)也較短，但部分實(shí)驗(yàn)者會(huì)出現(xiàn)血型鑒定結(jié)果與預(yù)期結(jié)果并不一致的狀況：一種情況是血型實(shí)驗(yàn)鑒定結(jié)果與采血機(jī)構(gòu)或醫(yī)院鑒定的結(jié)果不一致；另一種情況是與根據(jù)父母血型或遺傳規(guī)律推導(dǎo)出來(lái)的結(jié)果不一致。有些學(xué)生甚至?xí)岩墒欠衽c父母有著血緣關(guān)系，因而會(huì)產(chǎn)生焦慮癥，影響身心健康。

1 血型鑒定與醫(yī)院鑒定的結(jié)果不一致

1.1 原因 采血機(jī)構(gòu)和醫(yī)院對(duì)血型的鑒定，是由專業(yè)人員進(jìn)行的，檢測(cè)條件控制的非常嚴(yán)格，操作規(guī)范、方法先進(jìn)，并做正反定型，對(duì)正反定型不一致的疑難血型會(huì)做進(jìn)一步的檢測(cè)，因而準(zhǔn)確率遠(yuǎn)高于學(xué)生的實(shí)驗(yàn)。影響學(xué)生血型鑒定實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的因素一般有以下幾種：

(1)試劑已過(guò)有效期或保存不當(dāng)而失效。單抗是蛋白質(zhì)，高溫下長(zhǎng)時(shí)間放置會(huì)因變性而失效，受微生物污染會(huì)導(dǎo)致腐敗變質(zhì)。

(2)實(shí)驗(yàn)條件與方法受限。為簡(jiǎn)化操作或缺乏相關(guān)設(shè)備和材料，加全血而不對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌，只進(jìn)行正定型不進(jìn)行反定型。玻片法由于無(wú)離心加速反應(yīng)，容易忽視較弱的凝集而導(dǎo)致定型錯(cuò)誤。不進(jìn)行鏡檢，靠肉眼觀察為無(wú)凝集，鏡檢下仍有可能表現(xiàn)為顯著凝集。

(3)操作不規(guī)范。抗體試劑與紅細(xì)胞比例不合適，血液過(guò)多，未能被抗體試劑完全覆蓋而發(fā)生凝固。血液過(guò)少，難以判斷是否發(fā)生了凝集。先加血液再后加抗體試劑，導(dǎo)致血液凝固。反應(yīng)時(shí)間過(guò)短，具有弱抗原的紅細(xì)胞未出現(xiàn)凝集。

(4)實(shí)驗(yàn)者不能正確識(shí)別和解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果判定錯(cuò)誤。如實(shí)驗(yàn)者對(duì)血型鑒定的相關(guān)理論知識(shí)理解不透徹，或混淆了抗A、抗B抗體，或?qū)⑷跄突旌夏`判為沒有發(fā)生凝集。混合凝集是指小的凝集塊周圍是大量未凝集的細(xì)胞[1]。

(5)實(shí)驗(yàn)者本身因素的影響：①紅細(xì)胞的影響。弱A、弱B亞型，紅細(xì)胞上抗原數(shù)量較少，白血病或惡性腫瘤患者，紅細(xì)胞上抗原數(shù)量減少甚至消失，因而導(dǎo)致凝集反應(yīng)太弱或不發(fā)生而被鑒定為O型[2]。有些A型血者在腸道細(xì)菌產(chǎn)生的酶的催化下，可使紅細(xì)胞上產(chǎn)生類B抗原，可與抗B試劑發(fā)生凝集反應(yīng)。②血漿的影響。由于采用全血，而不是紅細(xì)胞生理鹽水懸液，所以當(dāng)血漿中冷抗體效價(jià)過(guò)高時(shí)，也會(huì)引起凝集。高免疫球蛋白血癥患者，紅細(xì)胞易于聚集成團(tuán)塊狀，對(duì)鑒定造成干擾[3]。心肌梗死、感染及外傷等患者血清纖維蛋白原增高，所形成的纖維蛋白凝塊易被誤認(rèn)為是凝集團(tuán)塊。應(yīng)用血漿擴(kuò)容劑，導(dǎo)致血液黏滯性增高，可引起假凝集[2]。

1.2 對(duì)策 發(fā)生鑒定結(jié)果不一致的情況，主要是實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確導(dǎo)致的，因而降低不一致的可能性要依靠提高實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確率來(lái)解決。

(1)嚴(yán)格按照說(shuō)明書儲(chǔ)存抗體，在有效期內(nèi)使用。開瓶后及時(shí)使用，若未使用完，及時(shí)放置回儲(chǔ)存處。如發(fā)現(xiàn)試劑變渾濁，則抗體已變性或變質(zhì)，不能再使用。對(duì)于懷疑可能失效的抗體，通過(guò)與已知ABO血型的紅細(xì)胞反應(yīng)，檢查結(jié)果是否與已知血型相符。

(2)如果實(shí)驗(yàn)條件具備，應(yīng)采用靈敏度較高的試管法，并進(jìn)行反定型。正定型是用已知的A和B血型定型試劑測(cè)定紅細(xì)胞上有無(wú)相應(yīng)的抗A抗原和抗B抗原。反定型是用已知ABO血型的紅細(xì)胞測(cè)定血清中有無(wú)相應(yīng)的抗A抗體或抗B抗體，其主要作用是發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤。只有正反定型相符，鑒定結(jié)果才是可靠的。

(3)如果肉眼觀察為無(wú)凝集，應(yīng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，并用顯微鏡在低倍下觀察，多個(gè)視野下均無(wú)凝集現(xiàn)象方可判為陰性。

(4)嚴(yán)格按照規(guī)范操作?？贵w與紅細(xì)胞比例應(yīng)與說(shuō)明書一致，先加抗體后加血液，反應(yīng)時(shí)間不能過(guò)短。

(5)實(shí)驗(yàn)者要加強(qiáng)血型鑒定相關(guān)知識(shí)的學(xué)習(xí)，能透徹理解鑒定原理并能熟練的運(yùn)用。做實(shí)驗(yàn)時(shí)要細(xì)心，避免混淆抗A和抗B抗體。觀察要仔細(xì)，將弱凝集和混合凝集與未凝集區(qū)分開。

(6)血漿異常導(dǎo)致的假凝集，顯微鏡下觀察，仍可見較多形狀正常、游離的紅細(xì)胞。可通過(guò)洗滌紅細(xì)胞去除血漿的影響[4]。

(7)對(duì)含有較多自身冷抗體的受檢者，可用37℃生理氯化鈉溶液洗滌紅細(xì)胞2～3次，以去除吸附在紅細(xì)胞上的冷抗體，然后再鑒定血型。

對(duì)因?qū)嶒?yàn)條件和方法受限、紅細(xì)胞上抗原太弱或異常導(dǎo)致的不符，無(wú)法通過(guò)改進(jìn)實(shí)驗(yàn)來(lái)得出正確的結(jié)果，應(yīng)詳細(xì)分析可能存在的各種狀況，以解除實(shí)驗(yàn)者的疑惑。

2 血型鑒定與父母血型或遺傳規(guī)律推導(dǎo)結(jié)果不一致

2.1 原因 血型系統(tǒng)的遺傳普遍采用Bernstein提出的“一個(gè)基因座位上只有3個(gè)等位基因”的理論，即ABO血型基因由3個(gè)等位基因組成：A、B和O基因，A和B基因是顯性基因，O基因?yàn)殡[性基因。A基因的產(chǎn)物A糖基轉(zhuǎn)移酶催化產(chǎn)生A抗原，B基因的產(chǎn)物B糖基轉(zhuǎn)移酶催化產(chǎn)生B抗原，O基因是無(wú)效基因。不一致的原因主要有3個(gè)方面：

(1)實(shí)驗(yàn)鑒定結(jié)果不正確并不一定導(dǎo)致不一致，如假陽(yáng)性和假陰性導(dǎo)致的鑒定錯(cuò)誤，有些狀況下導(dǎo)致不一致，有些狀況下會(huì)導(dǎo)致一致。血漿中冷抗體效價(jià)過(guò)高、高免疫球蛋白所引發(fā)的凝集反應(yīng)，血漿中纖維蛋白原增高所形成的纖維蛋白凝塊易被誤認(rèn)為是凝集團(tuán)塊，這些狀況不是由于A、B抗原與相應(yīng)抗體的結(jié)合導(dǎo)致，稱之為假陽(yáng)性。假陽(yáng)性導(dǎo)致把紅細(xì)胞上本來(lái)不存在的抗原判定為存在，往往把血型誤判為AB型。若父母中有一方是O型血，或父母都是A型血或B型血，則子女一定不會(huì)是AB型血，但假陽(yáng)性導(dǎo)致鑒定結(jié)果與此相矛盾。反之，若父母都是AB型血，或一方為A型血、另一方為B型血，則子女不排除AB型血的可能，因而假陽(yáng)性不會(huì)導(dǎo)致矛盾。A、B抗原數(shù)量少往往導(dǎo)致不發(fā)生凝集反應(yīng)，這種狀況稱之為假陰性。假陰性導(dǎo)致把紅細(xì)胞上本來(lái)存在的抗原判定為不存在，往往把血型誤判為O型血。若父母中有一方是AB型血，則子女一定不是O型血，假陰性導(dǎo)致鑒定結(jié)果與此相矛盾。反之，只要父母血型都不是AB型，則子女不排除O型血的可能，因而假陰性不會(huì)導(dǎo)致矛盾。

(2)實(shí)驗(yàn)者推導(dǎo)錯(cuò)誤，主要是由于對(duì)相關(guān)知識(shí)理解不透徹導(dǎo)致的。如由于對(duì)隱性基因的概念、基因的分離和自由組合規(guī)律理解不透徹，認(rèn)為父親是A型，母親是B型，子女一定不會(huì)是O型。

(3)目前發(fā)現(xiàn)了一些不符合Bernstein關(guān)于血型遺傳理論的血型，其中比較有代表性的是cisAB、B(A)和A(B)型。cisAB型，紅細(xì)胞既有A抗原也有B抗原，通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)的結(jié)果為AB型，但遺傳方式與AB血型不同。AB血型中，決定A抗原的A基因和決定B抗原的B基因是等位基因，在減數(shù)分裂時(shí)，兩個(gè)基因分別進(jìn)入不同的生殖細(xì)胞，但cisAB型不具有這樣的特點(diǎn)。如父親是AB型，母親是O型，則子女為A型或B型。但如父親是cisAB，母親是O型，則子女為cisAB或O型。對(duì)于cisAB有兩種可能的解釋，一是編碼A和B糖基轉(zhuǎn)移酶的基因位于同一條染色體上，二是基因的產(chǎn)物具有A和B糖基轉(zhuǎn)移酶的雙重活性。B(A)和A(B)型與cisAB型類似，紅細(xì)胞上既有A抗原也有B抗原，這是由于基因的產(chǎn)物具有A和B糖基轉(zhuǎn)移酶雙重活性的結(jié)果。cisAB、B(A)和A(B)型，需要在血清學(xué)檢測(cè)的基礎(chǔ)上，結(jié)合基因檢測(cè)和遺傳分析，方可鑒定。但臨床上只關(guān)注輸血安全，往往只進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)鑒定為AB型。學(xué)生實(shí)驗(yàn)也僅是進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)。但由于這幾種血型不符合Bernstein關(guān)于血型遺傳的理論，因而用Bernstein的理論進(jìn)行遺傳分析時(shí)，會(huì)導(dǎo)致鑒定結(jié)果與預(yù)期不一致。

除了上述原因之外，還可能存在其他未知的原因。

2.2 對(duì)策 若出現(xiàn)不一致的狀況，首先要判斷血型鑒定結(jié)果是否正確，再審核推導(dǎo)是否正確。

(1)對(duì)實(shí)驗(yàn)鑒定結(jié)果不正確導(dǎo)致的不一致的情況，可通過(guò)提高實(shí)驗(yàn)鑒定的準(zhǔn)確性來(lái)糾正。對(duì)因鑒定結(jié)果不正確而又不可能通過(guò)重復(fù)實(shí)驗(yàn)得出正確結(jié)果的，要詳細(xì)解釋引起不符的各種狀況，解除實(shí)驗(yàn)者的疑慮。

(2)加強(qiáng)血型遺傳知識(shí)的學(xué)習(xí)，可通過(guò)做“父親是A型，母親是B型，則子女血型和基因型可能是哪些”之類的練習(xí)加以鞏固。

(3)對(duì)于血型鑒定結(jié)果可靠而又不符合Bernstein關(guān)于血型遺傳理論的AB型，不排除為cisAB、B(A)和A(B)型的可能性。但實(shí)際上這幾種血型很少見，其抗原有些表達(dá)很弱，學(xué)生實(shí)驗(yàn)不一定能檢測(cè)出來(lái)，只能作為一種可能的狀況加以說(shuō)明。