溫針治療佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠經(jīng)穴特異性及與肥大細(xì)胞的功能關(guān)系

荊翼,張迪

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溫針治療佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠經(jīng)穴特異性及與肥大細(xì)胞的功能關(guān)系

荊翼1,張迪2

(1.復(fù)旦大學(xué),上海 200433;2.上海市針灸機(jī)制與穴位功能重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,上海 201203)

目的 觀察溫針的鎮(zhèn)痛效應(yīng)并探討其與穴區(qū)肥大細(xì)胞的功能關(guān)系、穴位特異性。方法 SD大鼠60只,隨機(jī)分為空白組(C)、模型組(M)、足三里溫針組(Z)、對(duì)側(cè)溫針組(O)、手針組(A)、伏兔溫針組(F)、陽(yáng)陵泉溫針組(Y)、委中溫針組(W)、色甘酸鈉(Disodium cromoglycate)＋溫針組(DSCG＋Z)、生理鹽水＋溫針組(Saline＋Z)。以佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠為炎性反應(yīng)痛模型(AA模型),在體觀察溫針足三里、陽(yáng)陵泉、伏兔、委中過(guò)程中大鼠的縮爪反射潛伏期;并通過(guò)穴位組織切片染色,離體對(duì)照治療前后穴位處局部肥大細(xì)胞脫顆粒率的變化,以及穴區(qū)注射色甘酸鈉對(duì)其的影響。結(jié)果 溫針后穴區(qū)肥大細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象明顯(＜0.05),溫針鎮(zhèn)痛的效果要優(yōu)于手針治療(＜0.05),足三里溫針組經(jīng)治療后的痛閾均顯著高于伏兔溫針組、陽(yáng)陵泉溫針組和委中溫針組(＜0.05),針刺引起的肥大細(xì)胞脫顆?，F(xiàn)象能被色甘酸鈉顯著阻斷(＜0.05)。結(jié)論 溫針佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足三里穴可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛效應(yīng),其鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于手針組,且穴區(qū)處的肥大細(xì)胞脫顆粒率高于手針組,使用肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定劑色甘酸鈉預(yù)處理后,溫針的鎮(zhèn)痛效應(yīng)減弱。對(duì)于AA模型,溫針足三里穴的鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于陽(yáng)陵泉、伏兔、委中穴。

針灸療法;溫針療法;生物效應(yīng);肥大細(xì)胞;鎮(zhèn)痛效應(yīng);脫顆粒;大鼠

針刺療法是一種有效的鎮(zhèn)痛手段,從上世紀(jì)70年代開(kāi)始被國(guó)內(nèi)外廣泛接受,并應(yīng)用于臨床[1-2]。溫針灸是治療腰腿疼痛的常用療法,在毫針針刺后,于針尾加置艾炷,點(diǎn)燃后使其熱力通過(guò)針身傳至體內(nèi),始見(jiàn)于東漢時(shí)張仲景的《傷寒論》。臨床研究發(fā)現(xiàn),溫針灸能有效治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等痹證[3-4],對(duì)膝骨關(guān)節(jié)炎引起的活動(dòng)痛和關(guān)節(jié)壓痛都有顯著改善作用,并能有效降低復(fù)發(fā)率[5]。近年來(lái),可控溫度的溫針儀常被臨床研究所采用,哈斯高娃[6]發(fā)現(xiàn)溫針儀治療風(fēng)濕寒性膝關(guān)節(jié)痛要優(yōu)于傳統(tǒng)療法,并具有溫度可調(diào)、副反應(yīng)少等優(yōu)點(diǎn),王善言[7]發(fā)現(xiàn)溫針儀治療背肌筋膜炎能有效降低背肌筋膜炎患者的疼痛。

溫針治療的效果與針體的溫度有著密切關(guān)系,在軀體及皮膚組織中分布有感受不同溫度范圍的蛋白受體(瞬時(shí)感受器電位家族,TRP),其中TRPV1與溫度感受相關(guān)[8],可被熱刺激(＞43℃)激活[9],為闡明不同灸法產(chǎn)生不同的溫度熱刺激,從而產(chǎn)生不同的體表調(diào)節(jié)機(jī)體功能提供了生物學(xué)基礎(chǔ)。

為了闡明針刺作用的機(jī)制,近年來(lái)的研究已經(jīng)深入到細(xì)胞分子層面,有研究表明,穴區(qū)的肥大細(xì)胞的數(shù)量明顯多于非穴區(qū),并且有循經(jīng)分布的特點(diǎn)[10],而針刺可引起穴區(qū)皮膚和肌肉的肥大細(xì)胞增多并使肥大細(xì)胞產(chǎn)生脫顆粒的變化[11-13]。顆粒中的主要物質(zhì)包括P物質(zhì)、組胺、5-HT、中性蛋白酶、白三烯、前列腺素、腫瘤生長(zhǎng)因子等40多種介質(zhì),這些化學(xué)物質(zhì)是穴位局部產(chǎn)生炎性反應(yīng)的基礎(chǔ),而這種炎性反應(yīng)被看作針刺效應(yīng)產(chǎn)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)之一[14]。經(jīng)過(guò)近年來(lái)的臨床及實(shí)驗(yàn)研究,闡釋了部分組織、細(xì)胞在針刺鎮(zhèn)痛中的作用,但并未完全闡明針刺鎮(zhèn)痛的機(jī)制。

足陽(yáng)明胃經(jīng)的足三里穴(ST36)常被作為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的治療穴位,臨床研究顯示,電針足三里穴能降低類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血中致炎因子IL-1、IL-6、TNF-a水平[15-16]。足少陽(yáng)膽經(jīng)上的陽(yáng)陵泉穴(GB34)常被作為鎮(zhèn)痛效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)穴位,而同在足陽(yáng)明胃經(jīng)的伏兔穴(ST32)和足太陽(yáng)膀胱經(jīng)的委中穴(BL40)常被治療腰腿痛,本文從治療佐劑性關(guān)節(jié)炎的模型入手,來(lái)觀察這4個(gè)穴位的特異性。

本實(shí)驗(yàn)使用溫針儀器刺激大鼠足三里、伏兔、陽(yáng)陵泉、委中穴,選取溫度為TRPV1的激活溫度43℃,并用肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定劑色甘酸鈉預(yù)處理足三里穴位,通過(guò)治療急性佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠,觀察不同穴位溫針的鎮(zhèn)痛效應(yīng)并探討其與穴區(qū)肥大細(xì)胞的功能關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

清潔級(jí)SD成年雄性大鼠,共60只,體重(250±20)g,由中國(guó)科學(xué)院上海市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào)為SCXK(滬)2007-0005。所有大鼠在同等標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境(GB14925-2001)內(nèi)飼育和使用,給予自然照明、飲水和飲食,適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境約1星期。隨機(jī)分為10組,每組6只,分別為空白組(C)、模型組(M)、足三里溫針組(Z)、對(duì)側(cè)溫針組(O)、手針組(A)、伏兔溫針組(F)、陽(yáng)陵泉溫針組(Y)、委中溫針組(W)、色甘酸鈉＋溫針組(DSCG＋Z)、生理鹽水＋溫針組(Saline＋Z)。所有實(shí)驗(yàn)方法經(jīng)上海市針灸經(jīng)絡(luò)研究中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)通過(guò)。其中,足三里溫針組、伏兔溫針組、陽(yáng)陵泉溫針組、委中溫針組選取大鼠左側(cè)足三里穴,對(duì)側(cè)溫針組選取大鼠右側(cè)足三里穴,兩側(cè)痛閾均做檢測(cè)。

1.2 主要試劑與儀器

完全弗氏佐劑(CFA,美國(guó)Sigma);色甘酸鈉(DSCG,美國(guó)Sigma);IIT C 336 GT爪/尾痛覺(jué)測(cè)試儀(美國(guó));中蒙蒙醫(yī)YY-1型溫針治療儀;臺(tái)灣YCT TC-117高精度K型熱電偶溫度表;美孚含銀導(dǎo)熱硅脂。

1.3 急性佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型制備

對(duì)模型組、足三里溫針組、對(duì)側(cè)溫針組、手針組、伏兔溫針組、陽(yáng)陵泉溫針組、委中溫針組、色甘酸鈉＋溫針組、生理鹽水＋溫針組大鼠以10%水合氯醛按40 mg/kg劑量腹腔注射麻醉。夾尾無(wú)體動(dòng)反應(yīng)后,左踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射濃度為1 mg/mL的完全弗氏佐劑0.05 mL[17]。造模后24 h,大鼠左后肢踝關(guān)節(jié)出現(xiàn)紅腫,左后肢抬高,大鼠行動(dòng)遲緩,足底痛閾相較造模前降低,且其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明關(guān)節(jié)炎模型制備成功。

1.4 治療方法

1.4.1 溫針儀治療方法

將溫針頭端均勻涂抹美孚含銀導(dǎo)熱硅脂,采用臺(tái)灣YCT TC-117高精度K型熱電偶溫度表測(cè)量不同檔位下的溫針頭端溫度。測(cè)量得出25 mA檔位輸出溫度為43℃,選取該檔位為溫針治療檔位。根據(jù)分組,分別選取足三里穴、伏兔穴、陽(yáng)陵泉穴、委中穴為溫針穴位,參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[18]中常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位附圖定位,將溫針直刺入大鼠穴位,深度約為7 mm,留針20 min。對(duì)側(cè)溫針組是將左后肢造模的大鼠進(jìn)行右后肢的溫針治療,選取足三里穴,治療后檢測(cè)兩側(cè)的痛閾變化。

1.4.2 手針治療方法

根據(jù)足三里穴具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛效應(yīng),選取足三里穴為手針用穴。參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[18]中常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位附圖定位(位于腓骨小頭下方5 mm處),手針?lè)椒檫x擇0.35 mm×25 mm毫針直刺,深度約7 mm,按照1次/s的頻率進(jìn)行刺激。采用提插1 min,留針1 min,捻轉(zhuǎn)1 min,留針1 min的手法,反復(fù)交替,持續(xù)20 min。

1.4.3 穴位藥物注射

色甘酸鈉(DSCG)是肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定劑,具有抑制肥大細(xì)胞脫顆粒的作用。剃除大鼠左側(cè)后肢膝關(guān)節(jié)外下方被毛后,使用標(biāo)準(zhǔn)微升注射器在大鼠后左肢足三里穴區(qū)注射濃度為0.02 g/mL的色甘酸鈉20mL。注射時(shí)于穴位處直刺7 mm,邊注射邊回抽針體。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1 痛閾

各組分別于造模前、造模后24 h、治療前(造模后48 h)及治療后進(jìn)行痛閾測(cè)定,痛閾單位為秒(s)。將大鼠放入輻射熱測(cè)痛儀靜置30 min后,用輻射熱測(cè)痛儀照射大鼠右后足墊部,以引起動(dòng)物熱痛縮腿反應(yīng)的潛伏期來(lái)判定。每隔5 min測(cè)痛1次,共測(cè)3次,取其平均值作為痛閾值。為防止?fàn)C傷,將潛伏期上限定為20 s。

1.5.2 穴區(qū)局部肥大細(xì)胞脫顆粒率

各組足三里穴區(qū)組織切片采用0.5%甲苯胺藍(lán)(toluidine blue,TB)染色,常規(guī)脫水、透明后封片。在10×40倍光鏡下對(duì)皮膚中肥大細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。脫顆粒率=脫顆粒肥大細(xì)胞數(shù)/肥大細(xì)胞總數(shù)×100%。每只動(dòng)物組織塊(體積約5 mm×5 mm×5 mm)取近針刺部位的3張切片進(jìn)行肥大細(xì)胞脫顆粒率平均值計(jì)算,在此基礎(chǔ)上統(tǒng)計(jì)每組肥大細(xì)胞脫顆粒率。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,使用SPSS16.0軟件,組間比較采用-檢驗(yàn),以＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 溫針對(duì)AA大鼠痛閾的影響

從圖1和表1進(jìn)行組內(nèi)比較可以看出,各組造模后24 h與造模前痛閾比較,均有顯著性差異(＜0.05),提示造模成功。足三里溫針組、對(duì)側(cè)溫針組左側(cè)(O L)、手針組、伏兔溫針組在治療后,痛閾相比治療前均有顯著性上升(＜0.05),而對(duì)側(cè)溫針組右側(cè)(O R)則無(wú)顯著性差異(＞0.05),說(shuō)明足三里穴、伏兔穴溫針治療對(duì)AA大鼠模型有效,并且,對(duì)側(cè)溫針治療在不提高對(duì)側(cè)后肢痛閾的前提下,依舊能提高造模側(cè)痛閾,說(shuō)明溫針鎮(zhèn)痛的效應(yīng)是由穴位引導(dǎo)產(chǎn)生,并不是簡(jiǎn)單的溫度傳導(dǎo)。

進(jìn)行組間比較可以發(fā)現(xiàn)足三里溫針組與手針組比較,溫針治療的效果要遠(yuǎn)好于手針治療(＜0.05),而足三里溫針組經(jīng)治療后痛閾均顯著高于伏兔溫針組、陽(yáng)陵泉溫針組和委中溫針組(＜0.05),說(shuō)明對(duì)于大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎,溫針足三里穴的鎮(zhèn)痛效果要優(yōu)于其他三穴,足三里穴具有特異性,與肥大細(xì)胞脫顆粒的結(jié)果相聯(lián)系,提示肥大細(xì)胞參與到了溫針鎮(zhèn)痛的效應(yīng)中。

除此之外,生理鹽水＋溫針組治療前后有顯著性差異(＜0.05),而色甘酸鈉＋溫針組無(wú)顯著性差異。足三里溫針組與色甘酸鈉＋溫針組相比,治療后的痛閾有顯著性差異(＜0.05),而與生理鹽水＋溫針組則無(wú)差異(＞0.05)。且色甘酸鈉＋溫針組相比生理鹽水＋溫針組,治療后痛閾有顯著性差異(＜0.05),結(jié)合肥大細(xì)胞脫顆粒率可看出,經(jīng)過(guò)色甘酸鈉的固定后,肥大細(xì)胞脫顆粒率減少,溫針對(duì)于痛閾的升高效應(yīng)也有所減弱,說(shuō)明肥大細(xì)胞在參與溫針鎮(zhèn)痛中發(fā)揮了重要的效應(yīng),肥大細(xì)胞脫顆粒的物質(zhì)可提高佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的痛閾。

2.2 溫針對(duì)AA大鼠肥大細(xì)胞脫顆粒的影響

從圖2、圖3、表2可以看出,模型組與空白組比較,肥大細(xì)胞脫顆粒率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＞0.05),足三里溫針組的肥大細(xì)胞脫顆粒率高于模型組(＜0.05),且足三里溫針組的肥大細(xì)胞脫顆粒率明顯高于手針組(＜0.05),說(shuō)明溫針治療對(duì)于AA大鼠的鎮(zhèn)痛效果顯著優(yōu)于手針治療。

色甘酸鈉＋溫針組與生理鹽水＋溫針組相比較,肥大細(xì)胞脫顆粒率有顯著差異性(＜0.05),說(shuō)明溫針治療引起的肥大細(xì)胞脫顆粒現(xiàn)象能被色甘酸鈉顯著阻斷。

足三里溫針組與伏兔溫針組、陽(yáng)陵泉溫針組、委中溫針組相比均有顯著性差異(＜0.05),提示足三里穴區(qū)處肥大細(xì)胞對(duì)溫針刺激的感受不同于其他三穴。

注:組內(nèi)比較,與造模前比較1)P＜0.05;與治療前比較2)P＜0.05;組間比較,與足三里溫針組組比較3)P＜0.05;與色甘酸鈉＋溫針組比較4)P＜0.05

表1 各組大鼠的痛閾及痛閾變化率 (±s)

表1 各組大鼠的痛閾及痛閾變化率 (±s)

組別n造模前造模后治療后治療前后痛閾變化率/% 空白組614.32±0.7814.15±0.5314.15±0.53- 模型組615.06±1.079.65±0.501)9.65±0.50- 足三里溫針組614.43±0.899.15±0.481)16.09±0.812)77.39±10.95 對(duì)側(cè)溫針組左側(cè)614.69±1.018.98±0.331)15.39±1.532)73.79±20.84 對(duì)側(cè)溫針組右側(cè)614.20±0.8314.42±1.0014.70±0.923.16±6.98 手針組615.12±0.878.83±0.631)11.64±0.932)3)32.42±8.52 色甘酸鈉＋溫針組615.39±0.469.56±0.401)10.49±0.603)9.51±2.27 生理鹽水＋溫針組614.92±0.319.17±0.461)15.78±0.552)4)75.22±13.73 伏兔溫針組616.50±0.868.94±0.431)12.48±0.972)3)40.04±9.99 陽(yáng)陵泉溫針組616.98±0.819.11±0.451)11.75±1.303)29.86±15.09 委中溫針組615.58±0.5310.93±0.361)13.14±1.003)21.76±9.46

注:與造模前比較1)＜0.05;與治療前比較2)＜0.05;與足三里溫針組比較3)＜0.05;與色甘酸鈉＋溫針組比較4)＜0.05

注:與模型組比較1)P＜0.05;與足三里溫針組比較2)P＜0.05;與色甘酸鈉＋溫針組比較3)P＜0.05

注:標(biāo)尺表50 mm,箭頭所指為肥大細(xì)胞,在圖A、圖B、圖F中可以觀察到細(xì)胞膜光滑完整、處于穩(wěn)定狀態(tài)下的肥大細(xì)胞;圖C、圖D、圖G、圖H中可見(jiàn)經(jīng)溫針治療后,肥大細(xì)胞的細(xì)胞膜破裂,在細(xì)胞周圍還有被染色的顆粒

表2 大鼠皮膚中穴位處肥大細(xì)胞脫顆粒率 (±s)

表2 大鼠皮膚中穴位處肥大細(xì)胞脫顆粒率 (±s)

組別n肥大細(xì)胞脫顆粒率/% 空白組645.66±2.80 模型組651.82±1.70 足三里溫針組677.95±1.751) 對(duì)側(cè)溫針組669.65±0.98 手針組653.28±3.252) 色甘酸鈉＋溫針組648.36±1.93 生理鹽水＋溫針組667.05±2.893) 伏兔溫針組668.85±2.772) 陽(yáng)陵泉溫針組661.68±2.412) 委中溫針組660.33±1.482)

注:與模型組比較1)＜0.05;與足三里溫針組比較2)＜0.05;與色甘酸鈉＋溫針組比較3)＜0.05

3 討論

由于足三里穴位具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛效應(yīng),所以本實(shí)驗(yàn)選取該穴位作為實(shí)驗(yàn)穴位[19]。氣血喜溫惡寒,遇寒則滯,遇溫則行,因而當(dāng)血脈瘀滯,則需以溫促通。本文結(jié)果顯示溫針足三里穴效果優(yōu)于手針效果,進(jìn)一步提示了溫度的提升提高了針灸對(duì)痹證鎮(zhèn)痛效果的影響。近年來(lái)經(jīng)穴特異性的研究表明,經(jīng)穴下不同的組織結(jié)構(gòu)特征是決定經(jīng)穴效應(yīng)特異性的關(guān)鍵因素之一,本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,足三里穴對(duì)AA大鼠的鎮(zhèn)痛效果顯著優(yōu)于同處于足陽(yáng)明胃經(jīng)的伏兔穴,而伏兔穴的效果又優(yōu)于足少陽(yáng)膽經(jīng)的陽(yáng)陵泉穴和足太陽(yáng)膀胱經(jīng)的委中穴。即同一經(jīng)脈的不同腧穴、不同經(jīng)脈上的不同腧穴之間在對(duì)AA大鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)方面,雖均可提升大鼠的痛閾,但存在效應(yīng)量上的差異,足三里穴對(duì)AA大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)明顯優(yōu)于其他三穴。提示足三里穴對(duì)AA大鼠有著獨(dú)特的鎮(zhèn)痛作用,與在臨床上足三里穴主治下肢痿痹的“經(jīng)穴-病癥特異性”相符合。

經(jīng)穴形態(tài)結(jié)構(gòu)特異性是經(jīng)穴特異性的基礎(chǔ)。嚴(yán)振國(guó)等[20]研究足三里、合谷、內(nèi)關(guān)、神門等穴位的顯微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),神經(jīng)、血管和淋巴在不同穴位的分布不盡相同,而這些不同的結(jié)構(gòu)在不同穴位中所起的作用亦各有側(cè)重。王秀云等[21]發(fā)現(xiàn)腧穴處的K﹢濃度相比非經(jīng)穴處具有一定的特異性,腧穴處可能存在著K﹢的富集。本文中,溫針足三里穴產(chǎn)生的肥大細(xì)胞脫顆粒率高于伏兔穴、陽(yáng)陵泉穴、委中穴,與痛閾變化的結(jié)果相結(jié)合,可提示不同穴位由于結(jié)構(gòu)功能的不同、對(duì)熱刺激及熱能量的傳導(dǎo)不同,導(dǎo)致肥大細(xì)胞脫顆粒率有差異,進(jìn)而在溫針鎮(zhèn)痛中發(fā)揮的功能存在差異性。

足三里穴位肥大細(xì)胞脫顆粒與針刺鎮(zhèn)痛效應(yīng)關(guān)系密切,作為機(jī)體疏松結(jié)締組織內(nèi)的一種常見(jiàn)細(xì)胞,肥大細(xì)胞和周圍的血管、神經(jīng)叢、淋巴管等交織形成一個(gè)復(fù)雜體系,從而構(gòu)成穴位的物質(zhì)基礎(chǔ)[22]。肥大細(xì)胞雖然在機(jī)體中隨機(jī)分布,但他們更傾向于聚集在血管和神經(jīng)周圍,它們與周圍神經(jīng)末梢的廣泛部位有密切接觸,有時(shí)呈膜對(duì)膜接觸,但不形成類似突觸的關(guān)系。電鏡下測(cè)量肥大細(xì)胞與神經(jīng)細(xì)胞之間的距離,約8%肥大細(xì)胞與大鼠腸黏膜上的神經(jīng)細(xì)胞以膜-膜方式接觸,31%肥大細(xì)胞與神經(jīng)細(xì)胞之間的包膜間隙約250 nm[23-24]。一般認(rèn)為,生物體內(nèi)解剖結(jié)構(gòu)上的密切聯(lián)系往往提示功能上的相互作用。神經(jīng)-免疫-內(nèi)分泌調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)理論認(rèn)為,免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)以及內(nèi)分泌系統(tǒng)相互之間都存在著雙向聯(lián)系,這種聯(lián)系通過(guò)化學(xué)信息分子和受體實(shí)現(xiàn),肥大細(xì)胞與神經(jīng)之間的聯(lián)絡(luò)是免疫系統(tǒng)與神經(jīng)系統(tǒng)相互作用的基本內(nèi)容之一[25]。根據(jù)這一理論,肥大細(xì)胞與神經(jīng)纖維間存在的密切解剖關(guān)系是兩者之間功能聯(lián)系的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。肥大細(xì)胞合成釋放的生物活性物質(zhì)可以改變神經(jīng)元的活動(dòng),如類胰蛋白酶可直接激活神經(jīng)元上的蛋白酶活化受體[26],腫瘤壞死因子和神經(jīng)生長(zhǎng)因子可降低神經(jīng)興奮電位的閾值[27]。而神經(jīng)細(xì)胞的活動(dòng)也可影響肥大細(xì)胞的活動(dòng),神經(jīng)系統(tǒng)經(jīng)典遞質(zhì)如肽類遞質(zhì)、嘌呤類遞質(zhì)、一氧化氮以及許多神經(jīng)來(lái)源的細(xì)胞因子都對(duì)肥大細(xì)胞的功能有調(diào)節(jié)作用[28]。肽能神經(jīng)末梢有大量念珠狀的膨體,一定條件下,貯存于膨體內(nèi)的神經(jīng)肽可被釋放,以調(diào)節(jié)周圍靶細(xì)胞或靶組織。神經(jīng)肽SP和NPY(neuropeptide Y)可以通過(guò)受體非依賴機(jī)制促進(jìn)肥大細(xì)胞脫顆粒而釋放生物活性物質(zhì)[29-30]。

本研究中,足三里穴位使用肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定劑色甘酸鈉預(yù)處理后,溫針治療產(chǎn)生的鎮(zhèn)痛效應(yīng)也被抑制,提示該鎮(zhèn)痛效應(yīng)可能與溫針引起的肥大細(xì)胞脫顆粒有密切聯(lián)系。針刺引起穴位處肥大細(xì)胞脫顆粒釋放出眾多炎性遞質(zhì)和細(xì)胞因子,作用于其附近的周圍神經(jīng)末梢使神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生痛覺(jué)調(diào)制效應(yīng)。同針刺類似,一定強(qiáng)度的溫針亦存在鎮(zhèn)痛效應(yīng),同時(shí)還使肥大細(xì)胞產(chǎn)生脫顆粒的變化。這種鎮(zhèn)痛效應(yīng)可能與肥大細(xì)胞的功能關(guān)系密切,但需注意的是溫針不但影響到穴區(qū)的肥大細(xì)胞,還會(huì)對(duì)穴區(qū)的其他組織細(xì)胞產(chǎn)生生物效應(yīng),如溫針能夠使局部組織溫度升高,血液流動(dòng)加速,局部組織代謝增強(qiáng);使局部組織內(nèi)細(xì)胞胞膜通透性增加等。這些生物效應(yīng)與肥大細(xì)胞脫顆粒釋放的生物活性物質(zhì),共同作用于周圍神經(jīng)末梢而使神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生痛覺(jué)調(diào)制。

對(duì)針灸療效機(jī)制的探討,本文提出溫針的鎮(zhèn)痛效應(yīng)可能與穴區(qū)肥大細(xì)胞脫顆粒有密切關(guān)系,而對(duì)于溫針鎮(zhèn)痛效應(yīng)的更確切機(jī)制,還有待進(jìn)一步的研究。

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Warm Needling-based Specificity of Acupoints and Its Relationship with Mast Cell Function in Adjuvant Arthritis Rats

1,2.

1.,,200433,; 2.,201203,

Objective To investigate the analgesic effect of warm needling and explore its relationship with the function of mast cells in the acupoint area and the specificity of acupoints. Method Sixty SD rats were randomized into blank (C), model (M), warm needling Zusanli (Z), contralateral warm needling (O), manual acupuncture (A), warm needling Futu (F), warm needling Yanglingquan (Y), warm needling Weizhong (W), disodium cromoglycate + warm needling (DSCG＋Z) and saline + warm needling (Saline＋Z) groups. A rat with adjuvant arthritis was used as a model of inflammatory pain (AA model). Hindpaw withdrawal latency was measured in the rats during warm needling at Zusanli (ST36), Yanglingquan (SP9), Futu (ST32) and Weizhong (BL40). Pre-treatment and post-treatment rates of mast cell degranulation in the acupoint area were compared and the effect of acupoint area injection of disodium cromoglycate on the degranulation was observed by acupoint tissue section staining. Result Obvious degranulation of mast cells in the acupoint area appeared after warm needling (＞0.05). The analgesic effect of warm needling was better than that of manual acupuncture (＞0.05). After treatment, pain threshold was significantly higher in the warm needling Zusanli group than in the warm needling Futu, warm needling Yanglingquan and warm needling Weizhong groups (＞0.05). Acupuncture-induced mast cell degranulation could be prevented by disodium cromoglycate (＞0.05). Conclusion Warm needling at point Zusanli can produce an analgesic effect in adjuvant arthritis rats. Its analgesic effect is better than that of manual acupuncture. The rate of mast cell degranulation in the acupoint area is higher in the warm needling Zusanli group than in the manual acupuncture group. The analgesic effect of warm needling is reduced after pretreatment with disodium cromoglycate, a mast cell stabilizer. In an AA model, the analgesic effect of warm needling at point Zusanli is better than those of warm needling at points Yanglingquan, Futu and Weizhong.

Acupuncture-moxibustion therapy; Warm needling therapy; Biological effect; Mast cell; Analgesic effect; Degranulation; Rats

1005-0957(2017)02-0229-07

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2017.02.0229

2016-06-20

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81102630,81590950,81574053,81303027,81590953);國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(2012CB518502);上海市針灸機(jī)制與穴位功能重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(14DZ2260500)

荊翼(1990—),男,2013級(jí)碩士生,Email:13210290015@fudan.edu.cn

張迪(1980—),女,副教授,研究方向?yàn)樯镂锢砑搬樉臋C(jī)制研究,Email:dizhang@fudan.edu.cn