黃繼超　姜德清　王宗山　溫江濤　孫詠梅　柯群剛　郝占偉

[摘要]目的探討血漿多聚免疫球蛋白受體（PIgR/SC）、甲胎蛋白（AFP）對(duì)原發(fā)性肝癌（PHC）的診斷價(jià)值及聯(lián)合檢測(cè)的意義。方法選取50例原發(fā)性肝癌患者、30例肝良性占位患者、45例肝硬化患者和60例健康志愿者進(jìn)行研究，抽取每位研究對(duì)象4mL空腹靜脈血，采用電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)檢測(cè)患者血清中的甲胎蛋白（AFP）濃度，采用自行包被的ELISA檢測(cè)板和OD值半定量法檢測(cè)血漿PIgR/SC。肝癌患者手術(shù)切除后1周重復(fù)檢測(cè)AFP和PIgR/SC水平。結(jié)果肝癌、肝良性占位、肝硬化和志愿者4組患者PIgR/SC和AFP水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），兩兩分析，肝癌患者PIgR/SC高于肝良性占位患者、肝硬化患者和志愿者（P<0.05）。PIgR/SC診斷原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的敏感度為76%高于AFP的66%，特異性為68.9%，低于AFP的81.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。聯(lián)合檢測(cè)PIgR/SC、AFP可提高肝癌患者的診斷率。PIgR/SC與AFP串聯(lián)檢測(cè)診斷肝癌的特異度為95.6%，2項(xiàng)指標(biāo)并聯(lián)檢測(cè)診斷肝癌的靈敏度為92.0%，明顯高于單用PIgR/SC或AFP（P<0.05）；結(jié)論聯(lián)合檢測(cè)PIgR/SC、AFP可顯著提高原發(fā)性肝癌患者的診斷率。

[關(guān)鍵詞]多聚免疫球蛋白受體；甲胎蛋白；原發(fā)性肝癌；診斷價(jià)值

[中圖分類號(hào)]R735.7

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2095-0616（2016）23-15-04

原發(fā)性肝癌（簡(jiǎn)稱肝癌），是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在世界各地都有增加的趨勢(shì)，我國(guó)的新發(fā)病例占了全球肝癌病例的一半以上。肝癌具有惡性程度高、早期診斷率低、預(yù)后差、病死率高的特點(diǎn)，因此，肝癌的早期診斷是治療和延長(zhǎng)患者生存期的關(guān)鍵。檢測(cè)肝癌血清中腫瘤標(biāo)志物是目前早期診斷的主要手段之一。目前常用的肝癌腫瘤標(biāo)志物為甲胎蛋白（AFP）。但臨床上約有30%肝癌病人AFP無(wú)明顯升高。而在慢性肝炎和肝硬化等一些慢性肝病中，AFP也會(huì)出現(xiàn)高水平表達(dá)。由于其敏感性與特異性不令人滿意，美國(guó)肝病研究協(xié)會(huì)和歐洲肝病研究協(xié)會(huì)有提出不推薦將血清AFP作為常規(guī)篩查診斷指標(biāo)。而AFP與其他腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合應(yīng)用很可能會(huì)顯著增加AFP診斷的靈敏度。因此，尋找AFP以外特異性和靈敏度更高的肝癌診斷標(biāo)志物，對(duì)提高肝癌的早期診斷率有重要臨床價(jià)值。本研究中我們探討檢測(cè)血漿多聚免疫球蛋白受體（polymeric immunoglobulinreceptor/secretory component，PIgR/SC）與甲胎蛋白聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝癌的診斷價(jià)值。

1.資料與方法

1.1一般資料

選擇2012年1月～2015年12月在連云港市第二人民醫(yī)院就診的原發(fā)性肝癌患者44例以及贛榆縣人民醫(yī)院同期收治的6例肝癌患者、肝硬化患者45例、肝良性占位患者30例及健康志愿者60例，肝癌患者均符合中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)2001年制定的《原發(fā)性肝癌》臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男33例，女17例，年齡（56.5±7.2）歲，均經(jīng)手術(shù)切除病理證實(shí)為原發(fā)性肝癌；肝硬化患者均符合2005年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、感染病學(xué)分會(huì)聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》中肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男31例，女14例，年齡（54.5±6.5）歲，均經(jīng)臨床表現(xiàn)、生化、CT、MRI等綜合檢查確診已排除肝癌；肝良性占位患者，男11例，女1 9例，年齡（52.6±8.1），其中肝血管瘤13例，肝囊腫17例，三組間一般情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。同時(shí)抽取我院同期體檢的健康志愿者60例作為正常對(duì)照組，其中男30例，女30例，平均年齡（50.5±9.1）歲。

1.2標(biāo)本采集

所有受研究者均于清晨空腹采集外周靜脈血4mL，其中2mL置入抗凝管中，3000r/min（離心半徑為10cm）離心15min，分離血漿，用于檢測(cè)PIgR/sC；另外2mL置人真空采血管，室溫自然凝集1h后，3000r/min（離心半徑為10cm）離心15min，分離血清用于檢測(cè)AFP。

1.3檢測(cè)方法

（1）AFP采用電化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析系統(tǒng)（Cobase e601）及配套試劑盒檢測(cè)患者血清中的AFP濃度。（2）PIgR/SC采用ELISA法測(cè)定，經(jīng)包被、封閉、加樣、加酶標(biāo)體、顯色、終止反應(yīng)等步驟，在酶標(biāo)儀雙波長(zhǎng)450nm/570 nm，檢測(cè)各孔的OD值。

1.4結(jié)果判斷

根據(jù)受試者工作特征（ROC）曲線確定對(duì)肝癌的診斷界值，假陽(yáng)性和假陰性的病例數(shù)之和最小處為最佳臨界點(diǎn)（cutoff值約為0.805），大于或等于cutoff值者為陽(yáng)性，小于cutoff值者為陰性。聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，串聯(lián)要求兩項(xiàng)結(jié)果均為陽(yáng)性，并聯(lián)要求其中一項(xiàng)陽(yáng)性即判斷為陽(yáng)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSSl6.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理，計(jì)量資料（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分比表示，采用X²檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1各組pIgR/SC和AFP水平比較

從表1與表2可以看出，肝癌組患者PIgR/SC和AFP水平明顯高于肝硬化、肝良性占位患者和志愿者3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；提示PIgR/SC診斷肝癌具有特異性，不易受到肝臟良性病變及健康人群的干擾。從表3可以看出原發(fā)性肝癌患者血漿PIgR/SC的陽(yáng)性率高于AFP的陽(yáng)性率（P<0.05），這可能對(duì)肝癌的診斷尤其是AFP陰性肝癌的診斷是一個(gè)有益的補(bǔ)充。

2.2 PIgR/SC和AFP項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝癌的診斷價(jià)值

PIgR/SC與AFP串聯(lián)檢測(cè)診斷肝癌的特異度為95.6%，明顯高于單用PIgR/SC（x²=4.76，P<0.05）或AFP組（x²=10.24，P<0.05）；2項(xiàng)指標(biāo)并聯(lián)檢測(cè)診斷肝癌的靈敏度為92.0%，明顯高于單用PIgR/SC（x²=32.96，P<0.05減AFP組（x²=10.19，P<0.05）。提示應(yīng)用PIgR/SC與AFP聯(lián)合檢測(cè)肝癌具有較高價(jià)值。見表4。

3.討論

肝癌因其高病死率排行全球腫瘤第三位，對(duì)人類的生命和健康造成嚴(yán)重危害，其五年生存率較低。大部分患者不能早期發(fā)現(xiàn)，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)即有肝內(nèi)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，僅有15%左右的患者有機(jī)會(huì)接受手術(shù)治療。而早期肝癌患者經(jīng)治療后5年生存率可達(dá)50%～75%，因此探尋一種簡(jiǎn)便有效的檢測(cè)方法來(lái)篩查或診斷肝癌對(duì)患者的治療和預(yù)后均有著非常重要的意義。隨著影像學(xué)的快速發(fā)展，肝癌的診斷技術(shù)有了長(zhǎng)足進(jìn)步，但從檢查的便捷和經(jīng)濟(jì)等方面考慮，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目的地位仍然不可替代。AFP是目前常用的原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)志物，但其敏感度和特異度均存在不同程度的不足，臨床上有較高的假陰性率，導(dǎo)致肝癌的漏檢率達(dá)30%～40%。本研究中，AFP的診斷敏感度為66.0%，特異性為81.5%，假陰性率達(dá)34%（17/50），與報(bào)道相符合，提示單用AFP檢測(cè)不能充分支持臨床診斷。尋找其他的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目來(lái)幫助肝癌的臨床診斷就非常必要。

PlgR是腺上皮細(xì)胞表達(dá)的一種糖蛋白，其能夠在原發(fā)性肝癌中過(guò)表達(dá)。目前關(guān)于PIgR的研究比較多，但多數(shù)是研究腫瘤組織中PIgR過(guò)表達(dá)與肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)或肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系，用以判斷預(yù)后。而關(guān)于PIgR對(duì)原發(fā)性肝癌診斷的作用研究尚未見諸文獻(xiàn)報(bào)道。SC是PIgR的裂解片段，有學(xué)者報(bào)道采用ELISA檢測(cè)方法結(jié)合OD值半定量法成功的在人外周血中檢測(cè)出PIgR/SC蛋白，我們參考其方法應(yīng)用于本研究，并在受試者外周血中成功檢測(cè)出了PIgR/SC蛋白，證實(shí)其檢測(cè)方法可行。

檢驗(yàn)結(jié)果顯示，PIgR/SC敏感度（88.0%）明顯高于AFP（66.0%），而且在AFP陰性組也有較高陽(yáng)性率，提示PIgR/SC對(duì)原發(fā)性肝癌具有較高診斷價(jià)值。但據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，PIgR在很多組織和器官炎癥和上皮來(lái)源腫瘤中均升高，故本研究PIgR/SC的特異度偏低（68.9%）。本研究中PIgR/SC與AFP串聯(lián)檢測(cè)診斷肝癌的特異度為95.6%，并聯(lián)檢測(cè)診斷肝癌的靈敏度為92.0%，明顯高于單用PIgR/SC或AFP組（P<0.05）。提示PIgR/SC+AFP聯(lián)合檢測(cè)可以提高肝癌的確診率。肝癌組患者PIgR/SC水平明顯高于肝硬化、肝良性占位患者和志愿者3組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；提示PIgR/SC診斷肝癌具有一定的特異性。原發(fā)性肝癌患者血漿PIgR/SC的陽(yáng)性率高于AFP的陽(yáng)性率，提示PIgR/SC診斷肝癌的敏感性較高，這可能對(duì)肝癌的診斷尤其是AFP陰性肝癌的診斷是一個(gè)有益的補(bǔ)充。PIgR/SC與AFP串聯(lián)檢測(cè)診斷肝癌的特異度為95.6%，而2項(xiàng)指標(biāo)并聯(lián)檢測(cè)診斷肝癌的靈敏度為92.0%，均明顯高于單用PIgR/sC或AFP（P<0.05），提示應(yīng)用PIgR/SC與AFP聯(lián)合檢測(cè)診斷肝癌強(qiáng)于PIgR/SC或AFP單項(xiàng)應(yīng)用。

綜上所述，PIgR/SC對(duì)原發(fā)性肝癌診斷具有較高價(jià)值。其敏感性高于AFP，提示PIgR/SC對(duì)肝癌的診斷或篩查具有重要的臨床意義，但因PIgR/SC的特異度偏低，診斷肝癌易出現(xiàn)假陽(yáng)性可能，而PIgR/SC+AFP聯(lián)合檢測(cè)可以提高肝癌的靈敏度和特異度，較好的彌補(bǔ)了單用PIgR/SC檢測(cè)的不足，具有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。但本研究首次將血漿PIgR/SC及血清AFP聯(lián)合檢測(cè)用于原發(fā)性肝癌的診斷，結(jié)果尚有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證；對(duì)于原發(fā)性肝癌患者血漿PIgR/SC的升高機(jī)制還需進(jìn)一步研究證實(shí)。本次受研究條件、病例所限，我們僅對(duì)肝癌、肝臟良性占位、肝硬化和健康體檢者進(jìn)行了研究，未納入其它腫瘤或炎性占位的患者，有待于在以后的研究中進(jìn)一步開展。