劉長(zhǎng)明， 張 磊， 楊 爽

(河北省承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心， 河北 承德 067000)

多葉唐松草藥材中鹽酸小檗堿的含量研究

劉長(zhǎng)明， 張 磊， 楊 爽

(河北省承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心， 河北 承德 067000)

目的：建立HPLC法馬尾連含量測(cè)定方法。方法：采用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，DAD檢測(cè)器，以乙腈-0.05%磷酸為流動(dòng)相，流速為1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm，進(jìn)樣量10μl。結(jié)果：5組多葉唐松草的鹽酸小檗堿含量為0.51%、0.81%、1.14%、0.61%、0.54%。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)，能夠快速、準(zhǔn)確地測(cè)定馬尾連(多葉唐松草)中鹽酸小檗堿含量，為更好地控制河北馬尾連的質(zhì)量并評(píng)價(jià)其藥用價(jià)值提供科學(xué)依據(jù)。

多葉唐松草； 含量測(cè)定； 中藥質(zhì)量控制

馬尾連為毛茛科植物多葉唐松草(Thalictrum foliolosum DC.)的根及根莖。[1]馬尾連和黃連相似。[2]其功效較多，如清熱、燥濕、解毒等。[3]多葉唐松草屬于唐松草屬植物。[4]唐松草屬植物含有較多生物堿，生物堿有抗菌、抗癌作用。鹽酸小檗堿作為其中有代表性的一種生物堿，本研究以鹽酸小檗堿為測(cè)定指標(biāo)，對(duì)多葉唐松草中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測(cè)定，并做了方法學(xué)驗(yàn)證，建立馬尾連(多葉唐松草)的鹽酸小檗堿含量測(cè)定方法，對(duì)馬尾連(多葉唐松草)中的鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行控制。

1 儀器、樣品和試劑

Waters e2695高效液相色譜儀 Agilent1100高效液相色譜儀，超聲波清洗器(天津科貝爾光電技術(shù)有限公司)，XS105型電子分析天平(瑞士梅特勒有限公司)。

藥材共計(jì)5個(gè)批次來(lái)自河北各地藥材市場(chǎng)，經(jīng)河北省藥品檢驗(yàn)院鑒定為毛茛科植物多葉唐松草(Thalictrum foliolosum DC.)的根及根莖。鹽酸小檗堿(含量為86.7%C20H18ClNO4)對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

乙腈、甲醇均為色譜純，水為杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司生產(chǎn)的純凈水，磷酸等試劑均為分析純。

2 方法學(xué)的建立與驗(yàn)證

2.1 對(duì)照品與樣品溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備：精取鹽酸小檗堿對(duì)照品，以流動(dòng)相[乙腈-0.05%磷酸溶液(21：79)]為溶劑，制成每1mL含25μg的溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備：取馬尾連粉末(過(guò)二號(hào)篩) 0.1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇-鹽酸(100：1)的混合溶液50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)1h，放冷，再稱定重量，用乙醇-鹽酸(100：1)的混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0.45m濾膜過(guò)濾，即得。

2.2 色譜條件：色譜柱：C18；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸溶液(21：79)；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；進(jìn)樣量：10μl。

2.3 專屬性考察：取對(duì)照品溶液、供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，并利用二極管陣列檢測(cè)器對(duì)峰純度進(jìn)行測(cè)試，表明其它成分不干擾被測(cè)成分的測(cè)定。見(jiàn)圖1。

圖1 馬尾連色譜純度圖

圖2 鹽酸小檗堿色譜純度圖

2.4 線性關(guān)系考察：精密量取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(0.01499g→50mL)，加[乙醇-鹽酸(100：1)]溶液配制成系列濃度溶液，質(zhì)量分別為0.05198、0.10397、0. 15595、0.20794、0.25992、0.31191、0.36389、0.41588、0. 4678610μg，根據(jù)“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，縱坐標(biāo)Y為峰面積，縱坐標(biāo)，橫坐標(biāo) X為鹽酸小檗堿質(zhì)量(μg)，計(jì)算線性回歸，所得回歸方程：Y=-78752+ 4910936X r=0.9999，線性范圍為 0.05198～0. 46786μg。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)：馬尾連(多葉唐松草)粉末，混勻，稱取粉末0.06g、0.10g、0.14g各三份，按“2.1.2”項(xiàng)下條件制備供試品溶液，根據(jù)“2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，鹽酸小檗堿含量平均值為1.65%，RSD為0.2%。表明重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一馬尾連(多葉唐松草)供試品溶液，在室溫下放置，分別于0、1、1.5、2、4.5、12、24h進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為0. 3%，表明供試品溶液24h內(nèi)放置較穩(wěn)定，基本無(wú)變化。

2.7 回收率試驗(yàn)：采用加樣回收法，取2.6項(xiàng)下已測(cè)知含量的馬尾連(多葉唐松草)粉末每份約0.10g，精密稱定，分別加入高、中、低濃度的對(duì)照品溶液，制備供試品溶液，根據(jù)“2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算出回收率，回收率為103.65%，RSD為1.0%，本方法的回收率符合要求。

2.8 耐用性實(shí)驗(yàn)：采用同一根色譜柱(Diamonsil)分別用Waters e2695、Agilent高效液相色譜儀，測(cè)定同一批樣品，含量結(jié)果Rd為1.7%；采用不同廠家的色譜柱( Diamonsil C18，5μm，4.6mm×200mm)、(Waters C18，5μm，4.6mm×250mm)、(Thermo C18，5μm，4.6mm× 150mm)，測(cè)定同一批馬尾連(多葉唐松草)樣品，分離度均較好，峰形均較對(duì)稱。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果更好的驗(yàn)證了此含量測(cè)定的方法適用于不同色譜儀，不同色譜柱。

2.9 多葉唐松草測(cè)定結(jié)果：取5組馬尾連(多葉唐松草)藥材，來(lái)自不同產(chǎn)地，分別按“2.1.2”項(xiàng)下條件制備供試品溶液，根據(jù)“2.2”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 馬尾連含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

馬尾連具有抗菌作用，與黃連抗菌譜相似，從馬尾連和黃連中分別提取的小檗堿，二者無(wú)論是抑菌范圍或是抑菌強(qiáng)度均表現(xiàn)一致性。[2]有文章研究選擇鹽酸小檗堿作為控制指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)唐松草植物中的總生物堿類含量，山東中藥材標(biāo)準(zhǔn)2012年版將鹽酸小檗堿作為馬尾連的指標(biāo)性成分，2015年版中國(guó)藥典將鹽酸小檗堿作為黃連的指標(biāo)性成分，因此，選用鹽酸小檗堿作為馬尾連的考察指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)從環(huán)保角度考慮，選擇乙醇-鹽酸溶液為提取溶劑，更優(yōu)于甲醇作為提取溶劑。選用鹽酸小檗堿的紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm，此波長(zhǎng)處鹽酸小檗堿有較大吸收。采用HPLC法建立多葉唐松草中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定方法。能更好的控制馬尾連其中一種基源(多葉唐松草)的質(zhì)量，此方法簡(jiǎn)單可靠，易于操作，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。對(duì)不同產(chǎn)地的馬尾連樣品分析，結(jié)果表明鹽酸小檗堿的含量有差別?？赡苡捎诋a(chǎn)地等方面因素，筆者將進(jìn)一步研究產(chǎn)地與質(zhì)量的影響。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.附錄22.

[2] 中國(guó)醫(yī)學(xué)研究院藥學(xué)研究所.中藥志[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1979.264～266.

[3] 李時(shí)珍.本草綱目[M].北京，人民衛(wèi)生出版社，1982.888～894.

[4] 張永紅，朱琳，任棣.唐松草屬植物葉的掃描電鏡觀察與鑒別[J].蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998，24(3)：21～23.

A【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2017.01.056

1006-6233(2017)01-0165-03

河北省承德市科技計(jì)劃自籌經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目，(編號(hào)：201601A010)