解長佶　胡超　曹凱　張宇晴

【摘要】 目的：檢測原發(fā)性肝癌患者血漿溶血磷脂酸（lysphosphaticlic acid，LPA）的水平，評價LPA在原發(fā)性肝癌診治中的臨床意義。方法：采用生物化學方法檢測原發(fā)性肝癌患者43例，肝臟良性疾病患者10例及健康志愿者10名的血漿LPA水平，同時測定血清AFP的水平。結(jié)果：原發(fā)性肝癌患者血漿LPA水平（3.94±0.60）μmol/L明顯高于肝臟良性疾病患者（2.68±0.36）μmol/L和健康對照組（2.42±0.35）μmol/L（P<0.05），血漿LPA水平的升高與原發(fā)性肝癌浸潤和門靜脈癌栓等相關(guān)。結(jié)論：血漿LPA檢測為原發(fā)性肝癌診斷和預(yù)后判斷增加了一項潛在的評價指標。

【關(guān)鍵詞】 原發(fā)性肝癌； 溶血磷脂酸； 甲胎蛋白； 診斷； 預(yù)后

Significance of Plasma Lysophosphatidic Acid Detection in patients with Primary Liver Cancer/XIE Chang-ji，HU Chao，CAO Kai，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（31）：013-016

【Abstract】 Objective：To observe the levels of plasma lysophosphatidic acid（LPA） in patients with primary liver cancer，and to evaluate its clinical potential of diagnosis.Method：Plasma LPA and serum AFP levels were measured in 43 patients with primary liver cancer，10 patients with benign primary liver cancer tumor，and 10 patients healthy donors.Result：Plasma LPA concentration in primary liver cancerpatients （3.94±0.60）μmol/L

was significantly higher than patients with benign lesions of（2.68±0.36）μmol/L and control group of（2.42±0.35）μmol/L （P<0.05）.Higher plasma LPA level showed a significant correlation with invasion and portal vein tumor thrombus （PVTT） of primary liver cancer.Conclusion：Plasma LPA level may be a potential indicator of the diagnosis and prognosis of primary liver cancer.

【Key words】 Primary liver cancer； Lysophosphatidic acid； AFP； Diagnosis； Prognosis

First-authors address：Jiangxi Turmor Hospital，Nanchang 330029，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.31.004

原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC）是全球第5大常見惡性腫瘤，占惡性腫瘤致死原因的第2位，而其中83%的肝癌發(fā)生在發(fā)展中國家，僅中國每年的新發(fā)病例就將近占到世界的一半[1-2]。我國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析報道結(jié)果顯示：中國男性的肝癌發(fā)病率排在第5位，女性排在第6位，而肝癌死亡率男性排在第2位，女性排在第5位，原發(fā)性肝癌的治療取得了巨大進步，但多數(shù)患者診斷肝癌時病情已為進展期預(yù)后差[3-4]。溶血磷脂（lysophosphatidic acid，LPA）是一種對多種細胞具有不同生物學活性作用的磷脂介質(zhì)，在組織中廣泛存在，能夠調(diào)節(jié)腫瘤細胞的生長和侵襲[5]。最近研究表明，LPA分泌量的增加，可能是常見惡性腫瘤細胞癌變過程中的步驟之一[6]，LPA通過上調(diào)卵巢癌組織中VGEF的表達，促進腫瘤血管生成，從而間接促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展[7]。LPA能促進基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）和腫瘤血管生成因子的分泌，而這和腫瘤的發(fā)展有關(guān)[8]。王德盛等[9]通過測定肝癌細胞株SMMC7721中Rho蛋白活性，認為LPA主要通過Rho信號轉(zhuǎn)導增強肝癌細胞的體外侵襲能力。Lou等[10]報道中LPA通過基質(zhì)蛋白-9（MMP-9），而不是通過MMP-2的高表達增加了肝癌細胞的侵襲能力，并通過使用LPA受體抑制劑Ki16452，能顯著降低因LPA誘導的肝癌細胞的侵襲力。本課題通過檢測原發(fā)性肝癌患者血漿LPA水平，就其與臨床分期的相關(guān)性進行了比較分析，評價檢測原發(fā)性肝癌患者血漿LPA的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年8月-2016年5月江西省腫瘤醫(yī)院診治的原發(fā)性肝癌患者43例，男35例，女8例；年齡39～67歲，中位年齡為51歲。全組患者病理類型均為肝細胞性肝癌，巴塞羅那臨床肝癌（Barcelona Clinic Liver Cancer，BCLC）分期標準分為BCLC 0期5例，BCLC A期11例，BCLC B期17例，BCLC C期10例。另選取肝臟血管瘤患者10例為肝臟血管瘤組和健康志愿者10例作為健康對照組。全部受驗者均于清晨空腹采血取樣，實驗對象排除既往有腦梗死、短暫性腦缺血發(fā)作（TIA）及外周深靜脈血栓形成者。LPA檢測試劑盒購自北京泰福仕科技開發(fā)公司，腫瘤標記物甲胎蛋白（AFP）檢測試劑盒購自羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司（Roche Diagnostics GmbH 公司）。endprint

1.2 方法 （1）血漿溶血磷脂酸（LPA）的測定：受檢者均于術(shù)前清晨空腹抽取外周血3 mL，血樣離心后0.5 h內(nèi)用LPA配套試劑測定血漿中的LPA，具體操作步驟和陽性判斷標準嚴格按說明書的要求執(zhí)行。LPA檢測試劑盒1號抗凝劑置于抗凝管中，8000 r離心10 min，吸取上清1 mL，抽提磷脂成分，過濾濃縮分離，最后加入顯色劑于90 ℃水浴

5 min，取出后置室溫35 min，采用東芝TBA120FR全自動生化分析儀計算LPA的值。LPA值≥3.2 μmol/L設(shè)為陽性，<3.2 μmol/L設(shè)為陰性。（2）甲胎蛋白測定：術(shù)前清晨空腹抽取外周血2.0 mL，甲胎蛋白檢測采用羅氏全自動電化學發(fā)光免疫儀檢測血清AFP水平，AFP正常參考值為<7 ng/mL。

1.3 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用 字2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 術(shù)前各組血漿LPA及AFP水平的比較 （1）各組血漿LPA水平的比較中，肝臟血管瘤組2例LPA值升高，健康對照組未見LPA升高。原發(fā)性肝癌組血漿LPA水平（3.94±0.60）μmol/L明顯高于肝臟血管瘤（2.68±0.36）μmol/L及健康對照組（2.42±0.35）μmol/L，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），肝臟血管瘤組與健康對照組之間比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。（2）各組AFP水平的比較中，原發(fā)性肝癌組為（15330.03±11233.98）ng/mL高于肝臟血管瘤組及健康對照組（P<0.05），肝臟良性腫瘤組（4.87±1.79）ng/mL與健康對照組（3.56±1.67）ng/mL相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。（3）原發(fā)性肝癌不同分期的LPA水平比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。2例BCLC 0期

LPA水平<3.2 μmol/L，BCLC A期與B期LPA水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），BCLC C期LPA水平高于BCLC A及B期（P<0.05）。（4）AFP在原發(fā)性肝癌不同分期組中的比較，BCLC 0期低于BCLC A、B及C期，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），BCLC A、B及C期比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 原發(fā)性肝癌組不同分期術(shù)后1個月血漿LPA及AFP水平的比較 BCLC A及B期術(shù)后1個月LPA水平降至正常水平，而BCLC C期患者LPA水平未見下降。原發(fā)性肝癌組不同分期術(shù)后1個月血漿AFP水平BCLC 0、A、B及C期術(shù)后1個月AFP水平均可見下降，以BCLC 0期下降最為明顯。見表2。

3 討論

原發(fā)性肝癌以肝細胞癌（hepatocellular carcinoma HCC，以下簡稱肝癌）為主，占95%以上。肝癌細胞易侵犯門靜脈系統(tǒng)，形成門靜脈癌栓（portal vein tumor thrombus，PVTT）。文獻[11]報道門靜脈癌栓的發(fā)生率為44.0%～62.2%，對于合并門靜脈癌栓的肝癌患者，病情發(fā)展迅速，自然中位生存期平均為2.7～4.0個月。合并PVTT是臨床確定的肝癌預(yù)后不良因素，PVTT發(fā)生的部位及范圍對患者預(yù)后有明顯影響，早期微血管侵犯和中晚期門靜脈癌栓形成是影響肝細胞癌術(shù)后預(yù)后不佳的最重要因素[12]。PVTT依據(jù)侵犯范圍大體分為4型：Ⅰ型，癌栓侵犯肝葉或肝段的門靜脈分支，其中Ⅰ0型代表微血管癌栓；Ⅱ型，癌栓侵犯至門靜脈左支或右支；Ⅲ型，癌栓侵犯至門靜脈主干；Ⅳ型，癌栓侵犯至腸系膜上靜脈或以上[13]。對于合并門靜脈癌栓的患者，巴塞羅那臨床肝癌分期（Barcelona Clinic Liver Cancer，BCLC）劃歸為BCLC C期，推薦索拉非尼作為這部分患者的標準治療方案。但是在我國運用外科手術(shù)、肝動脈栓塞化療、放療以及聯(lián)合多種治療手段的綜合治療也取得一定的治療效果[14-17]。門靜脈癌栓形成是一個多因素及多環(huán)節(jié)的過程，除了與門靜脈血流動力學因素、門靜脈本身的解剖特點及功能有關(guān)，肝癌組織呈浸潤性生長極易侵犯血管壁較薄的門靜脈壁，形成門靜脈癌栓，另外腫瘤組織擠壓導致小葉中央靜脈閉塞，流經(jīng)腫瘤組織的血流逆流至門靜脈癌細胞進入門靜脈系統(tǒng)并附壁生長形成癌栓，并且還與多種細胞因子及分子生物學機理有關(guān)。門靜脈癌栓的診斷依據(jù)除了術(shù)中發(fā)現(xiàn)、術(shù)后病理，臨床主要還是依靠影像學檢查彩超、螺旋CT及磁共振成像（MRI）[18-22]。目前在檢測肝細胞癌合并門靜脈癌栓中尚無敏感性和特異性均令人滿意的腫瘤標志物，劉洋等[23]通過回顧性肝癌合并門脈癌栓的患者發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合AFP和CA125水平的檢測對臨床實踐中判斷是否合并門靜脈癌栓有一定的指導意義。陳祖華等[24]通過分析肝細胞肝癌伴門靜脈癌栓與AFP-L3%相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)AFP-L3%陽性HCC患者易侵犯門靜脈形成PVTT，并且AFP-L3%越高PVTT累及范圍越廣。在我國30%～40%的肝細胞癌患者中始終為陰性，并且AFP升高滯后腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移灶的形成，從外周血液中尋找生物標記物提示門靜脈癌栓的形成發(fā)生對于臨床有著重大意義。

筆者發(fā)現(xiàn)對肝癌不同分期血漿AFP值水平變化中，術(shù)前BCLC 0期低于BCLC A、B及C期，術(shù)后1個月復(fù)查AFP BCLC 0、A、B及C期都有明顯下降，隨著肝臟腫瘤負荷的下降，AFP呈現(xiàn)出相應(yīng)的正相關(guān)。而LPA值進行對比中發(fā)現(xiàn)，術(shù)前BCLC 0期低于BCLC A、B及C期，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），BCLC A及B期兩者比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。BCLC C期的患者LPA水平高于BCLC A、B期，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。并通過術(shù)后1個月復(fù)查LPA水平，LPA在BCLC A、B期患者中呈現(xiàn)下降，而在BCLC C期中雖然肝臟腫瘤切除聯(lián)合門靜脈切除或者門靜脈切開取栓，腫瘤負荷下降，LPA水平手術(shù)前后未見明顯下降，這就提示LPA在門靜脈癌栓的形成中可能起到標記物的作用。由于腫瘤患者普遍存在血液高凝狀態(tài)，易形成血栓，而血小板活化后釋放大量的LPA，LPA通過與血小板的LPA-GPCR結(jié)合進一步促進血小板的激活，改變血小板的形態(tài)，從而表現(xiàn)強大的級聯(lián)放大效應(yīng)[25]。LPA可能通過調(diào)節(jié)活化血小板導致門靜脈內(nèi)高凝狀態(tài)，同時誘導肝癌細胞、血小板及纖維蛋白相互作用，形成門靜脈癌栓。endprint

本研究由于樣本例數(shù)偏少，并且僅做近期隨訪，無完整生存資料，導致結(jié)論有一定的局限性。下一步將擴大樣本例數(shù)及進一步的分層，并與新近發(fā)現(xiàn)的腫瘤標記物進行比較分析。臨床上合并PVTT常決定治療方案的選擇，通過腫瘤標記物的檢查，早期診斷PVTT對于臨床具有重要的臨床意義。同時深入基礎(chǔ)研究，進一步闡明PVTT發(fā)生發(fā)展的分子機理，為PVTT的治療提供更多的靶點。肝癌患者LPA的血漿濃度與門靜脈癌栓形成有一定的正相關(guān)性，可作為反映門靜脈癌栓形成的標記物，對于肝癌臨床分期及治療能提供指導意義。

參考文獻

[1] Ferlay J，Soerjomataram I，Dikshit R，et al.Cancer incidenceand mortality worldwide： sources， methods and major patternsin GLOBOCAN 2012[J].Int J Cancer，2015，136（5）：E359-386.

[2] Yang J D，Roberts L R.Hepatocellular carcainoma：A global view[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol，2010，7（8）：448-458.

[3]陳萬青，鄭榮壽，曾紅梅，等.2011年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J].中國腫瘤，2015，24（1）：1-10.

[4]陳建國.中國肝癌發(fā)病趨勢和一級預(yù)防[J].臨床肝膽病雜志，2012，28（4）：256-260.

[5] Yamada T，Sato K，Komachi M，et al.Lysophosphatidic acid （LPA） in malignant ascites stimulates motility of human pancreatic cancer ceils through LPA1[J].J Biol Chem，2004，279（8）：6595-6605.

[6] Liu S，Umezu-Goto M，Murph M，et al.Expression of autotaxin and lysophosphatidic acid receptors increases mammary tumorigenesis， invasion， and metastases[J].Cancer Cell，2009，15（6）：539-550.

[7] Lin M E，Herr D R，Chun J.Lysophosphatidic acid （LPA） receptors： Signaling properties and disease relevance[J].Prostaglandins Other Lipid Mediat，2010，91（3-4）：130-138.

[8] Fishman D A，Liu Y，Ellerbroek S M，et al.Lysophosphatidic acid promotes matrix metalloproteinase （MMP） activation and MMP-dependent invasion in ovarion cancer cells[J].Cancer Res，2001，61（7）：3194-3199.

[9]王德盛，竇科峰，李開宗，等.溶血磷脂酸通過Rho信號轉(zhuǎn)導途徑增強肝癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移[J].中華醫(yī)學雜志，2006，86（6）：399-402.

[10] Lou L，Chen Y X，Jin L，et al.Enhancement of invasion of hepatocellular carcinoma cells through lysophosphatidic acid receptor[J].J Int Med Res，2013，41（1）：55-63.

[11] Lin D X，Zhang Q Y，Li X，et al.An aggressive approach leads to improved survival in hepatoceilular carcinoma patients with portal vein tumor thrombus[J].J Cancer Res Clin Oncol，2011，137（1）：139-149.

[12] Yoshidome H，Takeuchi D，Kimura F，et al.Treatment strategy for hepatocellular carcinoma with major portal vein or inferior vena cava invasion： a single institution experience[J].J Am Coll Surg，2011，212（5）：796-803.

[13]程樹群，李楠，吳孟超.門靜脈癌栓分型與治療選擇[J].中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2012，19（3）：240-242.

[14]程樹群，孫居仙，吳孟超，等.肝細胞癌伴門靜脈癌栓的治療現(xiàn)狀[J].中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2015，22（10）：1157-1160.

[15]全國肝癌合并癌栓診治研究協(xié)作組.肝細胞癌合并門靜脈癌栓多學科診治中國專家共識（2016版）[J].中華消化外科雜志，2016，15（5）：411-416.

[16]唐振宇，王偉，杜剛，等.原發(fā)性肝癌合并門靜脈癌栓不同治療方法的療效分析[J].中華肝膽外科雜志，2015，21（1）：18-22.

[17]陳駿，席瑋，武貝，等.索拉非尼聯(lián)合TACE治療肝癌伴門靜脈癌栓的臨床觀察[J].中華醫(yī)學雜志，2014，94（33）：2566-2569.

[18]張紅志，郭凡.彩色多普勒診斷原發(fā)性肝癌并門靜脈癌栓[J].放射學實踐，2011，26（6）：659-660.

[19]董春玲，范維鵬，李世維.MSCT診斷肝癌并門靜脈癌栓及其在介入治療中的價值[J].中國醫(yī)療前沿，2013，8（4）：80-81.

[21]張鑫，姜浩之，朱禮堯，等.螺旋CT增強掃描對門靜脈癌栓與門靜脈血栓的鑒別診斷[J].醫(yī)學影像學雜志，2015，25（10）：1812-1814.

[22]張名忠，丁匯清，楊杰，等.門靜脈癌栓和血栓MRI增強、DWI和ADC表現(xiàn)應(yīng)用價值[J].醫(yī)學影像學雜志，2016，26（2）：272-275.

[23]劉洋，王憲強，于牧川，等.腫瘤標志物在肝細胞癌合并門靜脈癌栓診斷中的意義[J].中國現(xiàn)代普通外科進展，2012，15（12）：944-947.

[24]陳祖華，陳瑤，高智峰，等.肝細胞癌合并門靜脈癌栓與AFP-L3%相關(guān)性研究[J].醫(yī)學研究雜志，2012，41（7）：113-116.

[25] Pamuklar Z，Lee J S，Cheng H Y，et al.Individual heterogeneity in platelet response to lysophosphatidic acid： evidence for a novel inhibitory pathway[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2008，28（3）：555-561.

（收稿日期：2016-07-22） （本文編輯：周亞杰）endprint