喬桂芳

（內(nèi)蒙古錫林郭勒盟食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000）

淺談高效液相色譜法在藥品檢驗(yàn)中的運(yùn)用

喬桂芳

（內(nèi)蒙古錫林郭勒盟食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古 錫林浩特 026000）

高效液相色譜法在藥品檢驗(yàn)中的作用日益凸顯，已越來(lái)越得到醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可，廣泛應(yīng)用于藥品檢驗(yàn)中。本文向讀者介紹了高效液相色譜法分類(lèi)和作用，已求獲得更多讀者的認(rèn)同，廣泛應(yīng)用于藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中。

高效液相色譜法；作用；藥品檢驗(yàn)；運(yùn)用

1 概 言

起初，高效液相色譜法只是充當(dāng)一種分離手段，把混合物中不同組分顯示出的流動(dòng)相和固定相進(jìn)行系數(shù)分配，值兩相呈現(xiàn)相對(duì)運(yùn)動(dòng)之際，兩相間的一些組分反復(fù)進(jìn)行多次的分配，最后分離出來(lái)。到了上世紀(jì)50年代，業(yè)界有識(shí)之士將上述分離手段與檢測(cè)系統(tǒng)連結(jié)為一體，逐漸形成一種獨(dú)特的運(yùn)用系統(tǒng)。高效液相色譜法在分離速度、分離效能、檢測(cè)靈敏度、自動(dòng)化等方面發(fā)揮了獨(dú)特的作用，其正以適用范圍廣的獨(dú)創(chuàng)性受到醫(yī)學(xué)界、醫(yī)藥界人土的廣泛關(guān)注，正普遍運(yùn)用于藥品檢驗(yàn)中，并發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，成為藥品質(zhì)量控制的最有效技術(shù)手段。

2 分 類(lèi)

2.1 吸附色譜法

何謂吸附色譜法？通俗的解釋是，用吸附劑當(dāng)固定相，用于藥品分離的色譜法，人們習(xí)慣性稱(chēng)其為吸附色譜法。吸附色譜法在目前使用最普及。吸附色譜法用硅膠作為固定相，用一種或多種有機(jī)溶劑混合起來(lái)作為流動(dòng)相。這種色譜的分離原理是：通過(guò)不同的組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)產(chǎn)生不同的吸附力，分離不同的色譜。強(qiáng)度大的組分，極性會(huì)更大，這樣一來(lái)，固定相的吸附力會(huì)更加強(qiáng)大，保留的時(shí)間也會(huì)變得更為持久。當(dāng)流動(dòng)相的極性亢奮有力時(shí)，其洗脫力會(huì)更加強(qiáng)勢(shì)，但其組分的保留時(shí)間會(huì)轉(zhuǎn)瞬消逝。

2.2 液-液分配色譜法

把填料表面上覆蓋的溶劑膜這一固定相和流動(dòng)相兩者分離出去，使組分快速溶入兩相中，這樣一來(lái)，不同的組分便會(huì)由于分配系數(shù)（K）的不同而一一被分離出來(lái)，這一過(guò)程就是液-液分配色譜法。因固定相和流動(dòng)相極性差異很大，液-液分配色譜法又細(xì)分為兩類(lèi)：正相色譜法和反相色譜法。

2.2.1 正相色譜法

固定相極性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于流動(dòng)相極性，這種液-液分配色譜法常被人們稱(chēng)之為正相色譜法。人們常把硅膠與氰基鍵合硅膠、氨基鍵合硅膠等極性的化學(xué)鍵合固定相用在正相色譜法中，常把極性很低的有機(jī)溶劑用在流動(dòng)相中。正相色譜中法較為固定的模式是：極性較小的組分最先流出，因?yàn)樗麷 值很低，最后流出極性較高的組分。正相色譜法常用于分離有機(jī)溶劑中的極性及中等極性的分子型物質(zhì)。

2.2.2 反相色譜法

流動(dòng)相極性高于固定相極性一大截，這種液-液分配色譜法常被人們稱(chēng)為反相色譜法。反相色譜法用非極性固定相為常規(guī)武器，其最常用的物質(zhì)為：十八烷基硅烷鍵合硅膠，辛烷基硅烷鍵合硅膠，氰基柱，氨基柱。流動(dòng)相常用的物質(zhì)為：水與甲醇、乙腈或四氫呋喃的混合溶劑。在反相色譜法中，極性比較強(qiáng)勢(shì)的組分因K 值較大而先行流出色譜柱，極性較弱的組分緊隨其一瀉而出。

2.3 離子交換色譜法

將離子交換劑用作固定相，進(jìn)行色譜分離，這種色譜法稱(chēng)為離子交換色譜法。離子交換色譜法的分離過(guò)程，是通過(guò)組分與離子交換劑的親和力存在的差異來(lái)完成。其柱填料中加入了極性較高、已經(jīng)離子化的基團(tuán)，像羧酸啦、磺酸啦，或季銨離子等等，當(dāng)pH 值與其的親和力達(dá)到一定程度后，上述基團(tuán)會(huì)被強(qiáng)大的對(duì)手解離而出，奮不顧身地去牽電荷相反的物質(zhì)。離子型物質(zhì)可以因?yàn)榭梢院椭盍贤l共振，故能生發(fā)出相當(dāng)強(qiáng)大的吸引-解吸功效，從而使分離效果令人震驚。

2.4 分子排阻色譜法

分子排阻色譜法亦可稱(chēng)為凝膠色譜法。這種色譜法的固定相孔徑大，又孔多而密，人們通常稱(chēng)其為凝膠。分離組分的分離原理為：分子空間因其面積范圍不同，運(yùn)轉(zhuǎn)一定時(shí)間后即被分離出來(lái)。每每遇到組分被流動(dòng)相夾裹著涌入色譜柱時(shí)，固定相表面的孔穴將體積大的分子拒之于門(mén)外，情急之下，體積大的分子只好隨流動(dòng)相徑直躍過(guò)色譜柱，停留片刻后隨即消失。體積小的分子能夠步入孔穴內(nèi)，在色譜柱中進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間的停留。分子的體積雖然不大，但流入的孔穴比較多，經(jīng)歷的路徑比較長(zhǎng)，故保留時(shí)間會(huì)很長(zhǎng)。

3 作 用

3.1 鑒別藥物

高效液相色譜法可用于藥物鑒別。大家知道，藥典在用HPLC法測(cè)定含量時(shí)，通常用高效液相色譜法鑒別藥物屬性。在中藥的指紋圖譜鑒別過(guò)程中，HPLC也得到了充分的運(yùn)用。同時(shí)，高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）技術(shù)的推行，把色譜技術(shù)的高分離能力和質(zhì)譜技術(shù)的解析能力完美地結(jié)合在一起，成功地運(yùn)用到藥品定性研究中，引起了業(yè)界的廣泛關(guān)注。

3.2 測(cè)定含量

HPLC法優(yōu)點(diǎn)眾多，難以在此一一羅列，僅舉其常見(jiàn)的幾點(diǎn)，便可一葉知秋，窺一斑而知全豹，比如其分辯率高、分析速度快，同時(shí)具有良好的重復(fù)性和樣品用量低下、自動(dòng)化程度高等等優(yōu)點(diǎn)。在定量測(cè)定藥品過(guò)程中，HPLC法具有其它方法無(wú)可比擬的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。

3.3 檢驗(yàn)中藥成分

中藥所含成分既多又復(fù)雜，只有各成分之間組合得當(dāng)，才能取得令人滿意的療效。中藥成分的特點(diǎn)呈多樣化和復(fù)雜性，這給分析中藥成分帶來(lái)了重重阻力。HPLC法的出現(xiàn)，能夠?qū)⒅兴幹懈鞒煞只虼郎y(cè)成分與其他雜質(zhì)進(jìn)行有效地、快速地脫軌、剝離，進(jìn)而把中藥中所含成分搞得清清楚楚。近入新世紀(jì)后，HPLC法更加廣泛地運(yùn)用于中藥檢驗(yàn)中，其作用日漸明顯。

4 結(jié) 論

高效液相色譜法技術(shù)領(lǐng)先，可操作性強(qiáng)，自動(dòng)化水平高，其正以獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，廣泛地運(yùn)用于藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中，并發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。

[1]劉占江.高效液相色譜法的應(yīng)用前景[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué).2015,8.

[2]李曉紅.高效液相色譜法在藥品檢驗(yàn)中的運(yùn)用價(jià)值分析[J].中國(guó)醫(yī)藥指南.2012,9.

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ISSN.2095-8242.2017.063.12463.02

劉欣悅