制備手工濃縮血小板數(shù)量收集影響因素的分析

王國(guó)芳+楊明霞

摘要：目的 探討富血小板血漿法制備手工濃縮血小板數(shù)量收集和紅細(xì)胞混入量的影響因素。方法 選取600袋血液分成1個(gè)觀察組，2個(gè)對(duì)照組，采用相同的離心時(shí)間、溫度、離心機(jī)，不同的離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行手工血小板制備，對(duì)比血小板和紅細(xì)胞含量。結(jié)果 相同離心溫度、相同離心時(shí)間、不同離心轉(zhuǎn)速制備的手工血小板含量、紅細(xì)胞含量不同。結(jié)論 400 ml全血，轉(zhuǎn)速1980 rpm、10 min、22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔2；300 ml全血，轉(zhuǎn)速2070 rpm、5.5 min、22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔2離心作為第一次輕離心制備的手工濃縮血小板效果最好。

關(guān)鍵詞：離心；轉(zhuǎn)速；血小板；紅細(xì)胞

Abstract：Objective To investigate the factors influencing the accumulation of platelet count and the amount of red blood cells mixed with platelet-rich plasma.Methods 600 bags of blood were divided into one observation group and two control groups.The same centrifugation time， temperature， centrifuge and different centrifugal speed were used to prepare the platelet and erythrocyte.Results The same centrifugal temperature，the same centrifugal time，different centrifugal speed prepared by the manual platelet content，red blood cell content is different.Conclusion 400 ml whole blood， speed 1980 rpm，10 min，22 ℃，acceleration gear 9，brake file 2；300 ml whole blood，speed 2070 rpm，5.5 min，22 ℃，acceleration gear 9，brake file 2 centrifugal as the first light centrifugal preparation of hand-concentrated platelets the best effect.

Key words：Centrifugal；Speed；Platelets；Red blood cells

濃縮血小板對(duì)治療出血性疾病有重要作用，血小板含量與純度直接影響治療效果。手工血小板與機(jī)采血小板相比具有采集時(shí)間短、成本低、容易招募的優(yōu)點(diǎn)，在歐美國(guó)家手工濃縮血小板應(yīng)用較普遍，但其需多人份輸注，對(duì)機(jī)體易產(chǎn)生抗原性。因此，如何提高手工制備濃縮血小板含量與純度，保證臨床療效，是需要解決的問(wèn)題，特進(jìn)行以下研究：

1 資料與方法

從2015年5月1日～2016年4月30日隨機(jī)抽取600袋血液，其中400 ml的300袋，300 ml的300袋，都分為1個(gè)觀察組100袋和2個(gè)對(duì)照組各100袋，采用相同的離心時(shí)間、溫度、離心機(jī)，不同的離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行手工血小板制備。

1.1原料血的選擇 從2015年4月1日～2016年3月31日采集的血液中選擇符合制備血小板的原料血。

1.2主要儀器設(shè)備 大容量低溫冷凍離心機(jī)（日立CR7）；含CPDA-1抗凝劑的四聯(lián)采血袋（山東威高，5d保存袋），規(guī)格為400 ml、300 ml；配平秤；分漿夾；開(kāi)口夾子；血小板恒溫震蕩保存箱（美國(guó)HELMEL）；全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（MEDONIC AC620）。

1.3方法

1.3.1靜脈采血 為使采血順利，血流通暢，盡量選擇清晰可見(jiàn)、粗大、充盈飽滿(mǎn)、彈性好、較固定的血管。300 ml和400 ml全血要在8 min和10 min內(nèi)采集完成，采血過(guò)程中沒(méi)有中斷現(xiàn)象，輕搖混勻，采集后的血液運(yùn)輸和貯存溫度要求（22±2）℃，采血后6 h內(nèi)制備完成。

1.3.2成分制備 采用富血小板血漿法，將300 ml和400 ml全血分別離心。參數(shù)設(shè)置：提前將離心機(jī)溫度調(diào)成20～24℃，300 ml全血時(shí)間設(shè)為5.5 min，400 ml全血時(shí)間設(shè)為10 min，加速檔為9，剎車(chē)檔為2。第1次輕離心，使紅細(xì)胞下沉，輕取血袋放于分漿夾上，緩慢分出富血小板血漿于轉(zhuǎn)移袋，熱合分離紅細(xì)胞袋。第2次重離心：將富含血小板血漿的轉(zhuǎn)移袋裝罐，離心條件是轉(zhuǎn)速3550 rpm、22℃、6 min、加速檔為9，剎車(chē)檔為5，離心后分出上層血漿，下層即為血小板濃縮液，血小板濃縮液在室溫靜置1 h（平放無(wú)折疊），輕搖解聚后放入（22±2）℃血小板保存箱震蕩保存。正常血小板肉眼觀察呈黃色云霧狀液體，計(jì)數(shù)越高云霧狀越明顯，無(wú)色澤異常、蛋白析出、氣泡及中度以上乳糜。

1.3.3血小板、紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 通過(guò)MEDONIC AC620全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，選擇血小板測(cè)定模式，完成濃縮血小板計(jì)數(shù)及混入紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2 結(jié)果

見(jiàn)表1，表2。

3 討論

影響手工制備濃縮血小板數(shù)量收集和紅細(xì)胞混入量的影響因素有很多，本研究主要討論了離心速度對(duì)血小板收集和紅細(xì)胞混入量的影響。

從表1中統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，400 ml全血第一次離心速度1950 rpm、離心時(shí)間10 min、離心溫度22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔位2制備的血小板含量為（4.53±1.25）×1010/袋，與另兩種參數(shù)相比最少，紅細(xì)胞含量為（0.68±0.15）×109/袋與另兩種參數(shù)相比最多；離心速度2030 rpm、離心時(shí)間10 min、離心溫度22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔位2制備的血小板含量為（4.64±1.11）×1010/袋，紅細(xì)胞含量為（0.37±0.25）×109/袋，兩指數(shù)均介于中間。離心速度1980 rpm、離心時(shí)間10 min、離心溫度22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔位2制備的手工濃縮血小板數(shù)量（4.98±1.36）×1010/袋，與另兩種參數(shù)相比最多，混入紅細(xì)胞（0.43±0.18）×109/袋，與另兩種參數(shù)相比最少，效果較理想。

從表2中統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，300 ml全血第1次離心速度2020 rpm、離心時(shí)間5.5 min、離心溫度22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔位2制備的血小板含量為（3.68±1.69）×1010/袋，與其它兩種參數(shù)相比介于中間，紅細(xì)胞含量為（0.83±0.25）×109/袋，與其它兩種參數(shù)相比最高；離心速度2120 rpm、離心時(shí)間為5.5 min、離心溫度22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔位2制備的血小板含量為（3.17±1.67）×1010/袋，與另兩種參數(shù)相比最少，紅細(xì)胞含量為（0.47±0.21）×109/袋，與其它兩種參數(shù)相比介于中間；離心速度2070 rpm、離心時(shí)間5.5 min、離心溫度22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔位2制備的手工濃縮血小板（3.77±1.42）×1010/袋，血小板含量最多，混入紅細(xì)胞（0.30±0.15）×109/袋，量最少，效果最理想。離心轉(zhuǎn)速過(guò)快、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致血小板下沉，富血小板血漿混入紅細(xì)胞較少，但血漿內(nèi)血小板含量少；轉(zhuǎn)速過(guò)慢，時(shí)間過(guò)短，導(dǎo)致紅細(xì)胞不能很好下沉，分離出來(lái)的富含血小板血漿中紅細(xì)胞嚴(yán)重超標(biāo)，血小板也不能最大限度分離出來(lái)。

操作者手法對(duì)制備手工濃縮血小板也是一個(gè)重要的影響因素，第一次離心時(shí)血袋一定要豎直，血袋上部分盡可能飽滿(mǎn)，避免折疊或塌陷，致紅細(xì)胞緊貼血袋不能下沉。離心完畢取血袋時(shí)一定要輕拿輕放，避免上層泛紅。分離富血小板血漿時(shí)，紅細(xì)胞與血漿交界處一定要減慢分離速度，避免形成漩渦，將紅細(xì)胞卷入上層血漿中。

通過(guò)以上分析，采用富血小板血漿法制備手工濃縮血小板，不同的離心參數(shù)對(duì)收集血小板數(shù)量和混入紅細(xì)胞數(shù)量均有影響，400 ml全血，轉(zhuǎn)速1980 rpm、10 min、22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔2；300 ml全血，轉(zhuǎn)速2070 rpm、5.5 min、22℃、加速檔位9、剎車(chē)檔2離心作為第一次輕離心制備的濃縮血小板含量最高，紅細(xì)胞含量較低，收集效果最好。

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編輯/楊倩