不同消毒劑抑菌效果觀察

（河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南 鄭州 450002）

不同消毒劑抑菌效果觀察

王潔瓊，趙玉杰，周薇帆，周云飛，陳盼盼，李新生

（河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，河南 鄭州 450002）

針對(duì)3種常見的致病菌（金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌），選取3種消毒劑，檢測(cè)對(duì)比其抑菌效果。方法：使用普通肉湯對(duì)3種消毒劑進(jìn)行不同比例稀釋，分別接種10 μl 1×1011CFU/ml的金黃色葡萄球菌菌懸液、沙門氏菌菌懸液和大腸桿菌菌懸液，培養(yǎng)8 h和24 h后，根據(jù)OD值測(cè)定結(jié)果判斷其抑菌效果。戊二醛癸甲溴銨溶液在低濃度下即可抑制3種細(xì)菌生長(zhǎng)，為綜合效果較好的消毒劑，稀戊二醛溶液需適當(dāng)提高濃度或延長(zhǎng)時(shí)間才能有效抑菌；聚維酮碘溶液在高濃度下才可有效抑菌，低濃度下存在抑菌無(wú)效的情況。3種消毒劑對(duì)沙門氏菌、葡萄球菌抑菌效果相對(duì)較好，對(duì)大腸桿菌抑菌效果相對(duì)較差。

消毒劑；稀釋度；OD值；抑菌效果

消毒劑是指能夠殺滅傳播媒介中的病原微生物，從而使之無(wú)害的制劑［1］。其主要作用機(jī)理是改變微生物賴以生存的環(huán)境，致使微生物的內(nèi)外結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，主要代謝機(jī)能出現(xiàn)障礙，生長(zhǎng)發(fā)育受阻，從而喪失活性失去致病力。不同類型的消毒劑有不同的消毒效果［2］。消毒劑按照其作用水平可分為滅菌劑、高效消毒劑、中效消毒劑、低效消毒劑。近幾年，消毒劑已廣泛應(yīng)用于工業(yè)、醫(yī)療衛(wèi)生、農(nóng)業(yè)等各個(gè)行業(yè)，人們對(duì)消毒劑的應(yīng)用研究有了很大的進(jìn)展。

該試驗(yàn)選取了聚維酮碘、稀戊二醛、戊二醛癸甲溴銨3種消毒劑。目前聚維酮碘作為一種優(yōu)良的皮膚黏膜消毒劑和外用藥已被許多國(guó)家藥典收錄［3］；戊二醛是一種高效消毒劑和滅菌劑，廣泛用于石油開采、醫(yī)藥衛(wèi)生、生物化學(xué)、食品化妝品的防腐等方面；戊二醛癸甲溴銨可以廣譜、高效殺滅各種細(xì)菌及芽孢、病毒、支原體、真菌、霉菌和衣原體。隨著消毒劑的頻繁使用，抗藥菌株不斷出現(xiàn)，有必要定期測(cè)定評(píng)價(jià)不同消毒劑的消毒效果，為此筆者開展了相關(guān)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 消毒劑 3種消毒劑，實(shí)驗(yàn)室編號(hào)分別為A、B、C，其中A為聚維酮碘溶液，B為稀戊二醛溶液，C為戊二醛癸甲溴銨溶液。

1.1.2 菌種 3株標(biāo)準(zhǔn)菌株：致病性的金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、沙門氏菌（ATCC 13076）、大腸桿菌（ATCC 25922），編號(hào)分別為P、S、D。

1.1.3 培養(yǎng)基 普通肉湯、普通瓊脂培養(yǎng)基。

1.2 操作過(guò)程和方法

1.2.1 培養(yǎng)基制備 普通肉湯、普通瓊脂培養(yǎng)基配制按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行［4］。

1.2.2 平板菌落總數(shù)測(cè)定 將金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和大腸桿菌的菌液分別進(jìn)行10倍倍比稀釋，選取稀釋至107、108、109、1010的菌液進(jìn)行平板計(jì)數(shù)。分別用1 ml滅菌吸管移1 ml稀釋液于滅菌皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿；稀釋液移入平皿后，及時(shí)將涼至46℃普通瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15 ml，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿混合均勻，同時(shí)將普通瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1 ml滅菌水的滅菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照；待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h后記下各平板的菌落數(shù)，求出同稀釋度下的各平板平均菌落數(shù)。用普通肉湯培養(yǎng)基將3種菌懸液稀釋至1×1011CFU/ml。

1.2.3 測(cè)定試驗(yàn)所用3種菌株的OD值與菌落總數(shù)的關(guān)系 將15個(gè)試管分成3組，每組5個(gè)，分別加入10 ml的普通肉湯培養(yǎng)基。第1組中分別加入未稀釋葡萄球菌菌液，稀釋至1010、109、108、107的葡萄球菌菌液各10 μl；第2組中分別加入未稀釋沙門氏菌菌液，稀釋至1010、109、108、107的沙門氏菌菌液各10 μl；在第3組中分別加入稀釋至1011、1010、109、108、107的大腸桿菌菌液各10 μl。在37℃恒溫培養(yǎng)振蕩器內(nèi)培養(yǎng)24 h時(shí)每管取2 ml運(yùn)用紫外分光光度計(jì)在600 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其OD值，繪制曲線圖。

1.2.4 稀釋 用高壓滅菌的普通肉湯培養(yǎng)基分別對(duì)A、B、C3種消毒劑進(jìn)行1∶100、1∶200、1∶500、1∶1 000、1∶2 000、1∶5 000、1∶10 000、1∶20 000 8個(gè)稀釋度稀釋，總量定為10 ml。各分別稀釋3組。

1.2.5 接菌 向第1組消毒劑A、B、C的8個(gè)稀釋度分別接種10 μl金黃色葡萄球菌菌液；第2組消毒劑A、B、C的8個(gè)稀釋度分別接種10 μl沙門氏菌菌液；第3組消毒劑A、B、C的8個(gè)稀釋度分別接種10 μl大腸桿菌菌液。同時(shí)分別設(shè)置陰性對(duì)照普通肉湯培養(yǎng)基＋10 μl LB培養(yǎng)液，陽(yáng)性對(duì)照普通肉湯培養(yǎng)基＋10 μl對(duì)應(yīng)菌液。所接菌液均為1× 1011CFU/ml。

1.2.6 培養(yǎng)及OD值測(cè)定 在37℃恒溫培養(yǎng)振蕩器內(nèi)培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)8 h和24 h時(shí)每管取2 ml運(yùn)用紫外分光光度計(jì)在600 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其OD值［5］。

1.2.7 確定最佳稀釋度 ①用高壓滅菌的普通肉湯培養(yǎng)基對(duì)消毒劑A進(jìn)行1∶10、1∶20、1∶40、1∶60、1∶80 5個(gè)稀釋度稀釋，對(duì)消毒劑B、C進(jìn)行1∶100、1∶200、1∶500、1∶1 000 4個(gè)稀釋度稀釋，總量均定為10 ml。各分別稀釋3組。②向第1組消毒劑A1、B1、C1的各個(gè)稀釋度分別接種10 μl金黃色葡萄球菌菌液，第2組A2、B2、C2的各個(gè)稀釋度分別接種10 μl沙門氏菌菌液，第3組A3、B3、C3的各個(gè)稀釋度分別接種10 μl大腸桿菌菌液。同時(shí)分別設(shè)置陰性對(duì)照普通肉湯培養(yǎng)基＋10 μl LB培養(yǎng)液，陽(yáng)性對(duì)照普通肉湯培養(yǎng)基＋10 μl對(duì)應(yīng)菌液。③在37℃恒溫培養(yǎng)振蕩器內(nèi)培養(yǎng)，在培養(yǎng)8 h和24 h時(shí)每管取2 ml運(yùn)用紫外分光光度計(jì)在600 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其OD值。確定3種消毒劑的最佳稀釋度。

2 結(jié)果

2.1 平板菌落總數(shù)測(cè)定結(jié)果

通過(guò)平板菌落總數(shù)測(cè)定可得葡萄球菌的細(xì)菌含量為2.43×1011CFU/ml；沙門氏菌的細(xì)菌含量為1.34×1011CFU/ml；大腸桿菌的細(xì)菌含量為4.88×1014CFU/ml。

2.2 不同稀釋度的3種消毒劑抑菌效果的OD值測(cè)定結(jié)果

消毒劑A的8個(gè)稀釋度下OD值測(cè)定顯示8 h和24 h時(shí)均有大量細(xì)菌增殖，對(duì)3種菌均無(wú)抑菌效果；消毒劑B的8個(gè)稀釋度下OD值測(cè)定顯示8 h時(shí)在1∶100和1∶200下對(duì)葡萄球菌和沙門氏菌有抑菌效果，在1∶100下對(duì)大腸桿菌有抑菌效果。24 h時(shí)在1∶100下對(duì)葡萄球菌有抑菌效果，在1∶100和1∶200下對(duì)沙門氏菌仍有抑菌效果，而在8個(gè)稀釋度下對(duì)大腸桿菌均無(wú)抑菌效果；消毒劑C的8個(gè)稀釋度的OD值測(cè)定顯示8 h時(shí)在1∶100、1∶200、1∶500下對(duì)3種菌均有抑菌效果。24 h時(shí)在1∶100和1∶200下對(duì)葡萄球菌有抑菌效果，在1∶100、1∶200和1∶500下對(duì)沙門氏菌有抑菌效果，在1∶100下對(duì)大腸桿菌有抑菌效果。

2.3 最佳稀釋度測(cè)定結(jié)果

通過(guò)對(duì)培養(yǎng)8 h和24 h時(shí)OD值的測(cè)定結(jié)果分析可得：消毒劑A的最佳稀釋度為1∶10；消毒劑B的最佳稀釋度為1∶100；消毒劑C的最佳稀釋度為1∶200。

3 討論

消毒是貫徹預(yù)防為主方針的一項(xiàng)重要措施，目的是消滅被傳染源散播于外界環(huán)境中的病原體，以切斷傳播途徑，阻止疫病繼續(xù)蔓延。隨著我國(guó)養(yǎng)殖集約化程度的提高，畜產(chǎn)品市場(chǎng)流通日趨頻繁，病原微生物傳播概率大大增加；同時(shí)隨著國(guó)外引進(jìn)畜禽優(yōu)良品種的渠道、途徑多樣化，疫病控制的難度越來(lái)越大，嚴(yán)重威脅了我國(guó)畜牧業(yè)的健康發(fā)展。很多養(yǎng)殖場(chǎng)的衛(wèi)生防疫工作已經(jīng)做得很好，但仍然不時(shí)有傳染病的發(fā)生，主要原因是養(yǎng)殖環(huán)境已經(jīng)受到污染。

該試驗(yàn)采用OD值（光密度值）法對(duì)3種消毒劑的抑菌效果進(jìn)行了快速有效的評(píng)價(jià)。戊二醛癸甲溴銨溶液在低濃度下即可抑制3種細(xì)菌生長(zhǎng)，為綜合效果較好的消毒劑，稀戊二醛溶液需適當(dāng)提高濃度或延長(zhǎng)時(shí)間才能有效抑菌；聚維酮碘溶液在高濃度下才可有效抑菌，低濃度下存在抑菌無(wú)效的情況。3種消毒劑對(duì)沙門氏菌、葡萄球菌抑菌效果相對(duì)較好，對(duì)大腸桿菌抑菌效果相對(duì)較差。

聚維酮碘溶液在最大稀釋度1∶100時(shí)尚無(wú)抑菌效果，因此對(duì)消毒劑A重新選擇稀釋度稀釋。在實(shí)際消毒中，考慮到部分消毒劑具有逐漸揮發(fā)或避光保存等特點(diǎn)，而且該試驗(yàn)中細(xì)菌是完全浸泡在一定濃度下的消毒劑中，與實(shí)際的應(yīng)用環(huán)境有些許差別。因此，建議3種消毒劑的工作濃度為100%殺滅細(xì)菌的稀釋度，即消毒劑A 1∶10；消毒劑B 1∶100；消毒劑C 1∶200。另外,在實(shí)際消毒環(huán)境中細(xì)菌的含量各不相同，結(jié)果的準(zhǔn)確性也有待進(jìn)一步研究。故在具體消毒時(shí)，可根據(jù)消毒的對(duì)象性質(zhì)、受污染的程度等因素，選擇合適的消毒劑、有效的濃度、足夠的作用時(shí)間，以確保達(dá)到很好的消毒效果。理想的消毒劑應(yīng)該是高效、低毒、價(jià)廉［6］。目前市場(chǎng)供應(yīng)的消毒劑要達(dá)到這一理想標(biāo)準(zhǔn)是很難的，就毒性而言，許多消毒劑或多或少地存在一定毒性，因此，正確選擇與使用消毒劑對(duì)畜禽生產(chǎn)者來(lái)說(shuō)就顯得比較重要［7］。

［1］邱梅，郝智慧，龐云露，等.國(guó)內(nèi)外獸用消毒劑的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢(shì)［J］.中國(guó)獸藥雜志，2011，45（6）: 43-47.

［2］陳小強(qiáng)，王晶鈺，張中航，等.規(guī)?；u場(chǎng)消毒劑的篩選與消毒效果評(píng)價(jià)［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32（11）：85-89.

［3］巴劍波，劉玉明，殷明，等.聚維酮碘的理化性能及其消毒應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)消毒學(xué)雜志，2009，（5）：548-550.

［4］中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典［M］．2010年版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2011.

［5］喬軍，孟慶齡.運(yùn)用OD值法進(jìn)行細(xì)菌計(jì)數(shù)的研究［J］．中國(guó)家禽，1996，（4）：26-27.

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［7］計(jì)慧琴，王丙云，陳志勝，等.常用消毒劑對(duì) H3N2豬流感病毒的殺滅效果［J］.畜牧與獸醫(yī)，2014，46（1）：89-91.

S859.79＋9.1

：B

：1004-5090（2017）01-0006-02

2016-10-30）