賈翠娜，李雷勇，田岳鳳，邱橋，王軍

1.山西中醫(yī)學(xué)院針灸推拿學(xué)院，山西 太原 030619；2.山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，山西 太原 030001

隔藥餅不同灸量對(duì)模型兔血細(xì)胞及免疫球蛋白水平的影響

賈翠娜1，李雷勇2，田岳鳳1，邱橋1，王軍1

1.山西中醫(yī)學(xué)院針灸推拿學(xué)院，山西 太原 030619；2.山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院，山西 太原 030001

目的觀察隔藥餅不同灸量對(duì)免疫抑制兔血細(xì)胞和免疫球蛋白水平的影響，探究量效差異可能的機(jī)制。方法采用腹腔注射環(huán)磷酰胺建立免疫抑制兔模型。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為空白組、模型組、隔藥餅灸3壯組、隔藥餅灸5壯組、隔藥餅灸7壯組。選用六味地黃湯組方制作藥餅，置于神闕、關(guān)元等穴，隔日1次，共灸10次。治療結(jié)束后第2日，靜脈取血，行血細(xì)胞系列、IgG、IgM和補(bǔ)體C3、C4水平的檢測。結(jié)果與空白組比較，模型組白細(xì)胞（WBC）、中性粒細(xì)胞（NEU）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、IgG、IgM、補(bǔ)體C3水平顯著降低，淋巴細(xì)胞（LYM）、單核細(xì)胞（MONO）水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，除隔藥餅3壯組HCT和IgM水平升高不明顯外，各治療組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT、PLT、IgG、IgM和補(bǔ)體C3水平顯著升高，LYM、MONO水平顯著降低（P＜0.01）；與隔藥餅灸3壯組比較，隔藥餅灸5壯組WBC、IgG和補(bǔ)體C3水平顯著升高，隔藥餅灸7壯組WBC、HGB和補(bǔ)體C3水平顯著升高（P＜0.01）。結(jié)論隔藥餅灸可有效改善環(huán)磷酰胺所致兔免疫功能低下，不同灸量效果有一定差異。

隔藥餅灸；不同灸量；環(huán)磷酰胺；血細(xì)胞；免疫球蛋白；兔

隔藥餅灸是將艾灸、藥物、穴位三者有機(jī)結(jié)合，將藥餅放于穴位上進(jìn)行艾灸，藥物和艾絨的藥性通過穴位、經(jīng)絡(luò)輸布滲透并深入體內(nèi)，發(fā)揮藥物歸經(jīng)的效能。從古代醫(yī)家對(duì)灸量的沿革、應(yīng)用、施灸規(guī)律、量效關(guān)系[1-3]，到現(xiàn)代研究者總結(jié)不同灸量對(duì)不同系統(tǒng)疾病的影響，以及灸量如何準(zhǔn)確控制等，都關(guān)注到艾灸量這一重要的變化因素在艾灸療效中的關(guān)鍵作用[4-5]。本研究從量效角度出發(fā)，觀察免疫抑制模型兔在施以隔藥餅不同艾灸量后血細(xì)胞和免疫分子的變化，分析不同灸量所產(chǎn)生效果的差異，為臨床應(yīng)用提供更佳的治療方案。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

新西蘭兔50只，3月齡，體質(zhì)量（2.5±0.3）kg，雌雄不限，太原市小店區(qū)豐澤園種養(yǎng)農(nóng)民專業(yè)合作社，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（晉）2015-0003。飼養(yǎng)于溫度20～25 ℃、相對(duì)濕度50%～70%環(huán)境。

1.2 藥物、艾條和儀器

注射用環(huán)磷酰胺，山西普德藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20140312；0.9%NaCl注射液，石家莊四藥有限公司，批號(hào)20140521；艾條，南陽臥龍漢醫(yī)艾絨廠。血細(xì)胞檢測儀（美國雅培），體液免疫檢測儀（美國貝克曼）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組

將50只新西蘭兔隨機(jī)分為空白組、模型組和隔藥餅灸3壯組、5壯組、7壯組，每組10只。

2.2 造模

參照文獻(xiàn)[6]方法。經(jīng)過前期預(yù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)給藥劑量和時(shí)間略作調(diào)整。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，除空白組外，其余4組每日上午腹腔注射生理鹽水稀釋環(huán)磷酰胺60 mg/kg，空白組注射等量生理鹽水。連續(xù)7 d。

2.3 藥餅及艾柱制備

將六味地黃湯藥物按組方 8∶4∶4∶3∶3∶3的比例混勻，打碎成粉末，過120目篩備用。臨用前用75%乙醇調(diào)勻，軟硬適中，制成直徑1 cm、厚0.3 cm的藥餅。取艾條中艾絨，制成底徑0.8 cm、高0.5 cm的圓錐形艾炷備用。

2.4 艾灸

選取神闕、關(guān)元、足三里（雙）、脾俞（雙）、腎俞（雙）8個(gè)穴位。穴位定位參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[7]。造模完成2 d后，將穴位處的毛剪去，施灸時(shí)先將動(dòng)物固定于兔臺(tái)，藥餅置于穴位上，艾炷置于藥餅上，線香點(diǎn)燃，燃盡更換，3個(gè)治療組根據(jù)不同分組每穴分別連灸3、5、7壯，隔日1次，共灸10次。

2.5 指標(biāo)檢測

治療結(jié)束后次日，將動(dòng)物麻醉，腹腔靜脈采血，觀察外周血細(xì)胞變化，檢測免疫球蛋白IgG、IgM和補(bǔ)體C3、C4。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SAS8.2統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以—x±s表示，組間比較采用方差分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 隔藥餅不同灸量對(duì)模型兔血細(xì)胞的影響

與空白組比較，模型組白細(xì)胞（WBC）、中性粒細(xì)胞（NEU）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）顯著降低，淋巴細(xì)胞（LYM）、單核細(xì)胞（MONO）顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，除隔藥餅3壯組HCT升高差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，各治療組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT、PLT顯著升高，LYM、MONO顯著降低（P＜0.01）；與隔藥餅3壯組比較，隔藥餅5壯組WBC顯著升高，隔藥餅7壯組WBC和HGB顯著升高（P＜0.01）；嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）、嗜堿性粒細(xì)胞（BASO）組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

4.2 隔藥餅不同灸量對(duì)模型兔免疫球蛋白和補(bǔ)體水平的影響

與空白組比較，模型組IgG、IgM和補(bǔ)體C3顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，除隔藥餅3壯組IgM升高不明顯外，各治療組IgG、IgM和補(bǔ)體C3顯著升高（P＜0.01）；與隔藥餅3壯組比較，隔藥餅5壯組IgG和補(bǔ)體C3明顯升高，隔藥餅7壯組補(bǔ)體C3顯著升高（P＜0.01）。結(jié)果見表2。

表1 各組兔血細(xì)胞水平比較（—x±s）

續(xù)表1

表2 各組兔免疫球蛋白和補(bǔ)體水平比較（mg/dL）

表2 各組兔免疫球蛋白和補(bǔ)體水平比較（mg/dL）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01；與隔藥餅灸3壯組比較，▲▲P＜0.01

組別 只數(shù) IgG IgM C3 C4空白組 10 38.54±10.62 3.70±1.45 1.58±0.22 0.23±0.04模型組 10 20.21± 5.31## 1.92±0.98## 0.78±0.14## 0.26±0.04隔藥餅灸3壯組 10 29.33± 8.54** 2.87±0.99 1.17±0.29** 0.23±0.07隔藥餅灸5壯組 10 41.73± 4.81**▲▲ 3.71±1.30** 1.56±0.11**▲▲ 0.24±0.07隔藥餅灸7壯組 10 30.35± 5.41** 3.65±0.37** 1.49±0.08**▲▲ 0.21±0.04

5 討論

隔藥餅灸較單純艾灸增加了藥物的作用，使艾絨在燃燒時(shí)產(chǎn)生溫?zé)幔龠M(jìn)機(jī)體對(duì)藥物的吸收，通過經(jīng)絡(luò)的滲透輸布，發(fā)揮藥性歸經(jīng)的效能，從而作用于機(jī)體各臟腑組織，提高機(jī)體的免疫防御能力。六味地黃湯在臨床上廣泛用于內(nèi)、外、婦、兒、皮膚、五官等各科疾病，為經(jīng)典的滋陰補(bǔ)腎方。研究發(fā)現(xiàn)，該方能提高正常小鼠脾臟巨噬細(xì)胞的功能，提高紅細(xì)胞免疫功能，對(duì)淋巴細(xì)胞免疫有增強(qiáng)作用，從多方面調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫系統(tǒng)，還可明顯增強(qiáng)體液免疫功能[8]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，隔藥餅灸不同年齡人群對(duì)血細(xì)胞有顯著調(diào)節(jié)作用，可增強(qiáng)紅細(xì)胞CD58的高表達(dá)，提高機(jī)體免疫力[7]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也表明，隔藥餅灸較單純艾灸更有效調(diào)節(jié)外周血細(xì)胞、CD4和CD8以改善機(jī)體免疫功能低下的狀態(tài)[9]。

灸量是影響灸效的重要因素之一。從古至今灸量都是中醫(yī)家關(guān)注的重點(diǎn)，古代醫(yī)家注重辨證施灸，結(jié)合患者病情特點(diǎn)、年齡和施灸部位等不同因素，對(duì)患者施以不同的艾灸量?！锻馀_(tái)秘要》卷三十九：“灸風(fēng)者，宜從少以至多也；灸寒者，宜從多以至少也；寒濕者，宜從多以至少也?！陛^全面認(rèn)識(shí)到施灸用量的規(guī)律和施灸足量的判定方法，同時(shí)闡述了不同施灸用量的適應(yīng)癥和不同施灸方法的用量特點(diǎn)[2]。現(xiàn)代學(xué)者在前人經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)相結(jié)合，總結(jié)了不同灸量對(duì)不同系統(tǒng)疾病的影響，提倡加強(qiáng)對(duì)灸量的研究和創(chuàng)新，促使灸量的應(yīng)用更加客觀化和標(biāo)準(zhǔn)化，為臨床應(yīng)用最佳治療方案提供了理論基礎(chǔ)[4]。

灸效的產(chǎn)生必定需要一定量的積累，但并非灸量越大效果越好。這可能與機(jī)體自身機(jī)制相關(guān)，機(jī)體的耐受程度是一定的，對(duì)艾灸產(chǎn)生熱力的吸收有一定限度，當(dāng)未達(dá)到或剛好達(dá)到自身機(jī)體的閾值時(shí)，產(chǎn)生的效果就會(huì)隨著灸量增大而增加。有研究表明，隔藥餅灸不同灸量治療寒凝型原發(fā)性痛經(jīng)，灸量越大所取得的效果越好[10]；不同灸量艾灸潰瘍性結(jié)腸炎大鼠，取得效果與使用灸量成正相關(guān)[11]。當(dāng)超出機(jī)體自身耐受的閾值時(shí)，其敏感度下降，所取得的效果就開始出現(xiàn)下降趨勢。有研究發(fā)現(xiàn)，不同灸量懸灸哮喘大鼠模型，結(jié)果懸灸15、30、60 min的效果呈遞增趨勢，而懸灸2 h與懸灸1 h的效果相當(dāng)[12]。另有實(shí)驗(yàn)觀察，對(duì)克羅恩病大鼠模型施以不同灸量發(fā)現(xiàn)，艾灸15 min和25 min的效果均好于艾灸5 min，并且兩組的效果相當(dāng)[13]。由此看出，灸效并未一直隨灸量的加大而增強(qiáng)，合適灸量就可達(dá)到較佳的治療效果，為臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。另外，臨床上還需要根據(jù)患者的病情特點(diǎn)、體質(zhì)、部位等因素，辨證施治，選擇合適的灸量，以獲取較佳治療效果，避免灸量過度導(dǎo)致不良反應(yīng)的發(fā)生。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組WBC、NEU、RBC、HGB、HCT、PLT、IgG、IgM、補(bǔ)體C3較空白組顯著降低，LYM、MONO顯著升高，提示免疫抑制動(dòng)物造模成功。不同灸量隔藥餅灸的3個(gè)治療組對(duì)免疫抑制兔的血細(xì)胞和免疫分子均有調(diào)節(jié)作用，由于灸量的不同，所產(chǎn)生的效果也有所差異。隔藥餅灸3壯組雖然提高了免疫抑制兔的免疫功能，但其效果總體上與隔藥餅灸5壯組和隔藥餅灸7壯組相差較多。隔藥餅灸5壯組和隔藥餅灸7壯組效果相當(dāng)，血細(xì)胞分析中隔藥餅灸7壯組的效果優(yōu)于隔藥餅灸5壯組，而免疫球蛋白和補(bǔ)體系統(tǒng)檢測顯示隔藥餅灸5壯組的效果較好。適度的灸量可以獲得較佳的效果，而效應(yīng)持續(xù)的時(shí)間將是我們后期實(shí)驗(yàn)探討的內(nèi)容。

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Effects of Different Quantities of Cake-separated Moxibustion on Blood Cells and Immunoglobulin in Model Rabbits

JIA Cui-na1, LI Lei-yong2, TIAN Yue-feng1, QIU Qiao1, WANG Ju1(1. Acupuncture and Massage College, Shanxi University of Traditional Chinese Medicine, Taiyuan 030619, China; 2. The Second Hospital of Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China)

ObjectiveTo observe the effects of different quantities of cake-separated moxibustion on blood cells and immunoglobulin in immunosuppressive rabbits; To study the possible mechanism of quantity-effect difference.MethodsImmunosuppressive rabbit model was established by intraperitoneal injection of cyclophosphamide. Rabbits were randomly divided into blank group, model group, cake-separated moxibustion 3 Zhuang group, 5 Zhuang group, 7 Zhuang group. Liuwei Dihuang Decoction was used to make herbal-cake, and was put on Shenque (RN8), Guanyuan (RN4), and other acupoints, once for every other day, 10 times in total. Venous blood was taken on the next day after finishing treatment, and the contents of blood cells series and IgG, IgM, complement C3 and complement C4 were detected.ResultsCompared with blank group, the levels of WBC, NEU, RBC, HGB, HCT, PLT, IgG, IgM, and complement C3 of model group significantly decreased, while the levels of LYM and MONO significantly increased (P＜0.01). Compared with model group, the increase of HCT and IgM in the cake-separated moxibustion 3 Zhuang group was not significant, the levels of WBC, NEU, RBC, HGB, HCT, PLT, IgG, IgM, and complement C3 in all treatment groups significantly increased, and LYM and MONO significantly decreased (P＜0.01). Compared with cake-separated moxibustion 3 Zhuang group, the levels of WBC, IgG, and complement C3 of cake-separated moxibustion 5 Zhuang group significantly increased, and the levels of WBC, HGB and complement C3 of cake-separated moxibustion 7 Zhuang group significantly increased (P＜0.01).ConclusionCake-separated moxibustion can improve the immune function under immunosuppressive state induced by cyclophosphamide, and different quantities have differences in efficacy.

cake-separated moxibustion; different quantities of moxibustion; cyclophosphamide; blood cells; immunoglobulin; rabbits

10.3969/j.issn.1005-5304.2017.04.013

R245

A

1005-5304(2017)04-0050-04

2016-07-08）

（

2016-07-26；編輯：華強(qiáng)）

國家自然科學(xué)基金（81373742）

田岳鳳，E-mail：tyfsx@163.com